日本血吸蟲Argonaute蛋白(AGO)家族成員AGO2和AGO3的初步研究.pdf

1、血吸蟲病人畜共患，其分布廣泛，危害嚴(yán)重。目前，血吸蟲病防治工作仍是世界衛(wèi)生組織高度重視的當(dāng)前要?jiǎng)?wù)。吡喹酮是治療血吸蟲病首選藥物，由于長期大量使用該種藥物使得耐藥蟲株的產(chǎn)生，加之血吸蟲重復(fù)感染問題嚴(yán)重，單靠藥物不能解決再度感染感染的問題。新藥研制需要花費(fèi)巨大財(cái)力物力，其治療效果也不能達(dá)到預(yù)期效果。發(fā)展血吸蟲疫苗是綜合防治血吸蟲病的重要發(fā)展戰(zhàn)略，血吸蟲疫苗研制也是世界衛(wèi)生組織優(yōu)先考慮防治血吸蟲病的重要舉措。近幾十年來血吸蟲的防治取得了突破性

2、的進(jìn)展。但是疫苗的研究效果也未取得突破性進(jìn)展，還未達(dá)到世界衛(wèi)生組織提出的達(dá)到40％-50％的免疫效果。因此，繼續(xù)篩選有效藥物靶標(biāo)和抗血吸蟲疫苗成為研究熱點(diǎn)。
　　 本研究利用RACE技術(shù)獲得了兩個(gè)編碼日本血吸蟲Argonaute蛋白(AGO)的全長cDNA，生物信息學(xué)分析表明這兩個(gè)蛋白均具有PAZ和PIWI兩功能域，為Argonaute家族蛋白的典型特征。同源比對(duì)以及進(jìn)化樹分析兩蛋白分別與曼氏血吸蟲AGO2和AGO3有很高的同源

3、性，推測為日本血吸蟲AGO家族蛋白AGO2和AGO3。將編碼日本血吸蟲AGO蛋白兩基因片段克隆到pET-28a(+)載體中構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化BL21。利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了重組蛋白，純化重組蛋白并制備了高效多克隆抗體。本研究利用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)分析AGO蛋白在血吸蟲7d、14d、21d、32d、42d不同時(shí)期轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果表明兩蛋白在血吸蟲各時(shí)期均有轉(zhuǎn)錄。初步分析AGO2和AGO3相對(duì)其它時(shí)期21d、42d有較高

4、轉(zhuǎn)錄水平。利用westenblot分析AGO蛋白在血吸蟲7d、14d、21d、32d、42d、28d♀和28d(?)表達(dá)情況。在各個(gè)時(shí)期都能觀察到多克隆抗體和血吸蟲AGO蛋白特異結(jié)合條帶。結(jié)果表明AGO蛋白在血吸蟲成蟲時(shí)期表達(dá)量較高，且雌雄差異表達(dá)分析表明，雄蟲高表達(dá)。
　　 本研究獲得了兩個(gè)編碼日本血吸蟲AGO全長cDNA，對(duì)其初步研究為進(jìn)一步深入研究AGO蛋白在日本血吸蟲生長發(fā)育中的功能及以此為切入點(diǎn)為開發(fā)新的抗血吸蟲藥物靶