天然藥物化學(xué)第十章生物堿分析解析

1、課外作業(yè),1、中藥萱草根中含有大黃酸、大黃酚、決明蒽醌、決明蒽醌甲醚等成分，試設(shè)計(jì)提取分離流程。,,,決明蒽醌,決明蒽醌甲醚,2、中藥虎杖中含有大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃素-8-D-葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-D-葡萄糖苷、白藜蘆醇、白藜蘆醇葡萄糖苷等成分，試設(shè)計(jì)從虎杖中提取分離游離蒽醌的流程。,,第十一章 生物堿,,,知識(shí)要求掌握生物堿的理化性質(zhì)、提取、分離及鑒定的基本知識(shí)。熟悉生物堿的結(jié)構(gòu)特征和實(shí)際應(yīng)用。了解生物堿的含義

2、、生源途徑、分類、分布和生理活性。能力要求熟練掌握生物堿的提取分離基本操作技能，能提出合理的提取分離步驟和方案。學(xué)會(huì)化學(xué)檢識(shí)法和色譜法初步鑒別生物堿的基本技術(shù),概述,生物堿的含義及特點(diǎn) 1 含義 生物堿指來(lái)源于生物界的一類含氮有機(jī)化合物。 2 特點(diǎn) 大多有較復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮原子結(jié)合在環(huán)內(nèi)；多呈堿性，可與酸成鹽；多具有顯著的生理活性。下列除外：低分子胺類：甲胺、乙胺；氨基酸、氨基糖、肽類、蛋白質(zhì)、核酸、核苷酸、卟

3、啉類、維生素；,,生物堿的在生物界的分布,植物界,,動(dòng)物界生物堿極少如：麝香中的麝香吡啶,生物堿在植物體中的積累和儲(chǔ)藏,1.生物堿的代謝分為積累、轉(zhuǎn)移、儲(chǔ)藏三個(gè)階段，不同階段是在植物的不同細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的；2.生物堿的積累主要在生長(zhǎng)活躍的組織如子房、心皮等；3.生物堿的儲(chǔ)藏主要是在液泡細(xì)胞、乳汁管細(xì)胞中進(jìn)行；因此，不同植物中生物堿存在的部位不同；4.生物堿在轉(zhuǎn)移階段往往發(fā)生許多甲基化、氧化、去甲基化等次級(jí)結(jié)構(gòu)修飾；,存在形式 1.

4、游離堿：堿性極弱，以游離堿的形式存在。2.成 鹽：有機(jī)酸（絕大多數(shù)）有：檸檬酸、酒石酸等；特殊的酸類：烏頭酸、綠原酸等；無(wú)機(jī)酸（少數(shù)）：硫酸、鹽酸等。3.苷 類：以苷的形式存在于植物中；4.酯 類：多種吲哚類生物堿分子中的羧基，常以甲酯形式存在。5.N-氧化物：植物體中的氮氧化物約一百余種。,生物堿的生物活性 生物堿多具有顯著而特殊的生物活性。如嗎啡、延胡索乙素具有鎮(zhèn)痛作用；阿托品具有解痙作用；小檗堿、苦

5、參生物堿、蝙蝠葛堿有抗菌消炎作用；利血平有降血壓作用；麻黃堿有止咳平喘作用；奎寧有抗瘧作用；苦參堿、氧化苦參堿等有抗心律失常作用；喜樹堿、秋水仙堿、長(zhǎng)春新堿、三尖杉?jí)A、紫杉醇等有不同程度的抗癌作用等。,結(jié)構(gòu)特點(diǎn),第一章 結(jié) 構(gòu) 類 型,㈠有機(jī)胺類（苯丙氨酸/酪氨酸） 氮原子不結(jié)合在環(huán)內(nèi)的一類生物堿。,麻黃堿的特點(diǎn):,㈠有機(jī)胺類（苯丙氨酸/酪氨酸） 游

6、離時(shí)可溶于水，能與酸生成穩(wěn)定的鹽，有揮發(fā)性，不易與大多數(shù)生物堿沉淀試劑反應(yīng)生成沉淀。,,秋水仙堿colchicine,治療急性痛風(fēng)，并有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,益母草堿leonurine,對(duì)動(dòng)物子宮有增加其緊張性與節(jié)律性的作用,㈡吡咯衍生物由吡咯或四氫吡咯衍生的生物堿。,重要的分：簡(jiǎn)單的吡咯衍生物 吡咯里西啶衍生物（又稱雙稠吡咯啶） 吲哚里西啶衍生物

