病原微生物樣本采集保存運輸張凡非

1、1,病原微生物樣本采集保存包裝運輸,山西省疾病預防控制中心張凡非,2,實驗室的作用,突發(fā)事件的處理，不僅是對疾控機構，甚至是對一個城市醫(yī)療管理水平和政府行政管理水平的嚴峻挑戰(zhàn)。疾控機構應在最短時間內采取規(guī)范、科學、符合標準要求的快速行動，以判斷原因，采取有效對策。質量和速度是專業(yè)技術和管理水平等綜合素質、反應能力的整體體現。,3,實驗室的作用,傳染病的診斷需要綜合實驗室檢驗結果。傳染病的診斷應包括流行病資料、臨床病史、體格檢查

2、以及實驗室檢驗結果等。病原體的檢出是確診傳染病的主要依據。應盡一切可能分離到病原體，特別是細菌、真菌等。病毒感染因病原不易被檢出，培養(yǎng)需較長時間，一般實驗室難以開展病毒分離工作，因此在大多數情況下依賴免疫學試驗而確立診斷。此外，還有分子生物學檢測、影像檢查、活體組織檢查等。,4,實驗室的作用,實驗室在確認疫情性質、追蹤傳染病的來源、摸清潛在的傳染源、為感染者尋找有效的治療措施等方面發(fā)揮著重要的作用。 傳染病的預

3、防控制離不開實驗室！,5,樣本的重要性,科學合理地采集、保存、包裝和運輸樣本，直接影響檢驗結果的準確性和可靠性。,6,樣本采集決策,樣本采集的質量是獲得準確可靠的實驗檢測結果的重要因素。 樣本采集的質量主要取決于樣品采集的決策。,7,樣本采集決策,對樣本采集決策者的要求1.有廣博的知識，最好是懂臨床、流行病、實驗室 2.對采樣質量能夠進行正確評價3.對實驗室進行評估4.微生物標本的特殊性,8,樣本采集決策

4、,采集什么樣本，樣本送檢的目的是什么？在什么時間什么條件下采集？ 如何采集（方法和器材）？ 如何保存與運送？,在臨床診斷和流行病學分析的基礎上檢驗項目明確，不能包羅萬象。,9,樣本采集要求,采樣人采樣時間樣本采集器材樣本標識送檢單保存運輸條件防護用品,10,樣本采集要求,采樣人： 要有生物安全意識 掌握樣本采集技術,11,采樣時間： 一般在懷疑細菌感染時應盡量在急性發(fā)病期和使用抗生素之前

5、采集標本，進行細菌的分離培養(yǎng)，否則這種標本在分離培養(yǎng)時要加藥物拮抗劑。,樣本采集要求,12,采樣時間： 作病毒分離和病毒抗原檢測的標本，應在發(fā)病初期和急性期采樣，因為此時病毒在體內大量繁殖，檢出率高，病毒分類標本最好在發(fā)病1～3天內采取。,樣本采集要求,13,抗體檢測樣本采樣時間：①血清：用于檢測IgM的血清一般采于發(fā)病1個月內；用于檢測IgG的血液應收集兩次，第一次于發(fā)病初期（1～3天），越早越好，第二次血樣一般在恢復期

6、（第一次采血后3～4周）。雙份血清同時檢測，如抗體滴度有4倍以上升高才有意義。 ②腦脊液：一般于出現神經癥狀時采集，查IgM只需一份腦脊液，而查IgG則需收集兩次，時間間隔同前所述。,樣本采集要求,14,樣本采集要求,樣本采集器材：樣本容器、記號筆、送檢單、酒精燈、剪刀、酒精棉等采集標本應使用無菌容器，一個標本一個容器。對容器基本要求是選耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏。能承受空中地面運送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。,15

7、,樣本采集要求,樣本標識： 字跡清晰可辨 字跡不脫落 每個患者應用惟一的統(tǒng)一編號，它是實驗室結果和標本及患者之間的聯(lián)系，能夠準確影響到進一步的調查及對疫情的控制措施。,16,樣本采集要求,送檢單： 編號與樣本標識一致 信息全面，填寫完整規(guī)范（ 至少包括：編號、姓名、性別、年齡、發(fā)病日期、采集日期、樣本種類、樣本量；最好提供：臨床癥狀、采樣前是否

