抗人大腸桿菌免疫雞蛋黃抗體的研究.pdf

1、高免蛋黃抗體具有生產(chǎn)過程簡(jiǎn)單、效率高等特點(diǎn),已越來越多地應(yīng)用于人類許多疾病的預(yù)防和治療以及生物學(xué)的高度特異性檢測(cè)等領(lǐng)域中,并取得顯著成效.本文主要研究了以人致病性大腸桿菌為抗原,免疫母雞,研究獲得含有高效價(jià)蛋黃抗體的雞蛋的最佳條件;建立快速、準(zhǔn)確、定量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定蛋黃抗體(IgY)效價(jià)的技術(shù);研究抗人大腸桿菌IgY分離純化條件及其理化、生化特性;研究食品加工過程中的各種因素對(duì)大腸桿菌特異IgY生物活性的影響;探討

2、抗人大腸桿菌免疫雞蛋抗體的功能及其機(jī)理;評(píng)估蛋黃抗體的安全性.主要獲得如下結(jié)果:(1)對(duì)獲得含有高效價(jià)蛋黃抗體的雞蛋的最佳條件研究:(2)采取熱酚法提取E. coli LPS作為抗原,以酶標(biāo)記的兔抗雞IgY抗抗體(IgG)為二抗建立起來的間接ELISA技術(shù)檢測(cè)特異蛋黃抗體IgY的抗體效價(jià),以酶標(biāo)二抗工作濃度為1:2000,LPS抗原包被濃度為1:20(10ug/m1),可以檢測(cè)到雞特異IgY抗體效價(jià)為1:10240.用豬源EHEC和人源

3、沙門氏菌的LPS抗原進(jìn)行了交叉檢測(cè),表現(xiàn)出高度的特異性.(3)通過對(duì)蛋黃抗體(IgY)的分離純化條件研究發(fā)現(xiàn),乙醇沉淀抗體的最佳條件是粗提液:乙醇(V/V)為1:0.35;經(jīng)DEAE-Sephrose fast-flow離子交換層析和Sephacryl S-200凝膠排阻層析連續(xù)純化后可得到電泳純的抗人大腸桿菌IgY,其MW為186400Da(電泳法)或186500Da(凝膠過濾法),該抗體由兩個(gè)亞基構(gòu)成,分子質(zhì)量分別為65900Da和

4、24600Da,其等電點(diǎn)為5.5.(4)通過穩(wěn)定性研究:(5)通過對(duì)抗人大腸桿菌免疫蛋黃抗體的功能及其機(jī)理探討發(fā)現(xiàn),抗人大腸桿菌卵黃抗體濃度大于5mg/ml,可對(duì)大腸桿菌有明顯的體外抑菌作用;抗人大腸桿菌IgY對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的乳鼠腸道感染具有顯著的預(yù)防和治療作用;抗人大腸桿菌卵黃抗體可抑制大腸桿菌對(duì)腸上皮細(xì)胞粘附作用,隨著大腸桿菌濃度的不斷升高,粘附率不斷增加,上皮細(xì)胞濃度的增加能提高ETEC對(duì)其的粘附率.(6)研究發(fā)現(xiàn),4.0 kGy