7、。,簡(jiǎn)單的吡咯衍生物,紅古豆堿cuscohygrine,,紅古豆苦杏仁酸酯,（無(wú)活性）,,,,,,（有活性）,似阿托品藥物的散瞳等作用,野百合堿monocrotaline,（有抗癌活性）,吡咯里西啶,,吡咯里西啶（pyrrolizidine）衍生物,吲哚里西啶（indolizidine）衍生物,吲哚里西啶indolizidine,一葉萩堿securinine,㈢吡啶衍生物由吡啶或六氫吡啶衍生的生物堿。分：簡(jiǎn)單吡啶衍生物、喹

8、諾里西啶（quinolizidine）,㈢吡啶衍生物,matrine,oxymatrine,㈣莨菪烷（tropane）衍生物由吡咯啶和哌啶駢合而成的雜環(huán)。分：顛茄生物堿（belladonna alkaloids） 古柯生物堿（coca alkaloids）,莨菪堿是由莨菪醇（tuopine）與莨菪酸（tuopic acid）縮合而生成的酯：,（五）喹啉衍生物,,（六）異喹啉衍生物,分：1-苯甲基異喹啉型

9、 雙苯甲基異喹啉型 原小檗堿型 阿樸啡型 原阿樸啡型 嗎啡烷型 原托品堿型,異喹啉isoquinoline,1-苯甲基異喹啉型,1-benzyl-isoquinoline,雙苯甲基異喹啉型,唐松草堿thalicarpine,原小檗堿型 protoberberine,阿樸啡型,原阿樸啡型,嗎啡烷型,嗎啡烷morphinane,原托品堿型,原

10、托品堿protopine,（七）菲啶（phenanthridine）衍生物屬異喹啉類衍生物，重要的類型有：苯駢菲啶類吡咯駢菲啶類,（八）吖啶酮（acridone）衍生物,吖啶,（九）吲哚（yinduo）衍生物,吲哚,麥角新堿ergonovineergometrine,（十）咪唑（imidazole）衍生物,(十一) 喹唑酮（quinazolidone）衍生物,(十二) 嘌呤（purine）衍生物,嘌呤,(十三) 甾體生

11、物堿類,貝母堿peimineverticine,（十四）萜生物堿類,(十五) 大環(huán)生物堿類,(十六) 其他類型生物堿,第二節(jié) 理 化 性 質(zhì),一、性狀　 1 形態(tài) 生物堿多數(shù)為結(jié)晶形固體，少數(shù)為非晶形粉末；個(gè)別為液體，如煙堿(nicotine)、檳榔堿等。 2 味 生物堿多具苦味。 3 顏色 生物堿一般無(wú)色或白色，少數(shù)有顏色，如小檗堿、蛇根堿呈黃色等。 有機(jī)化合物產(chǎn)生顏色一般要具備長(zhǎng)鏈共軛結(jié)構(gòu)，

12、并有助色團(tuán)，或同時(shí)為離子型。 一葉萩堿為淡黃色，是因?yàn)榈由瞎码娮訉?duì)與共軛系統(tǒng)形成跨環(huán)共軛。,,4 揮發(fā)性與升華性 少數(shù)液體狀態(tài)及個(gè)別小分子固體生物堿如麻黃堿、煙堿等具揮發(fā)性，可用水蒸汽蒸餾提取?？Х纫虻葌€(gè)別生物堿具有升華性。,,二、旋光性　生物堿結(jié)構(gòu)中如有手性碳原子或本身為手性分子即有旋光性。 生物堿的生理活性與其旋光性密切相關(guān)，通常左旋體的生理活性比右旋體強(qiáng)。如l-莨菪堿的散瞳作用比d-莨菪堿大100倍。去甲烏藥

