遺傳性耳聾檢測(cè)

1、遺傳性耳聾基因檢測(cè)的臨床實(shí)踐,右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院：韋葉生醫(yī)學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師,概 述,,什么是遺傳性耳聾 ？遺傳性耳聾基因檢測(cè)內(nèi)容是什么？如何檢測(cè)？,,遺傳性耳聾指的是由于基因和染色體異常所致的耳聾。這種疾病是由父母的遺傳物質(zhì)（包括染色體及位于其中的基因）發(fā)生了改變傳給后代而引起的耳聾，并且在于孫后代中以一定數(shù)量出現(xiàn)。 遺傳性耳聾分為綜合征性遺傳性聾及非綜合征性遺傳性聾兩大類。前者指除了耳聾以外，同

2、時(shí)存在眼、骨、腎、皮膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的30%；后者只出現(xiàn)耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占70%。,遺傳性耳聾,,,,我國(guó)聽力殘疾者 2780 萬,《第二次全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查統(tǒng)計(jì)公報(bào)》 2006.12,0 -7歲聽障兒童 80 萬,每年新生聾兒 3.5 萬,（ NTD: 8-10萬

3、/ 唐氏 2-3萬 / 地貧 7500 / DMD 3000）,,,,為什么要關(guān)注耳聾？,4,耳聾離我們有多遠(yuǎn)？,5,目前孩子耳聾能治療嗎？,無藥可治，聽力損失不可逆 人工耳蝸植入價(jià)格昂貴 由聾至啞 存在再生育風(fēng)險(xiǎn),6,每出生一個(gè)先天性聾兒，國(guó)家及家庭要花費(fèi)70萬人民幣（不包含人工耳蝸和語(yǔ)言康復(fù)訓(xùn)練）,無法在產(chǎn)前預(yù)測(cè)遺傳性耳聾風(fēng)險(xiǎn)--家庭不幸 新生兒普通聽力篩查存在漏檢遲發(fā)性耳聾、藥物性耳聾--引發(fā)糾紛,7,目前耳聾能預(yù)防

4、嗎？,我們的疑問？,為什么聽力正常的夫婦會(huì)生育出一個(gè)聾孩子？,為什么有的孩子，出生時(shí)聽力正常，幼年或成年的時(shí)候，聽力就迅速下降？,為什么有的人打針吃藥都沒事，有的人，打了一針聾了？,8,耳聾的原因是什么？,9,9,耳 聾,非綜合征型（70%）,遺傳因素 (約60%),常染色體隱性（77%）,環(huán)境因素（約20%）,綜合征型（30%）,Alport 綜合征Pendred綜合征Waardenburg綜合征BOR綜合征U

5、sher綜合征……等四百余種,細(xì)菌感染病毒感染耳毒性藥物外傷磕碰聲損傷……,,常染色體顯性（22%）,X—連鎖（ ~ 1%）,線粒體 ( <1% ),不明原因（約20%）,,很可能是遺傳因素,,,,,,,,,,,,流調(diào)單位：中國(guó)人民解放軍聾病分子診斷中心流調(diào)范圍：全國(guó) 28 個(gè)省市樣品規(guī)模：3552 例,10,全國(guó)耳聾流行病學(xué)調(diào)查,中國(guó)人群遺傳性耳聾的特點(diǎn),11,耳聾基因突變攜帶者 7800萬人,四種

6、主要致聾基因,12,導(dǎo)致生下來就聾,,GJB2：先天性聾啞基因,對(duì)震蕩高度敏感,,PDS：大前庭水管綜合征,“一針致聾” 母系遺傳,,12SrRNA：藥物敏感性耳聾基因,后天高頻聽力損失,,GJB3：我國(guó)克隆的第一個(gè)遺傳病基因,遺傳性耳聾基因21位點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目,13,項(xiàng)目屬性,項(xiàng)目名稱：遺傳性耳聾基因突變檢測(cè)（2

7、1位點(diǎn)）方法學(xué)： SNaPshot (單堿基延伸法)檢測(cè)基因：GJB2、GJB3、 SLC26A4、線粒體DNA 12S rRNA。 共檢測(cè)21個(gè)位點(diǎn)。覆蓋率： 21位點(diǎn)覆蓋80%非綜合征耳聾位點(diǎn)標(biāo)本類型：干濾紙血片（新生兒） 全血1-3mlEDTA-K/Na或枸櫞酸鈉抗凝（成人）報(bào)告時(shí)間：7工作日內(nèi)其他： 患者需簽署基因檢測(cè)知情同意書,S

