北醫(yī)免疫課程pdcd研究思路

1、1,PDCD5的發(fā)現(xiàn)和功能研究北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部 馬大龍,2,前言,“Life cannot exist without death”；每個(gè)人每天有5千萬到7千萬個(gè)細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡（Apoptosis）是程序化細(xì)胞死亡（Programmed cell death,PCD）的一種形式，在細(xì)胞分化、增殖、生長(zhǎng)和疾病中起著重要的作用。如果機(jī)體缺乏凋亡，一個(gè)80歲的老人將有2噸重的骨髓和淋巴節(jié)，16公里長(zhǎng)的腸道（Nature,412:23

2、,2001）.,3,凋亡缺陷導(dǎo)致的疾?。?腫瘤、多發(fā)性硬化癥凋亡過強(qiáng)導(dǎo)致的疾?。?AIDS、中風(fēng)、神經(jīng)退行性疾病、脊髓損傷等凋亡失調(diào)導(dǎo)致疾病： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、SLE、糖尿病等,4,研究思路的提出,細(xì)胞凋亡過程中，將有一些基因表達(dá)改變，特別是上調(diào)表達(dá)基因，可能發(fā)揮重要的凋亡調(diào)節(jié)作用。,5,本項(xiàng)研究從1995年開始啟動(dòng),利用cDNA-RDA（Representative Differences Analysis）技術(shù),

3、從誘導(dǎo)凋亡的TF-1細(xì)胞克隆了凋亡上調(diào)表達(dá)的人類新基因, 其中之一命名為TFAR19 (TF-1 apoptosis related gene)1998年申請(qǐng)專利，1999年在BBRC雜志發(fā)表論文2001年國(guó)際基因命名委員會(huì)將該基因統(tǒng)一命名為PDCD5 (Program Cell Death 5)迄今有關(guān)PDCD5研究的國(guó)內(nèi)外論文超過200篇， PUBMED檢索115篇PDCD5論文；中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)檢索136篇論文,6,,,

4、正常培養(yǎng)的TF-1細(xì)胞(Driver),進(jìn)入凋亡的TF-1細(xì)胞(Tester),三輪cDNA-RDA,DNA測(cè)序和基因庫檢索,用Slot Blots和Northern Blots檢測(cè)表達(dá)的差異,RACE方法克隆PDCD5的全長(zhǎng)序列,PDCD5在E.coli中的表達(dá)、純化,PDCD5真核表達(dá)載體的構(gòu)建,PDCD5的胞內(nèi)定位,抗體制備和免疫檢測(cè),PDCD5蛋白質(zhì)的活性研究,PDCD5轉(zhuǎn)染的活性研究,PDCD5在組織和細(xì)胞中表達(dá)檢測(cè),,,,,

5、,,,,,,,,,7,PDCD5/TFAR19的Northern blots分子雜交結(jié)果,Left is RNA from normal-cultured TF-1 cellRight is RNA from TF-1 cell undergoing apoptosis,8,Sequence of PDCD5 cDNA,CTG CTC CAG CGC TGA CGC CGA GCC AT

6、G GCG GAC GAG GAG CTT GAG GCG CTG AGG AGA CAG AGG CTG GCC GAG CTG CAG GCC AAA CAC GGG 90 MET Ala Asp Glu Glu Leu Glu Ala Leu Arg Arg Gln Arg Leu Ala Glu Leu Gln Ala Lys His Gly

7、 GAT CCT GGT GAT GCG GCC CAA CAG GAA GCA AAG CAC AGG GAA GCA GAA ATG AGA AAC AGT ATC TTA GCC CAA GTT CTG GAT CAG TCG GCC 180 Asp Pro Gly Asp Ala Ala Gln Gln Glu Ala Lys His Arg Glu Ala Glu MET Arg Asn Ser Ile Leu A