13、堿（higenaenine）僅左旋體具強(qiáng)心作用。,三、堿 性,（一）堿性的產(chǎn)生與強(qiáng)度表示：⑴ 堿性由來(lái)：N上孤對(duì)電子，與質(zhì)子H+結(jié)合,⑵強(qiáng)度表示：pKa,⑶ pKa與堿性的關(guān)系： pKa越大，堿性越強(qiáng)用Bronsted（勃朗斯德）理論解釋：,BH＋ ：生物堿鹽的濃度；B：游離生物堿的濃度。pKa值越大， BH＋越大，表示生物堿的堿性越強(qiáng),⑷各種強(qiáng)度生物堿的pKa范圍,堿性基團(tuán)的pKa值大小順序：胍基[-NH(C=NH)NH2]

14、>季銨堿>N-烷雜環(huán)>脂肪胺基≈ N-芳雜環(huán)（吡啶）>酰胺基≈吡咯,（二）堿性與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系,⑴雜化度⑵誘導(dǎo)效應(yīng)⑶誘導(dǎo)-場(chǎng)效應(yīng)⑷共軛效應(yīng)⑸空間效應(yīng)⑹氫鍵效應(yīng),⑴ 雜化度：SP3 ＞ SP2 ＞ SPP電子比例：3/4 2/3 1/2,又如異喹啉（sp2）雜化成四氫異喹啉（sp3）后，堿性增強(qiáng)（ pKa 9.5）。季氨堿（如小檗堿）因羥基以負(fù)離子形式存在而顯強(qiáng)堿性（

15、 pKa 11.5）,氰基（sp）,吡啶,2-甲基-甲基吡咯（sp3 ）,⑵誘導(dǎo)效應(yīng)：（堿性減弱或增強(qiáng)）供電子基團(tuán)：使 N 電子云密度增高，堿性增強(qiáng),吸電子基團(tuán)：使N 電子云密度降低，堿性減弱,,氮原子附近有吸電性基團(tuán)，堿性減弱；,前提：生物堿中2個(gè)N原子,⑶誘導(dǎo)—場(chǎng)效應(yīng)：,結(jié)果：2個(gè)N原子堿度差異較大△pKa↑原因：？,因?yàn)橐坏┑谝粋€(gè)氮原子質(zhì)子化后，就產(chǎn)生一個(gè)強(qiáng)的吸電子基團(tuán)-+NHR2。此時(shí)，它對(duì)第二個(gè)氮原子產(chǎn)生兩種堿性降低的效應(yīng)

16、：誘導(dǎo)效應(yīng)和靜電場(chǎng)效應(yīng)。前者通過(guò)碳鏈傳遞，且隨碳鏈增長(zhǎng)而逐漸降低。后者則是通過(guò)空間直接作用的，故又稱為直接效應(yīng)。二者統(tǒng)稱誘導(dǎo)-場(chǎng)效應(yīng)。,⑷共軛效應(yīng) （苯胺型、烯胺型、酰胺型）,若生物堿分子中氮原子孤電子對(duì)成p-π 共軛體系時(shí)，堿性較弱。常見(jiàn)的p-π共軛效應(yīng)主要有三種類型：苯胺型、烯胺型和酰胺型,苯胺型：如毒扁豆堿（physostigmine）分子中的N1和N2堿性相差懸殊，前者為pKa 7.88,后者僅為1.76。,毒扁豆堿,苯

17、胺pKa 4.58 pKa 10.14 pKa 11.2,烯胺(enamines)型:仲烯胺（R或R’=H）A的共軛酸B極不穩(wěn)定，平衡向C發(fā)展，堿性較弱。反之，如叔胺 (R,R’為烷基)A的共軛酸B比較穩(wěn)定，平衡易向B進(jìn)行，堿性較強(qiáng)。,酰胺型：若氮原子處于酰胺結(jié)構(gòu)中，由于氮原子孤電子對(duì)與酰胺羰基的p-π共軛效應(yīng)，其堿性很弱。,但胍例外，由于接受質(zhì)子后形成季銨離子，故呈強(qiáng)堿性。,⑸ 空間效應(yīng)——盡管質(zhì)