8、NaPshot法　該技術(shù)由美國(guó)應(yīng)用生物公司（ABI）開發(fā)，是基于熒光標(biāo)記單堿基延伸原理的分型技術(shù)，也稱小測(cè)序，主要針對(duì)中等通量的SNP分型項(xiàng)目。在一個(gè)含有測(cè)序酶、四種熒光標(biāo)記ddNTP、緊臨多態(tài)位點(diǎn)5’-端的不同長(zhǎng)度延伸引物和PCR產(chǎn)物模板的反應(yīng)體系中，引物延伸一個(gè)堿基即終止，經(jīng)ABI測(cè)序儀檢測(cè)后，根據(jù)峰的移動(dòng)位置確定該延伸產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn)，根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類，從而確定該樣本的基因型。對(duì)于PCR產(chǎn)物模板可通過多重PCR

9、反應(yīng)體系來獲得。通常用于10-30個(gè)SNP位點(diǎn)分析。,熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率,16,熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率,17,,,,,,,,,,熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率,標(biāo)本要求,19,新生兒濾紙血片,兒童、成人抗凝血（EDTA/枸櫞酸鈉抗凝）,耳聾基因篩查的對(duì)象？,20,,丈夫,婚齡女性,孕婦,耳聾產(chǎn)前篩查對(duì)象,21,孕婦耳聾基因產(chǎn)前篩查時(shí)間,孕早期、孕中期 最佳檢測(cè)時(shí)機(jī)：越早越好，孕婦建檔時(shí)（12周）或做唐

10、篩時(shí)（16周）是合適的時(shí)機(jī)檢測(cè)要求： 采集2-3ml靜脈血 采血者不需要空腹采血,22,耳聾基因產(chǎn)前篩查流程,女方或孕婦,遺傳性耳聾發(fā)生率低,產(chǎn)前咨詢，用藥及生活指導(dǎo),丈夫耳聾基因檢測(cè)（測(cè)序）,胎兒產(chǎn)前診斷（如羊水，測(cè)序）,產(chǎn)前咨詢，用藥及生活指導(dǎo),陰性,陽(yáng)性,線粒體和GJB3基因,GJB2和PDS基因,陰性,陽(yáng)性,23,海淀婦幼醫(yī)院,24,4對(duì)夫婦行產(chǎn)前診斷，1例胎兒確診為遺傳性耳聾，

11、家庭選擇終止妊娠。,檢測(cè)孕婦配偶,檢測(cè)孕婦配偶,2009.12-2010.4,上海新華醫(yī)院,25,5對(duì)夫婦行產(chǎn)前診斷，1例胎兒為GJB2基因235delG及V37I復(fù)合雜合。,檢測(cè)孕婦配偶,檢測(cè)孕婦配偶,2010.7-2011.6,26,301醫(yī)院具體病例,在301醫(yī)院，一對(duì)第一胎生育聾兒的聽力健康夫婦，懷孕第二胎時(shí)進(jìn)行了孕期耳聾基因診斷，最后確定胎兒是雜合突變，出生后孩子聽力正常。（該夫婦為加拿大籍華人）,,GJB2 235 雜合

12、,,,235野生探針,235突變探針,26,27,熊X的父母是GJB2基因突變攜帶者，由于未進(jìn)行產(chǎn)前診斷，先后育有兩個(gè)聾兒，此次懷孕，經(jīng)301醫(yī)院進(jìn)行孕期耳聾基因診斷，胎兒確定為雜合突變，出生后聽力應(yīng)正常。,熊X9歲，GJB2基因235delC純合突變導(dǎo)致的遺傳性耳聾。,熊X的媽媽，GJB2基因突變攜帶者并懷孕5個(gè)月。,,,陜西漢中熊XX一家,耳聾基因在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,耳聾基因普篩的意義,正常人群常見耳聾基因攜帶率約6%(GJB2：