8、la Gln Val Leu Asp Gln Ser Ala CGG GCC AGG TTA AGT AAC TTA GCA CTT GTA AAG CCT GAA AAA ACT AAA GCA GTA GAG AAT TAC CTT ATA CAG ATG GCA AGA TAT GGA CAA 270 Arg Ala Arg Leu Ser Asn Leu Ala Leu Val Lys Pro Glu L

9、ys Thr Lys Ala Val Glu Asn Tyr Leu Ile Gln MET Ala Arg Tyr Gly Gln CTA AGT GAG AAG GTA TCA GAA CAA GGT TTA ATA GAA ATC CTT AAA AAA GTA AGC CAA CAA ACA GAA AAG ACA ACA ACA GTG AAA TTC AAC 360 Leu Ser Glu Lys V

10、al Ser Glu Gln Gly Leu Ile Glu Ile Leu Lys Lys Val Ser Gln Gln Thr Glu Lys Thr Thr Thr Val Lys Phe Asn AGA AGA AAA GTA ATG GAC TCT GAT GAA GAT GAC GAT TAT TGA ACT ACA AGT GCT CAC AGA CTA GAA CTT AAC GGA ACA AG

11、T CTA GGA CAG 450 Arg Arg Lys Val MET Asp Ser Asp Glu Asp Asp Asp Tyr Stop AAG TTA AGA TCT GAT TAT TTA CTT TGT TTA TTG TCT ATA GCC TTT TAA AAA AAT AAA CTT GTT ATG CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 540 AAA

12、AAA AAA AAA AAA AAA,PDCD5編碼蛋白結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單,全長(zhǎng)125個(gè)氨基酸，不含二硫鍵， pI 5.65 ;無信號(hào)肽，無跨膜序列，與已知人類蛋白無同源性;S118可以被CK2磷酸化,9,,,,,,,,PDCD5基因結(jié)構(gòu)圖,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,（染色體19q12-q13.1）,cDNA,867bp,2718bp,804bp,950bp,323bp,Exon1(90bp),,,,,,,,,,,,,,,

13、ATG,TGA,,,,,,,Exon2(38bp),Exon3(62bp),Exon4(92bp),Exon5(72bp),Exon6(167bp),基因組DNA,558bp，編碼125個(gè)氨基酸,10,PDCD5蛋白在不同種屬中序列高度保守,11,11,PDCD5 蛋白結(jié)構(gòu),（PDB ID: 2CRU，by Nagashima T, et al）含雙鏈DNA結(jié)合Domain；C端 RuvA-like區(qū)域,12,如何開展基因功

14、能研究,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過基因過表達(dá)（Overexpression）研究基因功能。構(gòu)建綠色熒光蛋白表達(dá)質(zhì)粒，觀察細(xì)胞定位。表達(dá)重組蛋白，觀察其對(duì)細(xì)胞的影響。利用RNA干擾或反義寡核苷酸封閉基因的表達(dá),分析基因的生理功能動(dòng)物體內(nèi)功能研究：轉(zhuǎn)基因和基因敲除,13,,,pGEM-TTFAR19,,EcoR I,,,,EcoR I,LacZ,fi ori,ori,,TFAR19,,AmpR,,,,,,,EcoR I,,T4

15、 Ligase,,Construction of pcDITFAR19,14,PDCD5過表達(dá)促進(jìn) HeLa和 MGC-803 細(xì)胞撤除血清誘導(dǎo)的凋亡,15,15,,PDCD5對(duì)各種細(xì)胞具有促凋亡效應(yīng),但單獨(dú)不能誘導(dǎo)凋亡,16,SV40 poly A,,,,,pEGFP-C3,CMV IE,NeoR,,,EGFP,EcoR I,Sal I,,,AmpR,Sma I,BamH l,SV40 poly A,,,,,pEGFPC3PDCD

16、5,CMV IE,NeoR,,EGFP,BamH I,TFAR19,,,AmpR,Sma I,BamH l,Sma I,,MCS,,Tfar19 PCR Product,BamH I,Sma I,Xho I,,,Xho I,Klenow,Sal I,EcoR I,Klenow,T4 Ligase,,Construction of expression vector of pEGFPC3-TFAR19,,17,PDCD5蛋白主要定位在細(xì)胞