18、子的體積很小，但生物堿氮原子質(zhì)子化后，仍受到空間效應(yīng)的影響，使其堿性增強(qiáng)或減弱。附近取代基的空間立體障礙或分子構(gòu)象因素，可使質(zhì)子難于接近氮原子。,⑹ 分子內(nèi)氫鍵——堿性增強(qiáng)生物堿的鹽（共軛酸）中的H與生物堿結(jié)構(gòu)中O形成氫鍵，使得生物堿的鹽穩(wěn)定，故堿性增強(qiáng),對(duì)具體化合物，上述幾種影響生物堿強(qiáng)度的因素須綜合考慮。一般來(lái)說(shuō)，空間效應(yīng)和誘導(dǎo)效應(yīng)共存時(shí)，前者居于主導(dǎo)地位。誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)共存時(shí)，往往后者的影響為大。,,四、溶解性,（1）絕大

19、多數(shù)仲胺和叔胺生物堿的游離堿具親脂性；（2）絕大多數(shù)生物堿鹽具親水性；（3）季銨生物堿具親水性；（4）具酚羥基、羧基等酸性基團(tuán)的生物堿具酸堿兩性；（5）具內(nèi)酯基的生物堿，遇堿水開(kāi)環(huán)成鹽而溶解，遇酸又閉環(huán)而析出； (6) 生物堿成鹽后多易溶于水，不溶或難溶有機(jī)溶劑。,（一）親脂性生物堿：仲胺、叔胺等游離生物堿（二） 親水性生物堿：季胺堿，N-氧化物，生物堿鹽等 含氧酸鹽的水溶性往往較大。 與大分子有機(jī)酸所形成

20、的鹽水溶性差。 與小分子有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸成鹽水溶性較好。 生物堿鹽具有特殊的溶解性質(zhì)，如高石蒜堿 的鹽酸鹽不溶于水，而溶于氯仿，鹽酸小檗堿難溶于水；,五、檢識(shí)反應(yīng),（一）沉淀反應(yīng)生物堿在酸性水溶液或稀醇液中能和某些試劑生成難溶于水的復(fù)鹽或者分子絡(luò)合物的反應(yīng)稱為生物堿沉淀反應(yīng)，這些試劑被稱為生物堿沉淀試劑。反應(yīng)意義和作用 1）用于檢查生物堿的有無(wú)，在生物堿的定性鑒別時(shí)，這些試劑可用于試管定性反應(yīng)和作為平面色譜的

21、顯色劑。 2）另外在生物堿的提取分離中還可指示提取、分離終點(diǎn)。 3）個(gè)別沉淀試劑可用于分離純化生物堿，如雷氏銨鹽可用于沉淀分離季銨堿。,常見(jiàn)沉淀試劑金屬鹽類碘-碘化鉀（Wagner）KI-I2 棕褐色沉淀碘化鉍鉀（Dragendoff）BiI3?KI 紅棕色沉淀碘化汞鉀（Mayer試劑）HgI2?2KI 類白色沉淀 若加過(guò)量試劑，沉淀又被溶解氯化金(3%)（

22、Suric chloride）HAuCl4 黃色晶形沉淀,酸類——硅鎢酸(Bertrand試劑)SiO2?12WO3 乳白色酚酸類——苦味酸(Hager試劑) 2,4,6-三硝基苯酚黃色復(fù)鹽—— 雷氏銨鹽(Ammoniumreineckate) 硫氰酸鉻銨試劑 生成難溶性復(fù)鹽 紫紅色,反應(yīng)原理：生成更大多分子復(fù)鹽和絡(luò)鹽,,沉淀反應(yīng)條件（1）通常在酸性水溶液中生物

23、堿成鹽狀態(tài)下進(jìn)行； （若在堿性條件下則試劑本身將產(chǎn)生沉淀）（2）在稀醇或脂溶性溶液中時(shí)，含水量>50%； （當(dāng)醇含量>50%時(shí)可使沉淀溶解）（3）沉淀試劑不易加入多量。 （如：過(guò)量的碘化汞鉀可使產(chǎn)生的沉淀溶解）,結(jié)果的判斷（1）鑒別時(shí)每種Alk需采用三種以上沉淀試劑； （沉淀試劑對(duì)各種Alk的靈敏度不同）（2）直接對(duì)中藥酸提液進(jìn)行沉淀反應(yīng)，則