13、3%,SLC26A4：2-3%,mtDNA：0.3%)依賴聾人的篩查和干預(yù)尚不足以從根本上阻斷遺傳性耳聾在整個(gè)人群中的傳遞和發(fā)病。及早地發(fā)現(xiàn)藥物性耳聾敏感個(gè)體，通過指導(dǎo)用藥避免耳聾。實(shí)現(xiàn)常見遺傳性耳聾的預(yù)防對(duì)耳聾基因攜帶孕婦的家人具有警示作用,28,新生兒聽力篩查新策略耳聾基因檢測(cè)+常規(guī)聽篩,29,新生兒耳聾出生缺陷現(xiàn)狀,,,,,我國(guó)每年有3萬以上患嚴(yán)重耳聾殘疾的寶寶出生，新生兒耳聾發(fā)病率為1-3/1000,現(xiàn)有常規(guī)新生兒物理

14、聽力篩查方法無法檢出遲發(fā)性耳聾、藥物性耳聾,,,加上每年新增的遲發(fā)性耳聾和藥物性耳聾患者，每年實(shí)際新增聾人6萬人,30,,,,,,,,常規(guī)聽篩,???? ?? ?? ????? ??? ?????,??? ??? ???? ?? ???? ? ??? ?????,新生兒聽力聯(lián)合篩查,,耳聾基因芯片檢測(cè),早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防后天遲發(fā)聾、藥物聾,耳聾基因篩查是對(duì)常規(guī)聽篩最有效的互補(bǔ)篩查手段,聯(lián)合篩查提高聽力異常新生兒的篩出率,新生兒

15、聽力篩查新策略,31,,,,,新生兒聽力篩查,常規(guī)聽篩+耳聾基因篩查,,聽篩通過基因未通過,,聽篩通過基因攜帶,,聽篩通過基因通過,,聽篩未通過基因未通過,,聽篩未通過基因攜帶,,聽篩未通過基因通過,新生兒聽力聯(lián)合篩查,高度預(yù)警，提示遲發(fā)聾和藥物聾風(fēng)險(xiǎn),遺傳咨詢聽力隨訪,聽力隨訪,確診為聽力障礙患兒,聽力檢查基因檢測(cè)遺傳咨詢,聽力檢查,32,33,高危新生兒的干預(yù)措施,高危新生兒,,先天性聾兒,,及早安裝助聽器或人工耳

16、蝸植入，避免孩子由聾致啞,,遲發(fā)性聾兒（EVA）,,通過生活指導(dǎo)，避免或延緩耳聾發(fā)生,藥物性耳聾高危個(gè)體,,終身禁用耳毒性藥物，并預(yù)防家族成員發(fā)生藥物性耳聾,,,,采集新生兒足跟血3滴,,,,篩查對(duì)象,新生兒耳聾基因篩查,所有新生兒,樣本要求,,34,35,新生兒篩查及早確診先天聾,在沈陽(yáng)202醫(yī)院，一對(duì)夫婦帶新生兒就診，父母聽力正常，孩子出生后3天聽力初篩未通過，在一個(gè)月時(shí)帶孩子到202醫(yī)院新生兒科就診。經(jīng)耳聾基因芯片檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GJ

17、B2純合突變，及早確診先天性耳聾，及早干預(yù)（正常情況下3-6個(gè)月干預(yù)）。,,GJB2 235 純合,,,235野生探針,235突變探針,35,新生兒篩查及早發(fā)現(xiàn)遲發(fā)聾,因說話不清，5歲才被發(fā)現(xiàn),,,,IVS7-2A>G雜合,IVS7-2A>G雜合,IVS7-2A>G純合,,,,,,,,,36,37,耳聾基因在藥物性耳聾預(yù)防中的應(yīng)用,在中國(guó)聾兒康復(fù)中心，照片中的小女孩被檢測(cè)出藥物性耳聾，在專家的建議下，小女孩的母親、

18、阿姨、舅舅都進(jìn)行了耳聾基因檢測(cè)，都被診斷為藥物性耳聾易感基因攜帶者，他們將終身禁用所有氨基糖甙類藥物。,,1555突變探針,線粒體A1555G 均質(zhì)突變,37,常規(guī)新生兒聽力篩查無法查出藥物性耳聾,邰麗華：湖北宜昌人，2歲時(shí)因高燒注射鏈霉素而失去了聽力，現(xiàn)任中國(guó)殘疾人藝術(shù)團(tuán)團(tuán)長(zhǎng)、藝術(shù)總監(jiān)、中國(guó)特殊藝術(shù)協(xié)會(huì)副主席。,38,現(xiàn)有常規(guī)新生兒聽力篩查尚無法檢出此類耳聾高危個(gè)體，而通過新生兒基因篩查及早發(fā)現(xiàn)致病風(fēng)險(xiǎn)一針致聾完全可以預(yù)防。,39