17、核,Green Fluorescein Protein staining (488nm),DAPI staining (DAPI wave length),18,VP16誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡后PDCD5出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象,0 hour 30min,2 hours

18、 8 hours,19,細(xì)胞因子撤除誘導(dǎo)TF-1細(xì)胞凋亡后促進(jìn)PDCD5核轉(zhuǎn)位,A: Cells were stained with FITC-labeled 3A3 antibody at different time points,and observed using CLSM. B: Cells were cultured in GM-CSF-free medium for 16h, then stainedwi

19、th FITC-3A3 and DAPI. Nuclear accumulation of PDCD5 and condensed nuclei were obviouslyobserved.,Yingyu Chen（陳英玉） et al:Nuclear translocation of PDCD5 (TFAR19): an early signal for apoptosis? FEBS Letter，2001，509: 191

20、,20,,,,,pL,pMTY-4,AmpR,,Xho I,Stu I,Thrombin Linker,MS2,EcoR I,,Pst I,,PDCD5 ORF PCR Product (410bp),,,,,pL,pMTY-TFAR19,AmpR,,Xho I,Thrombin Linker,MS2,EcoR I,,,Pst I,TRAF19,Sma I,Bgl I,Xho I,Xho I,,,,,Stu I,Klenow,Xho

21、 I,T4 Ligase,構(gòu)建PDCD5原核表達(dá)載體pMTY4-TFAR19,21,在大腸桿菌表達(dá)和純化重組PDCD5蛋白,M. protein marker from Promega 1. uninduced whole bacteria 2. induced whole bacteria 3. cut after thrombin 4. purified PDCD5 protein,22,Western Blot證明

22、PDCD5蛋白在凋亡TF-1細(xì)胞上調(diào)表達(dá),Left is protein from apoptotic TF-1 cellsRight is protein from normally- cultured TF-1 cells,23,重組PDCD5蛋白能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞撤除血清誘導(dǎo)的凋亡,24,,重組蛋白PDCD5能夠明顯抑制IDR誘導(dǎo)的K562細(xì)胞的克隆形成數(shù)目,25,25,細(xì)胞核蛋白PDCD

23、5具有穿膜效應(yīng),人PDCD5蛋白可以通過細(xì)胞膜的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG) 途徑從細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)，109-115氨基酸是其活性功能區(qū)。PDCD5的穿膜效應(yīng)提示其可以作為重組蛋白藥物發(fā)揮促進(jìn)腫瘤治療效應(yīng)Ying Wang（王應(yīng)） et al：Cellular uptake of exogenous human PDCD5 protein. J Biol Chem, 2

24、006, 281(34) :24803-24817,26,熒光標(biāo)記PDCD5蛋白的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)作用,27,p53N-PDCD5融合蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,28,如何封閉PDCD5的功能？,PDCD5單克隆抗體的細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入PDCD5反義寡核苷酸PDCD5反義RNA表達(dá)質(zhì)粒PDCD5 RNA干擾,29,Rui M（芮珉）,et al, Transfer of anti-TFAR19 monoclonal antibody into HeLa

25、cells by in situ electroporation can inhibit the apoptosis.Life Science，2002 Aug 30;71(15):1771-8.,抗PDCD5單克隆抗體細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入抑制 VP16誘導(dǎo)的 HeLa 細(xì)胞凋亡,30,The targeting sequences of PDCD5 siRNAs,,,31,PDCD5 siRNA 的抑制表達(dá)作用,,pGC-Non-silenci

26、ng,pGC-siPDCD5,A.,Non-silencing siRNA,siPDCD5,B.,C.,,32,siPDCD5 抑制凋亡基因Bax轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,33,siPDCD5抑制procaspase-3的切割和caspase-3活性,Chen L（陳麗娜）,et al:Short interfering RNA against the PDCD5 attenuates cell apoptosis and caspase-