8、用抗生素、疫苗接種史、職業(yè)、接觸史、住址、患者聯(lián)系方式、采樣人聯(lián)系方式。） 在暴發(fā)調查中個案調查的信息應和標本同時收集，并且能夠互相符合。,17,樣本采集要求,保存運輸條件用于分離細菌的標本，應選擇合適的培養(yǎng)基和推薦保存溫度，這取決于運送時間的長短及不同病原微生物對干燥、溫度、營養(yǎng)、pH值的耐受能力。用于分離培養(yǎng)細菌的標本應在運送培養(yǎng)基中運送并保存于合適的溫度。能確保目標細菌的存活并抑制其他微生物的過度生長。,18,

9、樣本采集要求,保存運輸條件用于分離細菌的標本，一般保存在4℃～8℃，但一些對低溫敏感的細菌除外，如志賀氏菌、腦膜炎雙球菌、肺炎球菌?？傊畱M快分離。,19,樣本采集要求,保存運輸條件用于分離病毒的標本，一般應放在保溫容器（0?C～4?C）里，最好放置不超過2天，如不能立即分離病毒時，最好在－70?C或-70℃以下凍存。不應保存在-20℃。標本分裝保存，盡量避免反復凍融。如懷疑是寄生蟲，所取糞便中加入10%福爾馬林和PVA防腐劑（

10、充分混合）。,20,樣本采集要求,保存運輸條件用于檢測抗原或抗體的標本，可在4?C～8?C保存24～48h，在－20?C保存時間更長。檢測抗體的血清，可在4?C保存約一個星期，最長10天；超過一周必須在-20?C下冷凍。,21,樣本采集要求,防護用品采樣中避免標本污染和人員感染和都是至關重要的，應采用防護措施，注意安全操作。采樣應戴手套；根據生物危害程度，穿工作衣/防護服、使用口罩/N95口罩、護目鏡。使用過的防護用品裝入廢

11、棄物專用袋內。,22,糞便的采集方法,一份約450g的冷凍糞便樣本送至實驗室。樣本量是否滿足檢驗需求？合適嗎？實驗室如何保存處理該樣本？,該怎么辦？,23,糞便的采集方法,自然排出糞便取樣：選擇有粘液、膿血部位。成形5g，稀便3~5ml。放入密封無菌容器送檢。腸拭子：應用專用器材，如能立即接種時可用棉拭子插入肛門3~5cm，輕輕轉動拭子，取出糞便。不能立即接種時，要放入保存液內送檢。,24,尿液的采集方法,留中段尿法：先消毒外陰，

12、再消毒尿道口，然后用生理鹽水再沖洗，以免尿內混入消毒液，用無菌容器取中段尿10~20ml，根據送檢的項目處理，可離心后取沉淀物培養(yǎng)，也可以不離心直接計數無菌導尿,25,血液培養(yǎng)標本的采集方法,無菌操作采集靜脈血液，將血液直接注入培養(yǎng)瓶內，最好是用細菌培養(yǎng)液，有不同的培養(yǎng)瓶可供選擇，如厭氧、微需氧、需氧等。如無密封培養(yǎng)瓶，可選用無菌三角燒瓶，嚴格無菌操作，以免污染無菌帶有抗凝劑的小瓶，最好帶羅帽，每項量最少5ml，根據培養(yǎng)項目確定采

13、集量。,26,腦脊液標本的采集方法,由有經驗醫(yī)生在無菌條件下腰錐穿剌，最好是床邊接種采樣量3~5ml，也可取離心沉淀物培養(yǎng),27,咽拭子標本的采集方法,根據不同病種，采集相應部位的分泌物。猩紅熱病人，采集咽部紅腫、化膿性分泌物。白喉病人：在扁桃體兩側取偽膜，采集偽膜往往需用無菌鑷子夾取。流腦病人：在鼻咽腔流感/人禽流感：雙側扁桃體及咽后壁。麻疹：鼻咽部和咽喉部,28,皮膚創(chuàng)傷標本的采集方法,多見于炭疽、結核病，腺鼠疫（淋巴結破