24、 陽(yáng)性結(jié)果——不能判定Alk的存在 陰性結(jié)果可判斷無(wú)Alk存在氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等 + 沉淀試劑——沉淀,,注意事項(xiàng)： 1 反應(yīng)一定要在酸性條件下，生物堿成鹽溶于水方可反應(yīng)。 2 對(duì)生物堿的有無(wú)定性時(shí)，應(yīng)用三種以上試劑分別進(jìn)行反應(yīng)，均陽(yáng)性或陰性方有可信性。 3 仲胺一般不與生物堿沉淀試劑反應(yīng)。如麻黃堿。 4 水溶液中如有蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)亦可與此類試劑產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)在被檢液中除掉這些成

25、分。除掉方法工藝如下：,小結(jié),思考？生物堿沉淀反應(yīng)所需的環(huán)境和凈化處理的方法有哪些？,,,,如何用化學(xué)方法鑒別苦參中的總生物堿？,（二）顯色反應(yīng),有些生物堿能和某些試劑反應(yīng)生成特殊的顏色，叫做顯色反應(yīng)，常用于鑒識(shí)某種生物堿。這種生物試劑稱為生物堿的顯色試劑但顯色反應(yīng)受生物堿純度的影響很大，生物堿愈純，顏色愈明顯。　　生物堿的顯色反應(yīng)原理尚不太明了，一般認(rèn)為是氧化反應(yīng)、脫水反應(yīng)、縮合反應(yīng)或氧化、脫水與縮合的共同反應(yīng)。,常用的顯色劑,

26、（1）礬酸銨一濃硫酸溶液（Mandelin試劑）為1％礬酸銨的濃硫酸溶液。如遇阿托品顯紅色，可待因顯藍(lán)色，士的寧顯紫色到紅色。 （2）鉬酸銨一濃硫酸溶液（Frohde試劑）為1％鉬酸鈉或鉬酸銨的濃硫酸溶液，如遇烏頭堿顯黃棕色，小檗堿顯棕綠色，阿托品不顯色。 （3）甲醛一濃硫酸試劑（Marquis試劑）為30％甲醛溶液0.2ml與10ml濃硫酸的混合溶液。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理如遇嗎啡顯橙色至紫色，可待因顯紅色至黃棕色。 （4）濃硫

27、酸—如遇烏頭堿顯紫色、小檗堿顯綠色，阿托品不顯色。 （5）濃硝酸 —如遇小檗堿顯棕紅色，秋水仙堿顯藍(lán)色，咖啡堿不顯色。,補(bǔ)充：成鹽（Alk成鹽的機(jī)理） 生物堿與酸成鹽，對(duì)質(zhì)子化來(lái)說(shuō)，仲胺、叔胺生物堿成鹽時(shí)，質(zhì)子多結(jié)合于氮原子。 季胺堿、氮雜縮醛、烯胺以及具有涉及氮原子的跨環(huán)效應(yīng)形式存在的生物堿，質(zhì)子化則往往并非發(fā)生在氮原子上。,,,,,1.季胺堿的成鹽,,2.含氮雜縮醛Alk的成鹽,2.含氮雜縮醛Alk

28、的成鹽,3.具有烯胺結(jié)構(gòu)Alk的成鹽,3.具有烯胺結(jié)構(gòu)Alk的成鹽,*稠環(huán)橋頭N原子不能形成亞胺形式的鹽。,4.涉及氮原子跨環(huán)效應(yīng)Alk的成鹽,N原子孤電子對(duì)空間上靠近酮基時(shí)，則產(chǎn)生跨環(huán)效應(yīng),4.涉及氮原子跨環(huán)效應(yīng)Alk的成鹽,（一）提取 1.酸水提取法 （離子交換樹脂法、沉淀法） 2.醇類溶劑提取法 3.與水不相混溶的有機(jī)溶劑提取

29、法,第四節(jié) 提取與分離,1.酸水提取法：冷提法（滲漉法、冷浸法）原理：利用生物堿鹽易溶于水，難溶于或不 溶于親脂性有機(jī)溶劑的溶解性能，用 水進(jìn)行提取 酸性水——0.5% ~ 1%H2SO4、HCl、HOAc等,,,提取過(guò)程：,,優(yōu)點(diǎn)：將生物堿的大分子有機(jī)鹽轉(zhuǎn)變?yōu)樾》肿訜o(wú)機(jī)鹽，增大在水中溶解度方法簡(jiǎn)單溶劑廉價(jià),此法缺點(diǎn)： 提取液體

