實(shí)驗(yàn)十二 反相高效液相色譜法測定尼泊金酯

1、儀器分析實(shí)驗(yàn)六反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)定量法測定尼泊金酯14實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)定量法測定尼泊金酯反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)定量法測定尼泊金酯預(yù)習(xí)提示預(yù)習(xí)提示1.液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及操作技術(shù)2.什么是反相液相色譜，反相高效液相色譜的分離特點(diǎn)是什么。3.相對校正因子的意義及測定方法4.色譜分析內(nèi)標(biāo)定量法的原理及操作要點(diǎn)。一、目的要求一、目的要求1.熟悉高效液相色譜儀器基本結(jié)構(gòu)及操作技術(shù)；2.掌握HPLC保留值定性方法和內(nèi)標(biāo)定量方法。（

2、了解定制報(bào)告編輯方法）。二、基本原理二、基本原理1.高效液相色譜是以液體為流動相的色譜。其分離原理是利用不同物質(zhì)在由固定相和流動相構(gòu)成的體系中具有不同的分配系數(shù)，當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時，這些物質(zhì)隨流動相一起運(yùn)動，并在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配，從而使各物質(zhì)達(dá)到分離。正相色譜體系是固定相的極性大于流動相的極性，反之亦然。尼泊金酯（對羥基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均屬于強(qiáng)極性化合物，可用反相HPLC進(jìn)行分析，選用非極性的C18

3、烷基鍵合固定相，甲醇水溶液作流動相。2.色譜保留值法定性的依據(jù)在一定色譜條件下，每一種物質(zhì)都有一個確定的保留值和它相對應(yīng)。3.色譜定量依據(jù)絕對校正因子不易測定Amii?Afmiii?Amfiii?（相對）校正因子AAmmAmAmfffississiisii????4.對于試樣中某一種或幾種組分定量測定時可用內(nèi)標(biāo)定量法。內(nèi)標(biāo)法要領(lǐng)：定量試樣m試樣中加入定量內(nèi)標(biāo)物ms，LC分析后進(jìn)行相對定量計(jì)算。內(nèi)標(biāo)法定量計(jì)算公式：)(%mlugAAffV

4、mcisiisisisi???內(nèi)標(biāo)物要求：試樣中不存在的純物質(zhì)；加入量、理化性質(zhì)、峰位置均與被測組分接近。儀器分析實(shí)驗(yàn)六反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)定量法測定尼泊金酯34AAmmfissiwi??3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)記錄數(shù)據(jù)計(jì)算試樣中尼泊金乙酯的含量（mgL）)(%LmgAAffVmcisiisisisi???4.將所得色譜圖附于“實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理”后，并對應(yīng)色譜峰標(biāo)出相應(yīng)物質(zhì)的名稱。七、思考題七、思考題1.液相色譜儀的主要部件有哪些？試畫出HPLC流程方