14、損）。方法：先用鹽水拭子擦表面，如沒破，可用無菌注射器抽取液體。如破潰，擦洗后，可取深部膿血液。注意：采集后同時涂片染色鏡檢。,29,樣本的包裝與運輸,30,依 據,二○○五年十二月二十八日發(fā)布的衛(wèi)生部第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》,二○○六年二月一日起執(zhí)行?！吨腥A人民共和國傳染病防治法》《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《人間傳染的病原微生物分類名錄》,31,分 類,《人間傳染的

15、病原微生物名錄》中規(guī)定的第一類、第二類病原微生物菌（毒）種或樣本。 《人間傳染的病原微生物名錄》中第三類病原微生物運輸包裝分類為A類的病原微生物菌（毒）種或樣本。疑似高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本 。,32,批 準,運輸第三條規(guī)定的菌（毒）種或樣本（以下統(tǒng)稱高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本），應當經省級以上衛(wèi)生行政部門批準。未經批準，不得運輸。,33,申請單位,從事疾病預防控制、醫(yī)療、教學、科研、菌（毒）種保藏以及生物制品生

16、產的單位，因工作需要，可以申請運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本。,34,運輸申請,申請單位在運輸前應當向省級衛(wèi)生行政部門提出申請，并提交以下申請材料（原件一份，復印件三份）：,35,申請材料,可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸申請表；法人資格證明材料（復印件）；接收高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的單位(以下簡稱接收單位)同意接收的證明文件； 第七條第（二）、（三）項所要求的證明文件（復印件）；容器或包裝

17、材料的批準文號、合格證書（復印件）或者高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸容器或包裝材料承諾書；其它有關資料。,36,接收單位應具備的條件,具有法人資格；具備從事高致病性病原微生物實驗活動資格的實驗室；取得有關政府主管部門核發(fā)的從事高致病性病原微生物實驗活動、菌（毒）種或樣本保藏、生物制品生產等的批準文件。,37,多次運輸申請,在固定的申請單位和接收單位之間多次運輸相同品種高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，可以申請多次運輸。

18、多次運輸的有效期為6個月；期滿后需要繼續(xù)運輸的，應當重新提出申請。,38,申請在省、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內運輸,申請在省、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內運輸的，由省、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生行政部門審批。省級衛(wèi)生行政部門應當在5個工作日內做出是否批準的決定；符合法定條件的，頒發(fā)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本準運證書》;不符合法定條件的，應當出具不予批準的決定并說明理由。,39,申請跨省、自治區(qū)、直轄市運輸,申請跨省、自治

19、區(qū)、直轄市運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，應當將申請材料提交運輸出發(fā)地省級衛(wèi)生行政部門進行初審；對符合要求的，省級衛(wèi)生行政部門應當在3個工作日內出具初審意見，并將初審意見和申報材料上報衛(wèi)生部審批。,40,申請跨省、自治區(qū)、直轄市運輸,衛(wèi)生部應當自收到申報材料后3個工作日內做出是否批準的決定。符合法定條件的，頒發(fā)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本準運證書》；不符合法定條件的，應當出具不予批準的決定并說明理由。,4

20、1,突發(fā)事件運輸申請,對于為控制傳染病暴發(fā)、流行或者突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處理的運輸申請，省級衛(wèi)生行政部門與衛(wèi)生部之間可以通過傳真的方式進行上報和審批；需要提交有關材料原件的，應當于事后盡快補齊。,42,向中國疾病預防控制中心運送申請,根據疾病控制工作的需要，應當向中國疾病預防控制中心運送高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，向中國疾病預防控制中心直接提出申請，由中國疾病預防控制中心審批；符合法定條件的，頒發(fā)《可感染人類的高致病性病原微