30、積較大（濃縮困難） 提取液中水溶性雜質(zhì)多 解決方法： （1）離子交換樹脂法 （2）沉淀法,,,（1）離子交換樹脂法,,方法優(yōu)點(diǎn):生物堿純度高有機(jī)溶劑用量少離子交換樹脂再生后可以反復(fù)使用,（2）沉淀法 ①酸提堿沉法,（2）沉淀法 ②鹽析法：適用中等弱堿。,（2）沉淀法 ③雷

31、氏銨鹽沉淀法,2、有機(jī)溶劑萃取法,酸水提取液用堿液堿化得生物堿親脂性有機(jī)溶劑萃取合并萃取液，回收有機(jī)溶劑得總生物堿,,醇類溶劑提取法 原理：游離生物堿及其鹽一般都能溶于乙醇和 甲醇提取方法：浸漬法、滲漉法、加熱回流（連續(xù) 回流）提取法,提取過(guò)程,生 藥,H+ / H2O,藥 渣,醇 液,OH-/H2O,醇或酸性醇,揮醇；加酸水,堿性較弱的堿,親水性

32、Alk,,,,,,,,,CHCl3,沉 淀,Alk,OH-/H2O CHCl3,,,,,,優(yōu)點(diǎn)： 應(yīng)用范圍廣，對(duì)生物堿和生物堿鹽均、可溶解，水溶性雜質(zhì)較少。缺點(diǎn)：脂溶性雜質(zhì)多純化方法： 酸水溶解，堿化，有機(jī)溶劑萃取法純化總生物堿,,3.親脂性有機(jī)溶劑提取法原理：利用游離生物堿易溶于低極性有機(jī)溶劑，提取時(shí)，先用堿水（氨水、石灰乳等）將藥材濕潤(rùn)，既可使藥材吸水膨脹，又能使生物堿游離，再用親脂性有機(jī)溶劑（三氯甲烷、苯

33、、乙醚等）進(jìn)行提取提取方法：冷浸法、加熱回流（連續(xù)回流）提取法,提取過(guò)程,生 藥,殘 渣,CHCl3,CHCl3,H+/H2O,堿化（如NH4OH）（使Alk游離）滲濾（或浸漬）（如CHCl3等）,H+/H2O,OH-/H2O,Alk沉淀,親水性Alk,堿性較弱的Alk,,,,,,,,,,優(yōu)點(diǎn)：選擇性強(qiáng)，只能提取親脂性生物堿，親水性生物堿不被提出；缺點(diǎn)：此類溶劑穿透力較弱，需長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提?。欢拘源?、易燃易爆，使用時(shí)應(yīng)注意安全；

34、價(jià)格昂貴，設(shè)備要求高。純化方法：酸水溶解，堿化，有機(jī)溶劑萃取法純化總生物堿,分離,生物堿的分離,系統(tǒng)分離,特定分離,多用于基礎(chǔ)研究,側(cè)重于生產(chǎn)實(shí)用,總 堿,單體Alk的分離,類別指酸堿性強(qiáng)弱,部位指極性不同,依據(jù)Alk的理化性質(zhì),,,,,,,,,,,,,,,,二、分 離,分離方法 分離依據(jù)——分離方法 溶解性——重結(jié)晶法 、沉淀法 堿性——pH梯度萃取法 極性——色譜法

35、,（一）總生物堿的分離,(二)單體生物堿的分離,1、利用生物堿堿性的差異進(jìn)行分離 pH梯度法操作方法：（1）總生物堿溶于酸水，分次加堿液堿化，有機(jī)溶劑萃取。注意：加入堿水堿性要由弱到強(qiáng)逐漸增加,（2）,pH梯度萃取法 首先考慮的問(wèn)題： 所選溶劑pH值多少為宜？ 萃取幾次能完全？