27、3 activity induced by Bax overexpression.Apoptosis. 2006, 11(1):101-111,34,34,PDCD5小鼠體內(nèi)功能研究,PDCD5基因敲除小鼠胚胎致死。,PDCD5 +/+,PDCD5-/-,E13.5d.,PDCD5 +/+,PDCD5-/-,E11.5d.,PDCD5轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)凋亡細(xì)胞數(shù)量增加，抵抗化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)的皮膚腫瘤發(fā)生；意外發(fā)現(xiàn)免疫系統(tǒng)改變，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（

28、Treg）比例增加，小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）的發(fā)病減輕。,35,36,36,PDCD5轉(zhuǎn)基因小鼠凋亡細(xì)胞明顯增加,Li,Y et al:Transgenic human programmed cell death 5 expression in mice suppresses skin cancer development by enhancing apoptosis.Life Sci. 2013, 92(24-26):

29、1208-14,37,37,PDCD5轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)3-MC誘導(dǎo)的皮膚癌具有抑制作用,38,PDCD5轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟和胸腺nTreg細(xì)胞增加,Xiao,J（肖娟） et al: PDCD5 negatively regulates autoimmunity by upregulating FOXP3+ regulatory T cells and suppressing Th17 and Th1 responses. J Autoimmu

30、nity.2013 Dec;47:34-44,39,39,A,B,C,PDCD5轉(zhuǎn)基因小鼠的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎發(fā)病減輕,40,分子機(jī)制研究,Pulldown 、Co-IP？、ELISA實(shí)驗(yàn)證明PDCD5結(jié)合Caspase-3，促進(jìn)Caspase-3的穩(wěn)定性（孫榮華博士論文，李現(xiàn)亭博士論文）.,ELISA for PDCD5-Caspase3 interaction,41,PDCD5對(duì)caspase-3 穩(wěn)定性的影響(in vitr

31、o),,42,42,42,,Nuclear translocation,?,+,+,43,43,,德國(guó)Stelzl等2005年利用規(guī)?；湍鸽p雜交發(fā)現(xiàn)PDCD5結(jié)合TIP60 （組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶, ）、EEF1（翻譯延伸因子）、RIF1（酵母端粒蛋白同源分子）、ACP5（酸性磷酸酶）Stelzl U et al: A human protein-protein interaction network: a resource for a

32、nnotating the proteome. Cell. 2005, 122(6):957-68,PDCD5在細(xì)胞核如何發(fā)揮作用？,44,本實(shí)驗(yàn)室證明PDCD5結(jié)合TIP60，促進(jìn)組蛋白乙?；?Xu LJ（許蘭?。?et al:PDCD5 interacts with Tip60 and functions as a cooperator in acetyltransferase activity and DNA damage-ind

33、uced apoptosis.Neoplasia, 2009, 4:345-354,45,45,TIP60是一種重要的乙酰轉(zhuǎn)移酶，促進(jìn)組蛋白、P53和FOXP3等分子的乙?；揎棧瑓⑴c基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞凋亡、DNA損傷修復(fù)及免疫調(diào)節(jié)功能。,46,46,PDCD5直接與p53結(jié)合，是p53的正調(diào)節(jié)因子,Xu L(許蘭?。?et al:PDCD5 interacts with p53 and functions as a positive re

34、gulator in the p53 pathway. Apoptosis. 2012 Nov;17(11):1235-45.,47,47,PDCD5促進(jìn)FOXP3乙?；⒃黾覨OXP3蛋白穩(wěn)定性,Xiao,J（肖娟） et al: PDCD5 negatively regulates autoimmunity by upregulating FOXP3+ regulatory T cells and suppressing Th17

35、 and Th1 responses. J Autoimmunity.2013, Sep 5.[Epub ahead of print],與PDCD5結(jié)合的其他分子(1),NF-κB p65結(jié)合PDCD5基因啟動(dòng)子區(qū)，促進(jìn)PDCD5表達(dá)，促進(jìn)凋亡(Murshed F et al, Apoptosis, 2014 Mar;19(3):506-17)。,48,與PDCD5結(jié)合的其他分子(2),分子伴侶CCT結(jié)合PDCD5蛋白，抑制β-tub

