生物本科畢業(yè)論文

1、銀杏葉提取物銀杏葉提取物EGBEGB對(duì)CClCCl4肝損傷小鼠的肝損傷小鼠的MDAMDA含量含量以及以及SODSOD活力的影響活力的影響學(xué)生：杜改亮指導(dǎo)教師：劉春卉（太原師范學(xué)院生物系20061312班學(xué)號(hào)：2006131201山西太原030031）摘要目的：探討銀杏葉提取物EGB(黃酮類)對(duì)CCl4肝損傷小鼠以MDA含量及SOD活力的影響，生產(chǎn)出一種有效保護(hù)肝臟的藥物。方法：清潔級(jí)昆明種小鼠♀♂兼用，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、吐溫對(duì)照組、模

2、型對(duì)照組、聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組（銀杏葉提取物低濃度、銀杏葉提取物中濃度、銀杏葉提取物高濃度），用四氯化碳皮下注射法建立慢性肝損傷模型，分別用生理鹽水或藥物灌胃治療。檢測(cè)肝組織中脂質(zhì)過氧化物丙二醛（MDA）的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力并加以探討。結(jié)果：EGB能顯著升高CCl4所致急性肝損傷小鼠其SOD活力，并可顯著降低該模型小鼠肝組織中MDA的含量。結(jié)論：銀杏葉提取物(黃酮類)對(duì)此模型小鼠的肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，可能與

3、降低、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)以及抗自由基損傷有關(guān).關(guān)鍵詞銀杏葉提取物CCl4肝損傷小鼠MDA含量；SOD活力近幾年來由于大量有害物質(zhì)的產(chǎn)生，人們可能在不經(jīng)意間，接觸大量有害物質(zhì)，例如CCL4CCL4致急性中毒性肝炎、肝中毒四氯化碳進(jìn)入肝細(xì)胞后，使線粒體膜的脂質(zhì)溶解，從而影響線粒體的結(jié)構(gòu)和功能，使酶蛋白質(zhì)的合成減少，造成酶的破壞，因而影響代謝功能和能量的合成，致死。新觀點(diǎn)認(rèn)為細(xì)胞壞死的關(guān)鍵是由于四氯化碳抑制了細(xì)胞膜上鈣泵活性，大量鈣離子內(nèi)流，

4、堆積于細(xì)胞內(nèi)的結(jié)果。此種動(dòng)物模型可觀察到急性肝炎的糖、脂肪、胞色素等方面的代謝障礙、肝解毒功能障礙，磺溴酚納滯留血清，轉(zhuǎn)氨酶明顯升高，迅速出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良、肝脂肪化變性及壞死等形態(tài)學(xué)變化。肝小葉中央壞死和肝細(xì)胞脂肪變性是其主要病變。有一種陽性藥聯(lián)苯雙酯，它是一種治療肝炎的降酶藥物，即可減輕因CCL4所致的肝臟損害，對(duì)CCL4所致的肝臟微粒體脂質(zhì)過氧化，CCL4代謝為CO有抑制作用，對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，雖治療肝臟的藥物很多，但效果不是很好。近

5、幾年國內(nèi)外學(xué)者對(duì)銀杏葉藥理進(jìn)行了大量的研究，銀杏（Ginkgobiloba）系銀杏科銀杏屬落葉喬木，為中生代孑遺的稀有物種，被稱為被子植物的“活化石”是我國特有植物。20世紀(jì)以來，發(fā)現(xiàn)其主要藥用成分為黃酮類和萜內(nèi)酯類化合物。藥理試驗(yàn)表明銀杏黃酮類化合物有使冠狀血管及其他血管擴(kuò)張的作用。銀杏黃酮有抗自由基、抑制脂質(zhì)過氧化作用?？芍苯忧宄?2一、.OH一，捕捉脂化自由基、脂氧自由基和烷自由基等，通過對(duì)這些自由基起一種氫原子供用而終止自由基連

6、鎖反應(yīng)鏈，從而阻止和抑制氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化的病理性加劇，減輕氧自由基和脂質(zhì)過氧化損傷。推測(cè)EGB對(duì)肝損傷也有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)就是通過設(shè)計(jì)一系列的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，研究EGB是否確實(shí)有此作用。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料2機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸（PUFA），引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基可內(nèi)過氧基，以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化

7、作用不公把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物，而且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)，放大活性氧的作用。因此，初始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無害的，另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙，甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸（PUFA）的過氧化引起細(xì)胞損傷，而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測(cè)試MDA的量常常可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA

8、的測(cè)定常常與SOD的測(cè)定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接的反應(yīng)了機(jī)本細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，通過SOD與MDA的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。1.4.1.2MDA試劑盒測(cè)試原理：過氧化脂質(zhì)降狗解產(chǎn)物中的丙二醛（MDA）可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。因底物為硫代巴比妥（TBA）所以此法稱TBA法。1.4.1.3測(cè)試所需儀器

9、設(shè)備可見光分光光度計(jì)，可調(diào)到95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內(nèi)放幾個(gè)去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個(gè)孔，以便水的進(jìn)入，用來代替水浴箱。），離心機(jī)。1.4.1.4100T試劑盒組成與配制1.4.1.4.1試劑一：液體20ml1瓶，室溫保存。（天冷時(shí)會(huì)凝固，每次測(cè)試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應(yīng)用）。1.4.1.4.2試劑二：液體12ml1瓶，用時(shí)每瓶加340ml雙蒸水混勻，4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。1.4.1.4.3

10、試劑三：粉劑1支，用時(shí)將粉劑加入到90℃100℃的熱雙蒸水60ml中，（在溶解過程中可適當(dāng)加熱），充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至60ml再加冰醋酸60ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注）1.4.1.4.4標(biāo)準(zhǔn)品：10nmolml四乙氧基丙烷5ml1瓶，4℃冷藏。測(cè)試盒冷藏至少可保存一年。[注]：冰醋酸又名乙酸，一般的醫(yī)藥公司、化劑公司均有售，要購AR級(jí)即分析純級(jí)的乙酸較好，乙酸含量為99%以上。1.4.1.550T試劑盒組成與配制

11、：1.4.1.5.1試劑一：液體10ml1瓶，室溫保存。（天冷時(shí)會(huì)凝固，每次測(cè)試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應(yīng)用）。1.4.1.5.2試劑二：液體6ml1瓶，用時(shí)每瓶加340ml雙蒸水混勻，4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。1.4.1.5.3試劑三：粉劑1支，用時(shí)將粉劑加入到90℃100℃的熱雙蒸水30ml中，（在溶解過程中可適當(dāng)加熱），充分溶解后用雙蒸水補(bǔ)足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注