36、 萃取溶劑的最佳體積？,,（1）確定pH值的方法 ①緩沖紙色譜,,,（1）確定pH值的方法,,（1）確定pH值的方法,,C+,（1）確定pH值的方法,,（1）確定pH值的方法 ②利用pKa值來(lái)確定pH值 pKa與pH關(guān)系：,,（1）確定pH值的方法 ②利用pKa值來(lái)確定pH值,例：某Alk的pKa=8.0，用CHCl3從H2O中萃取，H2O的pH應(yīng)調(diào)多少？,pH = p

37、Ka + 2 = 8 + 2 = 10,,（2）判斷分離的難易程度——萃取次數(shù),,（2）判斷分離的難易程度——萃取次數(shù),β ≥ 100 1次萃取可達(dá)90%以上 ≥ 10 萃取需10~12次 ≈ 2 需1000次以上萃?。–CD法） ≈ 1 不能分離,,（3）萃取溶劑的最佳體積——容積比（R）,例：設(shè)K1=1.3 K2=3.0 按上式計(jì)算得 R=1/2。 即，有機(jī)相與水相

38、容積比為1:2，1份有機(jī)相與2份水相進(jìn)行萃取。,,,,,,3.色譜法⑴吸附劑：柱色譜法常用氧化鋁（偶用硅膠）；⑵展開(kāi)劑：游離Alk常以苯、乙醚、氯仿等溶劑洗脫⑶化合物極性判斷：①相似結(jié)構(gòu)：雙鍵多、含氧官能團(tuán)多——?jiǎng)t極性大②在含氧官能團(tuán)中：,,提取分離實(shí)例——長(zhǎng)春堿與長(zhǎng)春新堿,,,長(zhǎng)春花全草,(干粉80目),苯滲漉液,藥 渣,苯 液,H+/H2O,苯滲漉,pH=4,6%酒石酸水溶液萃取,過(guò)濾，氨水堿化至pH=6~7 C

39、HCl3提,,,,,,,,,,,除水雜,除脂雜,除堿性較強(qiáng)的成分,,,,,,,,H2O,CHCl3,弱堿,Alk硫酸鹽,回收氯仿，蒸干溶于無(wú)水乙醇H2SO4調(diào)pH=3.8~4.1Alk沉淀,溶于H2O，氨水堿化至pH=8~9 CHCl3萃取,,,,除脂雜,除水雜,精制,,,,,H2O,CHCl3,,,,游離Alk,長(zhǎng)春堿,醛基長(zhǎng)春堿,,,,,回收氯仿,溶于苯:氯仿(1:2)液中通過(guò)Al2O3吸附柱用苯:氯仿(1:2)洗

40、脫,色譜分離,一、理化鑒定 物理方法——形態(tài)、 顏色、 熔點(diǎn) 化學(xué)方法 ——沉淀反應(yīng) 、顯色反應(yīng),第四節(jié) 鑒 定,沉淀反應(yīng) 1. Dragendorff ’試劑 (KBiI4試劑) 2. Mayer’試劑 (K2HgI4) 3. Wagner ’試劑 (KI.I2) 4. Bertrad ’試劑 (SiO2.12W

41、O3.nH2O),注意： 反應(yīng)介質(zhì)？ 干擾物質(zhì)？ 供試液的制備：排除水溶性雜質(zhì)的酸水液,(一)薄層色譜法1.硅膠TLC 展開(kāi)劑: 三氯甲烷為基本溶劑多用堿性下 有機(jī)溶劑展開(kāi) 顯色劑: 改良碘化鉍鉀——橘紅色 ALK硅膠TLC鑒定易拖尾，如何克服？⑴展開(kāi)劑中加入有機(jī)堿（乙二胺、氨水）⑵展開(kāi)缸中氨蒸汽飽和⑶鋪板時(shí)加入無(wú)機(jī)堿克服硅膠的

42、酸性酚酸類成分硅膠TLC、PC如何克服拖尾現(xiàn)象？,二、色譜鑒定,2、分配薄層色譜支持劑：硅膠或纖維素固定相：甲酰胺展開(kāi)劑：甲酰胺飽和的親脂性有機(jī)溶劑顯色劑：日光或熒光下觀察或選用改良碘 化鉍鉀試劑,（二） 紙色譜（PC）以離子狀態(tài)層析時(shí)——選擇極性較大的展開(kāi)劑 正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5上層）以分子狀態(tài)層析時(shí)——用甲酰胺作固定相，以甲酰胺飽和的親脂性有機(jī)溶劑（苯和氯