36、ulin折疊，促進(jìn)凋亡（Tracy CM et al,JBC, 2014 Feb 14;289:4490-502),49,與PDCD5結(jié)合的其他分子(3),腫瘤抑制蛋白pVHL結(jié)合PDCD5，促進(jìn)MDM2降解，從而促進(jìn)p53的穩(wěn)定性，促進(jìn)凋亡（Essers PB et al,Oncogene. 2014 Jan 27.[Epub ahead of print]）。,50,51,51,,PDCD5,,,FOXP3,Active caspa

37、se-3,,,,,Nuclear translocation,TIP60,Histone,P53,Apoptosis,Acetylation,,?,,,Acetylation,,PDCD5的分子作用機(jī)制,,,Immune regulation,Acetylation,CCT,,β-tubulin,,inhibit,pVHL,,Apoptosis,,,Apoptosis,52,52,PDCD5從基礎(chǔ)到臨床,在疾病時(shí)情況下的是否表達(dá)異常

38、？遺傳變異是否影響疾病易感性？有無臨床診斷價(jià)值（Biomarker)？是否有治療價(jià)值？,53,PDCD5 mRNA 在不同人類正常組織中的表達(dá),54,54,PDCD5在腫瘤中下調(diào)表達(dá),1。肝癌（PNAS， Int J Oncol,中國(guó)普通外科雜志） 2。乳腺癌（NEJM）3。白血病（北醫(yī)學(xué)報(bào)，Leukemia Res）4。子宮頸癌（北醫(yī)學(xué)報(bào)）5?？谇击[癌（北醫(yī)學(xué)報(bào)）6。卵巢上皮癌（中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志）；囊腺癌預(yù)后相關(guān)（

39、Oncol Rep）7。甲狀腺乳頭狀癌（中華內(nèi)科雜志）8。胃癌，預(yù)后相關(guān)（Apoptosis）9。肺癌（J Clin Oncol ）10.腎透明細(xì)胞癌，預(yù)后相關(guān)（南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)）11。腦星型膠質(zhì)瘤（Oncol Rep）12。多發(fā)性骨髓瘤（中南大學(xué)學(xué)報(bào)）13.骨肉瘤（Apoptosis），預(yù)后相關(guān)（J Surg Oncol）14.前列腺癌（Chin Med Sci J）15.蕈樣肉芽腫（山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)）16.喉鱗狀

40、細(xì)胞癌(J Int Med Res),55,PDCD5的表達(dá)與腎癌預(yù)后相關(guān),譚萬龍，等：腎透明細(xì)胞癌PDCD5表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，26(9)：1316-1318,56,PDCD5的表達(dá)與胃癌預(yù)后相關(guān),Yang YH,et al:Expression of programmed cell death 5 gene involves in regulationOf apoptosis in gastric tu

41、mor cells.Apoptosis. 2006 Jun;11(6):993-1001.,57,PDCD5的表達(dá)與骨肉瘤預(yù)后相關(guān),Chen C,et al:Prognostic significance of downregulated expression of programmed cell death 5 in chondrosarcoma.J Surg Oncol. 2010 Dec 1;102(7):838-43.,58,

42、58,1。系統(tǒng)性紅斑狼瘡表達(dá)上調(diào)（中華風(fēng)濕病學(xué)雜志）2。老年性白內(nèi)障表達(dá)上調(diào)（眼科研究）3。骨關(guān)節(jié)炎表達(dá)上調(diào)（Apoptosis,Acta Pharmacol Sin）4。橋本病甲狀腺表達(dá)上調(diào)（中華內(nèi)分泌代謝雜志）5。多囊卵巢綜合征表達(dá)上調(diào)（北京大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版）6. 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)和滑膜細(xì)胞表達(dá)下調(diào)（Apoptosis）7. 狼瘡性腎炎病人腎小管表達(dá)下調(diào)（臨床兒科雜志）8. 銀屑病患者皮損表皮細(xì)胞表達(dá)下調(diào)（中華皮科

