雞抗RA蛋黃抗體消除油乳劑滅活疫苗免疫空白期的研究.pdf

1、自詹拉發(fā)明牛痘苗以來,疫苗是防控疫病的主要武器。根據(jù)微生物是否成活,疫苗被分為活疫苗和滅活疫苗兩大類。研究表明,動物接種疫苗后需要經(jīng)過一定時間才能產(chǎn)生出堅強免疫力。在疫苗學(xué)中,將疫苗接種至免疫力產(chǎn)生需要的時間稱為誘導(dǎo)期。在誘導(dǎo)期內(nèi),動物處于易感狀態(tài),如遇病原侵襲則發(fā)病,因此這一時期又被稱之為免疫空白期。滅活疫苗因其微生物被殺滅,通常認為安全性好,加之采用礦物油等佐劑,使之免疫期也較長,在動物防疫中廣泛應(yīng)用。滅活疫苗最大的問題是,誘導(dǎo)期通

2、常為10-14天,接種后免疫空白期太長,時有免疫失敗發(fā)生。解決滅活疫苗免疫空白期問題顯然為生產(chǎn)實際所急需。我們提出解決這一問題新思路,即應(yīng)用已經(jīng)可以商品化規(guī)?；a(chǎn)的雞特異蛋黃抗體與滅活疫苗或同時注射或制成特殊混合制劑,其中的抗體被快速吸收后可在數(shù)小時內(nèi)產(chǎn)生被動免疫保護,抗體的保護作用遞降后,滅活疫苗誘導(dǎo)的主動免疫發(fā)揮作用。這樣就可以保證免疫接種后誘導(dǎo)期為零,實現(xiàn)消除滅活疫苗的免疫空白期效果。本研究用鴨疫里默氏桿菌(Riemerella

3、anatipestifer,RA)為模式菌,免疫雞獲得其特異蛋黃抗體,然后與其油乳劑滅活疫苗同時注射,攻毒試驗結(jié)果證明,滅活疫苗誘導(dǎo)的主動免疫保護與抗體吸收后的被動免疫實現(xiàn)了疊加,消除了免疫空白期。
　　 鴨傳染性漿膜炎(Infectiousserositis,IS)是鴨的重大疫病之一,各種年齡均可發(fā)病,以1-8周齡發(fā)病率(Morbility,Mb)和死亡率(Mortality,Mt)高,經(jīng)濟損失很大。IS的病原是RA,有21個

4、血清型,型間缺乏交叉免疫保護,主要流行血清型為1、2、5等。RA活疫苗和滅活疫苗均有文獻報道,以后者為主。雛鴨接種RA滅活疫苗后,免疫空白期為10-14天,常以使用RA敏感抗生素彌補防疫空白,生產(chǎn)實際中存在濫用現(xiàn)象,導(dǎo)致耐藥菌產(chǎn)生和藥物殘留,影響食品安全。因此,研究RA蛋黃抗體與其滅活疫苗同時注射的免疫效果對于養(yǎng)鴨業(yè)具有重大意義。本文選擇川渝地區(qū)RA流行主要血清型中的強毒力AF株作為疫苗制備和抗體制備菌種,測定其對不同日齡不同品種肉鴨的

5、易感性、免疫原性和制備的油乳劑滅活疫苗免疫后對肉鴨血細胞和增重的影響,最后開展了特異蛋黃抗體消除免疫空白期試驗。研究取得了以下主要結(jié)果。
　　 1.AF株RA毒力AF株RA對16日齡花邊肉鴨的LD50為4.8×106.98CFU。該菌株對不同日齡的花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨的毒力存在差異,對14-43日齡花邊肉鴨有很強致病力,除14日齡為63.6％和36.4％外,其他日齡的發(fā)病率和死亡率均達到或超過80％和60％。對14-55日齡櫻桃

6、谷肉鴨致病力更強,除55日齡為54.5％和36.4％外,14、20、35日齡組發(fā)病率和死亡率均達到或超過90％和80％,28日齡組發(fā)病率和死亡率均超過50％。試驗結(jié)果表明,18-20日齡是AF株RA感染花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨的最敏感時期。
　　 2.AF株RA油乳劑滅活疫苗的免疫誘導(dǎo)期和保護期AF株RA對4日齡花邊肉鴨的適宜免疫菌量是菌液濃度A525值為1.944。此劑量組攻毒保護率最高能達到100％。RA油乳劑滅活疫苗接種1.0

7、mL/只和2.0mL/只的保護效果好,但若接種2.0mL/只,劑量太大,可能會導(dǎo)致吸收不完全。AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫4日齡花邊肉鴨和櫻桃谷肉鴨后,疫苗免疫誘導(dǎo)期約為10天,即接種疫苗后10天保護率可達80％左右。4日齡櫻桃谷肉鴨接種AF株RA油乳劑滅活疫苗后50天,仍能達到80％以上的保護效果。
　　 3.雞抗AF株RA特異蛋黃抗體(RA-cIgY)保護率消長規(guī)律AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫蛋雞,收集不同時期RA-cIgY

8、。4日齡雛鴨注射RA-cIgY1mL后20日齡攻毒,結(jié)果是,二免后8-15天和16-25天收集的RA-cIgY組Mb為45.5％,Mt為36.4％；三免后1-14天和15-28天收集的RA-cIgY組發(fā)病率和死亡率均顯著降低,保護指數(shù)均超過60；三免后29-42天和43-51天保護指數(shù)最高也只達到50。由此可知,AF株RA油乳劑滅活疫苗給蛋雞進行三免后1-28天收集的RA-cIgY保護效果最好。
　　 4.RA-cIgY彌補油乳

9、劑滅活疫苗免疫空白期AF株RA滅活抗原三免后1-28天收集的RA-cIgY1mL與AF株RA油乳劑滅活疫苗1mL同時注射4日齡雛鴨,于免疫后31天,即35日齡攻毒,保護指數(shù)約為88,與AF株RA油乳劑滅活疫苗單獨接種組保護指數(shù)約83差異不明顯.RA-cIgY1mL的發(fā)病率和死亡率與攻毒對照組相差不大,無保護率。試驗結(jié)果顯示,RA-cIgY對AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫保護效果沒有影響。10日齡和16日齡雛鴨同時注射RA-cIgY1mL與

10、AF株RA油乳劑滅活疫苗后4天,即14日齡或20日齡攻毒,試驗組保護指數(shù)均為100,同時設(shè)置的RA-cIgY1mL組保護指數(shù)約為80,AF株RA油乳劑滅活疫苗1mL保護指數(shù)為約為50。實驗結(jié)果表明,AF株RA油乳劑滅活疫苗免疫后4天沒有誘導(dǎo)出免疫保護效果,RA-cIgY無論單獨注射還是與AF株RA油乳劑滅活疫苗同時注射均產(chǎn)生出良好的被動免疫保護效果,在滅活疫苗免疫空白期起到了免疫保護效果。
　　 RA-cIgY與油乳劑滅活疫苗同