21、生物菌（毒）種或樣本準運證書》；不符合法定條件的，應當出具不予批準的決定并說明理由;中國疾病預防控制中心應當將審批情況于3日內報衛(wèi)生部備案。,43,運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的容器或包裝材料應當達到國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術細則》（Doc9284包裝說明PI602）規(guī)定的A類包裝標準，符合防水、防破損、防外泄、耐高溫、耐高壓的要求，并應當印有衛(wèi)生部規(guī)定的生物危險標簽、標識、運輸登記表、警告用語和提示用語。,包

22、裝要求,44,專人護送,運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本，應當有專人護送，護送人員不得少于兩人；申請單位應當對護送人員進行相關的生物安全知識培訓；在護送過程中采取相應的防護措施。,45,運輸實施,陸路運輸：有關單位或者個人不得通過公共電（汽）車和城市鐵路運輸病原微生物菌（毒）種或者樣本（條例第十二條）。水路運輸民用航空運輸：申請單位應當憑省級以上衛(wèi)生行政部門或中國疾病預防控制中心核發(fā)的《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒

23、）種或樣本準運證書》到民航等相關部門辦理手續(xù)。,承運單位憑批準文件運輸！,46,運輸實施,通過民航運輸的，托運人應當按照《中國民用航空危險品運輸管理規(guī)定》（CCAR276）和國際民航組織文件《危險物品航空安全運輸技術細則》(Doc9284)的要求，正確進行分類、包裝、加標記、貼標簽并提交正確填寫的危險品航空運輸文件，交由民用航空主管部門批準的航空承運人和機場實施運輸。如需由未經批準的航空承運人和機場實施運輸的，應當經民用航空主管部門批準

24、。,47,生物安全注意事項,高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本在運輸之前的包裝以及送達后包裝的開啟，應當在符合生物安全規(guī)定的場所中進行。申請單位在運輸前應當仔細檢查容器和包裝是否符合安全要求，所有容器和包裝的標簽以及標本登記表是否完整無誤，容器放置方向是否正確。,48,運輸后續(xù)工作,《運輸管理規(guī)定》第十六條 在運輸結束后，申請單位應當將運輸情況向原批準部門書面報告。,49,處罰,對于違反本規(guī)定的行為，依照《病原微生物實驗室生物安全管理

25、條例》第六十二條、六十七條的有關規(guī)定予以處罰。,50,出入境管理,高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的出入境，按照衛(wèi)生部和國家質檢總局《關于加強醫(yī)用特殊物品出入境管理衛(wèi)生檢疫的通知》進行管理。,51,,第十九條 本規(guī)定自2006年2月1日起施行。,52,樣品的包裝,感染性物質是那些已知或有理由認為含有致病原的物質。致病原是指能使人或動物感染疾病的微生物（包括病毒、細菌、支原體、衣原體、立克次體、放線菌、真菌和寄生蟲等）和其他因子，如朊病

26、毒。國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術細則》中將感染性物質分為A、B 兩類。,感染性物質,53,樣品的包裝,指在運輸過程中與之接觸能對健康人或動物造成永久性殘疾或致命疾病的感染性物質。此處“接觸”系指感染性物質離開保護性包裝與人或動物的身體接觸或經呼吸道吸入的情況。A類感染性物質使人染病或使人和動物都染病者聯(lián)合國編號為UN2814，其運輸專用名稱為危害人的感染性物質；僅使動物染病者聯(lián)合國編號為UN2900，其運輸專用名稱為僅危

27、害動物的感染性物質。,A類感染性物質,54,樣品的包裝,不符合列入A類標準的感染性物質。其聯(lián)合國編號為UN3373。運輸專用名稱為生命物質B類。,B類感染性物質,55,實驗室分級-危害程度分類-感染性物質包裝分類,56,樣品的包裝,衛(wèi)生部第45號令“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定 ” 第十二條規(guī)定 運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的容器或包裝材料應當達到國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術細則》

28、（Doc9284包裝說明PI602）規(guī)定的A類包裝標準，符合防水、防破損、防外泄、耐高溫、耐高壓的要求，并應當印有衛(wèi)生部規(guī)定的生物危險標簽、標識、運輸登記表、警告用語和提示用語。,57,樣品的包裝,這一包裝系統(tǒng)可以應用于所有的感染性物質，由以下三層包裝組成： 1.主容器：初級容器防水、防滲漏，內裝標本。其外包裹有的吸收材料。 樣品必須保存于大小合適、帶膠墊的外螺旋蓋的塑料管中， 擰緊蓋、封好管口（如用封口膜或防水的塑料膠