43、雜志）9. 支氣管哮喘病人血清PDCD5含量上調(diào)（中華醫(yī)學(xué)雜志）10.肝損傷病人血清PDCD5水平上升（J Immunoassay Immunochem）11.膿毒血癥病人血清PDCD5水平上升（北京大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版）12.大骨節(jié)?。↘ashin-Beck病)關(guān)節(jié)軟骨表達(dá)上調(diào)（Chin. Sci. Bull）,PDCD5在其他疾病中的異常表達(dá),59,59,膿毒血癥病人血清PDCD5水平明顯上升(ELISA檢測(cè)）,劉慧琳等：膿毒癥患

44、者中血清程序化細(xì)胞死亡因子5水平的變化。北京大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版，2013，45：238,60,ELISA試劑盒檢測(cè)自身免疫病病人血清PDCD5水平增加,李婉紅，等：凋亡基因PDCD5及抗核抗體譜在自身免疫病中的表達(dá)。中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2012 ，22 （5 ）：1044,61,61,PDCD5的遺傳多態(tài)性與白血病相關(guān),PDCD5啟動(dòng)子區(qū)存在2個(gè)連鎖不平衡的SNPs：-11G/-27A or -11A/-27G前者比后者明顯高表達(dá)PD

45、CD5白血病患者的雜合子頻率明顯高于正常人, 25.58% vs 11.85％,Xi Ma(馬曦）, Guorui Ruan（阮國(guó)瑞）, et al: Two single-nucleotide polymorphisms with linkage disequilibrium in the human PDCD5 gene 5’ regulatory region affect promoter activity and the s

46、usceptibility of CML in Chinese population. Clin.Cancer.Res. 2005, 11: 8592 - 8599,62,PDCD5 5’調(diào)控區(qū)兩個(gè)新SNP的發(fā)現(xiàn),SNPs的篩選：45個(gè)樣本直接測(cè)序（-11位和-27位同時(shí)出現(xiàn)SNP）,63,PDCD5 SNP在HeLa細(xì)胞的啟動(dòng)子活性,64,PDCD5 SNP影響HeLa撤血清誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)子活性,65,PDCD5啟動(dòng)子區(qū)SNP的C

47、ML基因型頻率,Heterozygous ratio: 25.58% 、11.85％,66,PDCD5 SNPs 在AML患者中的研究,67,RQ-PCR檢測(cè)不同基因型CML患者PDCD5的mRNA水平,68,69,Spinola等通過SNPs全基因組掃描技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PDCD5基因上游35kb處的SNP與肺癌發(fā)病相關(guān)，GG或CG基因型攜帶者肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高；肺腺癌組織中PDCD5的mRNA比正常肺組織低2.4倍。超表達(dá)該基因的人NCI-

48、H520細(xì)胞系克隆形成能力明顯下降。作者認(rèn)為PDCD5可能是新的抑癌基因,Spinola M,et al:Association of the PDCD5 locus with lung cancer risk and prognosis in smokers.J Clin Oncol，2006, 24(11):1672-8.,PDCD5的遺傳多態(tài)性與肺癌相關(guān),70,70,PDCD5在腫瘤治療中的應(yīng)用,PDCD5腺病毒或重組蛋白有可能

49、作為放化療的增敏劑，提高亞適劑量化學(xué)藥物的抗腫瘤療效，降低其對(duì)毒性，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，具有潛在的臨床意義。,71,PDCD5腺病毒在裸鼠體內(nèi)對(duì)K562細(xì)胞的化療增敏效應(yīng),Ruan GR（阮國(guó)瑞),et al:Adenovirus-mediated PDCD5 gene transfer sensitizes K562 cells to apoptosis induced by idarubicin in vitro and in vivo

