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文檔簡介
1、分子生物學(xué)部分開發(fā)實驗,植物遺傳親緣關(guān)系研究,實驗?zāi)康?運用PCR-RAPD 分子標(biāo)記技術(shù)，對不同種植物的基因組DNA進(jìn)行PCR擴增，獲得指紋圖譜。同時運用統(tǒng)計分析方法，計算不同物種的遺傳距離，得出物種間的親緣關(guān)系。,實驗材料,植物樣品: 花椰菜1，花椰菜2，花椰菜3,實驗試劑及儀器,10×buffer: 500mM KCl 100mM Tris-HCl (pH
2、9.0) 0.1% 明膠 1% TritonX-100MgCl2 2.5mM４×dNTP: 1mM引物： 3種RAPD引物 5.0uM模板： 20ng/μlTaq酶： 5u/μlPCR儀，
3、凝膠成像系統(tǒng)，電泳系統(tǒng),實驗方法,１．向無菌的500μl Eppendorf管中依次加入以下溶液。反應(yīng)物 體積 10×buffer 2.5μl 4×dNTP(1mM) 2.5μl MgCl2 (25mM) 2
4、.5μl無菌水 10.5μlTaq酶 (1U/ul) 1μl引物 2μl 模板DNA(20ng) 4μl 總體積 25μl,,2．反應(yīng)體系混勻，離心3．在ＰＣＲ儀上按以下方式循環(huán)94℃變性
5、 １分鐘36℃退火 １分鐘72℃延伸 ２分鐘經(jīng)過40個循環(huán)4．７２℃延伸反應(yīng)7分鐘。5．取20μl反應(yīng)液加4μl Loading buffer在6. 1.5％瓊脂糖凝膠上120伏，電泳2小時。7. 在凝膠成像系統(tǒng)上觀察記錄實驗結(jié),根據(jù)RAPD擴增結(jié)果計算:1.遺傳相似性系數(shù) S S = 2 Nxy / (Nx + Ny) Nxy為種間共有的擴增帶，Nx為X種具有的擴增帶，Ny為Y種具有
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