目的基因驗(yàn)證課件

1、目的基因驗(yàn)證,,酶切驗(yàn)證方向,Sense,Anti-sense,Promoter,Promoter,Coding sequence,Coding sequence,NOS,,NOS,雙酶切,單酶切,,酶切位點(diǎn)的選擇,1、載體上有，目的片段內(nèi)部也有，但最好都分別只有一個(gè)位點(diǎn)；2、目的片段上的酶切位點(diǎn)不要位于片段中央附近，要選取能夠區(qū)分大小的位點(diǎn)；,1、用連接的兩種酶驗(yàn)證；2、參照單酶切。,,酶切驗(yàn)證方向的方法很靈活多變，具體情況具體分析

2、。,pCxsn-PtWRKY60的方向驗(yàn)證,ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGGCAGAAAGAGAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCT

3、TGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCATCACCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGG

4、TCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACA

5、GAAGGAAAATCCTTCTAAAAGATCCATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGA,PtWRKY60 CDS序列,pCxsn載體,NEBcutter分析片段上的酶切位

6、點(diǎn),,10ul體系酶切pCxsn-PtWRKY60,Plasmid: 8.75ul; M buffer: 1ul; HindIII: 0.25ul.37℃水浴2-3h,1541bp,1117bp,AS,S,測(cè)序,測(cè)序的樣本可以為：菌液、質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物、其他；,測(cè)序要提供測(cè)序引物；,一次反應(yīng)大約可測(cè)800bp的長(zhǎng)度，如果目的片段超過(guò)這一長(zhǎng)度可以選擇測(cè)通、雙向，或者是單向walking等方法。,測(cè)序單,測(cè)序結(jié)果,波峰信號(hào),序列信息,