50、.Apoptosis. 2008，13:641,72,單純化療藥IDR的抑瘤率達(dá)60.27%時(shí)，IDR聯(lián)合PDCD5抑瘤率可達(dá)92.03％,裸鼠瘤內(nèi)注射PDCD5重組蛋白增加K562細(xì)胞對(duì)IDR的敏感性,Shi L（史琳）, et al:Potent antitumor activities of recombinant human PDCD5 protein in combination with chemotherapy dr

51、ugs in K562 BBRC. 2010 ,;96(2):224-30,73,裸鼠腹腔注射PDCD5重組蛋白增加K562細(xì)胞對(duì)IDR的敏感性：平均瘤塊57.7mm3開始治療,74,重組PDCD5腹腔注射聯(lián)合IDR治療實(shí)驗(yàn)各組小鼠移植瘤重量,*同單獨(dú)化療藥相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P＜0.05；***同單獨(dú)化療藥相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P＜0.001；＃同伊馬替尼治療相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；＃＃同伊馬替尼治療相比

52、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01,（腫瘤平均體積達(dá)到140 mm3開始治療）,75,,重組PDCD5對(duì)骨肉瘤的化療增敏作用研究,**p<0.01 vs. control ***p<0.001 vs. control #p<0.01 vs. cisplatin Cisplatin: 2mg/kgPDCD5: 50mg/kg,BALB/c nude mice established s.c. chondros

53、arcoma tumors (approximately 4mm2, day 3) were intraperitoneally treated with indicated reagents.,(Chen C et al:Apoptosis. 2010 Jul;15(7):805-13),76,76,PDCD5在自身免疫病治療中的應(yīng)用,PDCD5重組蛋白可以通過TIP60促進(jìn)FOXP3的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而增強(qiáng)Treg細(xì)胞數(shù)量和功能，對(duì)細(xì)

54、胞免疫產(chǎn)生負(fù)調(diào)節(jié)，從而有可能作為治療自身免疫病的新型基因工程藥物。,77,77,Control Ova rhTNFR:Fc rhPDCD5,A,B,C,D,E,PDCD5重組蛋白抑制OVA誘導(dǎo)的大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,肖娟等：Inflammation. 2014 Sep 2. [Epub ahead of print],78,78,PDCD5的其他功能研究,本實(shí)驗(yàn)室證明PDCD5促進(jìn)細(xì)胞Paraptosis(一種非

55、凋亡的程序性細(xì)胞死亡）；上海交通大學(xué)利用PDCD5心臟特異表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠證明PDCD5促進(jìn)細(xì)胞自噬（Autophagy)。上海復(fù)旦大學(xué)發(fā)現(xiàn)PDCD5的水稻同源基因（OsPDCD5)參與水稻的凋亡調(diào)節(jié)，并與水稻雄性不育有關(guān)；日本國(guó)家寄生蟲病研究中心研究表明，PDCD5的弓形蟲同源基因編碼分泌蛋白，促進(jìn)宿主細(xì)胞的凋亡，與弓形蟲致病性有關(guān)；軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究表明，PDCD5反義寡核苷酸能夠有效抑制流感病毒復(fù)制北醫(yī)解剖與組織胚胎學(xué)系證明

56、PDCD5 siRNA體內(nèi)給藥可以抑制大鼠腦缺血再灌注損傷,79,PDCD5,,,原核表達(dá),,真核基因轉(zhuǎn)染,抑制內(nèi)源性表達(dá),,反義寡核苷酸,,RNAi,,單克隆抗體,重組蛋白功能,,基因調(diào)控研究,細(xì)胞內(nèi)定位,,結(jié)合蛋白,,超表達(dá)活性,,功能性SNP,,,,PTD功能,,疾病易感性,,腺病毒表達(dá),,動(dòng)物實(shí)驗(yàn),,臨床標(biāo)本檢測(cè),,PDCD5功能研究技術(shù)路線,,動(dòng)物實(shí)驗(yàn),,80,80,致謝,本研究工作的主要貢獻(xiàn)者包括： 劉紅濤，張穎妹，陳