29、帶袋）管外要用油性筆注明標本的編號、種類、姓名及采樣日期、采集量。,58,樣品的包裝,2.次級包裝：次級包裝為第二層持久的、防水、防滲漏的包裝，它封閉和保護初級容器。多個包有緩沖材料的初級容器可放于同一個次級包裝中，但是，這要求同時也放入足夠的吸收材料以確保一旦發(fā)生泄漏后所有液體都可被吸收。 標本有關信息填寫“×××送檢單”，用一塑料袋密封，并粘在塑料容器外面。,59,樣品的包裝,3.外層包裝：

30、次級包裝包裹有合適的緩沖材料后，即可被裝入外層運輸包裝。外層運輸包裝保護其內容物免受外界影響，如運輸過程中的物理損壞。樣品的容器要使用能夠承受不少于95Kpa壓力的高質量的防水包裝材料并且密封，以防止運輸發(fā)生內容物的外泄。,60,樣品的包裝,感染性物質外包裝件上必須做出如下的使用標記：1）托運人名稱地址和收貨人名稱地址。2）運輸專用名稱：A類感染性物質為：感染性物質；B類感染性物質為：生命物質。3）聯(lián)合國編號（UN編號）4）運送

31、A、B類感染性物質的凈含量： A類感染性物質要標出； B類感染性物質可以不標出。5）標記負責人姓名和聯(lián)系電話。6）如使用干冰作制冷劑，應標出Dry Ice(干冰)、UN1845 以及干冰的凈重。7）生物危險標識。,61,樣品的包裝,冷凍劑的使用:1)在使用冰、干冰或其他冷凍劑進行冷藏運輸時，冷凍劑必須放在輔助容器和外包裝之間，內部要有支撐物固定，當冰或干冰消耗以后，仍可以把輔助容器固定在原位置上。如使用冰，外包裝必須不透水。如

32、果使用干冰，外包裝必須能夠排放二氧化碳氣體，防止壓力增加造成容器破裂。在使用冷凍劑的溫度下，主容器和輔助容器必須能保持良好性能，在冷凍劑消耗完以后，仍能承受運輸中的溫度和壓力。,62,樣品的包裝,冷凍劑的使用:2)當使用液氮對樣品進行冷藏時，必須保證主容器和輔助容器能適應極低的溫度。此外，還必須符合其他有關液氮的運輸要求。3)主容器和輔助容器須在使用制冷劑的溫度下，以及在失去制冷后可能出現的溫度和壓力下保持完好無損。主容器和輔助容器

33、必須在無泄漏的情況下能夠承受95kPa的內壓，并能保證在－40℃到＋55℃的溫度范圍內不被損壞。,A類感染性物質的包裝與標簽,63,B類感染性物質的包裝與標簽,64,A類、B類感染性物質運送外包裝的區(qū)別,,,,主容器,,,外包裝放置方向標識,高致病性病原微生物危險標簽,高致病性病原微生物運輸登記表,,,79,高致病性病原微生物 運輸登記表,生物危險標識,省內運輸審批流程圖,運輸申請單位,提交申請材料,,,運輸

34、單位省級衛(wèi)生行政部門,頒發(fā)《準運證》或出具不予批準的決定及理由,5個工作日,核準申請的單位，在運輸任務結束后，書面報告運輸情況,審批,,,,,,接到準運證或其傳真件后運輸,運輸審批流程圖,運輸申請單位,衛(wèi)生部科教司,中國CDC(實驗室管理處),,3日內報衛(wèi)生部,提出申請,備案,,,運輸單位省級衛(wèi)生行政部門,頒發(fā)核發(fā)《準運證》或出具不予批準的決定及理由,核準申請的單位，在運輸任務結束后，書面報告運輸情況,,初審（3個工作日）,審批,,