43、仿等）作展開(kāi)劑顯色試劑中不能含有硫酸。,（三）高效液相色譜法（HPLC）反相分配色譜 固定相：Rp C18（C8）烷基鍵合相 流動(dòng)相：甲醇（乙腈）-水，含有約0.01mol/L～0.1mol/L磷酸緩沖液、碳酸銨或醋酸鈉（pH4～pH7）,（四）氣相色譜法（GC） 揮發(fā)性生物堿的分離檢識(shí)——麻黃堿的分離 色譜柱： HP-5石英毛細(xì)管柱，5.25m×2mm， 柱溫90℃（1min）3

44、℃/min124℃ （3min）20℃/min250℃檢測(cè)器：NPD。He（載氣）1.4ml/min，H2 3.2ml/min，空氣90ml/min。檢測(cè)器溫度280℃，進(jìn)樣口220℃。用二苯胺作內(nèi)標(biāo)物 。,1.生物堿含義與生物堿分類2.生物堿性質(zhì)： 溶解性：脂溶性、水溶性、兩性ALK 堿 性：堿性表示、影響因素、堿度比較3. 生物堿的提取 總堿的提取、純化方法

45、 水溶性生物堿的提取純化方法4. 生物堿的分離： 系統(tǒng)分離與特定生物堿的四種分離方法5.生物堿的鑒定: 沉淀反應(yīng)與色譜方法,練 習(xí) 題,一、選擇判斷題二、是非題三、化學(xué)鑒別題四、分析比較堿性大小五、提取分離,一、選擇判斷題,◆用pH梯度萃取法從氯仿中分離生物堿時(shí)，可順次用（ ）緩沖液萃取。 A. pH= 8~3 B. pH= 6~8 C. pH= 8

46、~14 D. pH= 3~8,◆生物堿的鹽若從酸水中游離出來(lái)，pH應(yīng)為（ ） A. pH Pka C. pH = PKa,◆某生物堿堿性很弱，幾乎呈中性，氮原子的存在狀態(tài)可能為( )。 A.伯胺 B.仲胺 C.酰胺 D.叔胺,◆季銨型生物堿分離常用( )。 A. 水蒸汽蒸餾法 B. 雷氏銨鹽法 C. 升華

47、法 D. 聚酰胺色譜法,◆生物堿沉淀反應(yīng)是利用大多數(shù)生物堿在( )條件下，與某些沉淀試劑反應(yīng)生成不溶性復(fù)鹽或絡(luò)合物沉淀。 A. 酸性水溶液 B. 堿性水溶液 C. 中性水溶液 D. 親脂性有機(jī)溶劑,◆將混合生物堿溶于有機(jī)溶劑中，以酸液pH由大→小順次萃取，可依次萃取出( )。 A.堿性由

48、強(qiáng)→弱的生物堿 B.堿性由弱→強(qiáng)的生物堿 C.極性由弱→強(qiáng)的生物堿 D.極性由強(qiáng)→弱的生物堿,◆生物堿的堿性強(qiáng)弱可與下列( )情況有關(guān)。 A.生物堿中N原子具有各種雜化狀態(tài) B.生物堿中N原子處于不同的化學(xué)環(huán)境 C.以上兩者均有關(guān) D.以上兩者均無(wú)關(guān),◆pH梯度萃取法分離生物堿時(shí)，生物堿在酸水層，應(yīng)順次調(diào)pH（ ）用氯仿萃取。 A.pH=3~

49、8 B.pH=8~13 C.pH=1~7 D.pH=7~1,◆對(duì)生物堿進(jìn)行分離常用的吸附劑為( )。 A.活性炭 B.硅膠 C.葡聚糖凝膠 D.堿性氧化鋁,二、是非判斷題,自然界所發(fā)現(xiàn)的生物堿都是氨基酸的代謝產(chǎn)物。季銨型生物堿可溶于水，它是各類生物堿中堿性最強(qiáng)的一類生物堿。陰離子交換樹脂適用于分離生物堿類物質(zhì)。生物堿一般是以游離堿的狀態(tài)存在于植物體內(nèi)。,某一中藥的粗浸液，用