藥學(xué)畢業(yè)論文舟山野生靈芝多糖制備工藝的優(yōu)化研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　舟山野生靈芝多糖制備工藝的優(yōu)化研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí)

2、藥學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目 錄</

3、b></p><p><b>　　1前言：6</b></p><p><b>　　2儀器與材料7</b></p><p><b>　　2.1實(shí)驗(yàn)儀器7</b></p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)材料7</b></p><

4、;p><b>　　3 實(shí)驗(yàn)方法8</b></p><p>　　3.1樣品預(yù)處理8</p><p>　　3.2靈芝多糖的提取8</p><p>　　3.3不同因素對(duì)靈芝多糖提取量的影響（單因素實(shí)驗(yàn)）8</p><p>　　3.4制定靈芝多糖最佳制備工藝條件的正交試驗(yàn)9</p><p>

5、;<b>　　4結(jié)果與討論10</b></p><p>　　4.1不同因素對(duì)靈芝多糖提取量的影響10</p><p>　　4.2正交試驗(yàn)靈芝多糖粗品得量13</p><p><b>　　5結(jié)論14</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：14</b></p

6、><p>　　[摘要] 靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，因此，也特別受到醫(yī)藥科技工作者的重視，研究報(bào)道也最多。現(xiàn)知靈芝多糖有廣泛的藥理活性，能提高機(jī)體免疫力，提高機(jī)體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、抗輻射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質(zhì)能力，延長(zhǎng)壽命，靈芝多糖還具有刺激宿主非特異性抗性、免疫特異反應(yīng)以及抑制移植腫瘤生理活性的特性。多糖分子量大于1×104時(shí)顯示強(qiáng)抑制腫瘤活性，活性強(qiáng)弱還與

7、多糖鏈分叉的程度及支鏈上羥基的數(shù)量有關(guān)。 對(duì)心血管疾病、氣喘、過(guò)敏、神經(jīng)衰弱、胃熱等有顯著效果。還具有降血壓、降血脂、解血瘀、改善血液循環(huán)、皮膚美容等作用。靈芝的多種藥理活性大多和靈芝多糖有關(guān)。本試驗(yàn)利用微波技術(shù)研究了料液比、微波作用時(shí)間和微波功率對(duì)靈芝多糖提取率的影響規(guī)律，采用正交試驗(yàn)，得出靈芝多糖提取工藝的最佳參數(shù)組合。結(jié)果表明最佳工藝參數(shù)是：料液比1:40，微波功率600W,微波時(shí)間30min。</p><p&

8、gt;　　[關(guān)鍵詞]：靈芝多糖 微波輔助提取 正交 分離純化</p><p>　　[Abstract]Ganoderma lucidum polysaccharides is one of the most effective ingredients, therefore, also particularly affected by medical science and technology workers s

9、eriously, study reports also the most. Ganoderma lucidum polysaccharides are known a wide range of pharmacological activity, can improve immunity, enhance the body hypoxia tolerance, elimination of free radicals, inhibit

10、 tumor, anti-radiation, the liver, bone marrow, blood synthesis of DNA, RNA, protein ability to prolong life, Gan</p><p>　　[Keywords]ganoderma lucidum polysaccharides microwave assisted extraction orthogonal

11、 purification</p><p><b>　　1前言：</b></p><p>　　靈芝是擔(dān)子菌綱多孔菌科(Polyporaceae)靈芝屬(Ganodelma)真菌赤芝G．lucidum·karst和紫芝G．japonicrn L loyd的總稱，　主要含麥角甾醇0.3%～0.4%，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。在水溶性提取液中含有水

12、溶性蛋白質(zhì)，天門冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸等多種氨基酸，多肽及多糖類。尚含樹脂、內(nèi)酯、香豆精等。 </p><p>　　世界上靈芝科的種類主要分布在亞洲、澳洲、非洲及美洲的熱帶及亞熱帶，少數(shù)分布于溫帶。地處北半球溫帶的歐洲僅有靈芝屬的4種，而北美洲大約5種。我國(guó)地跨熱帶至寒溫帶，靈芝科種類多而分布廣。 而靈芝則主要分布在中國(guó)，朝鮮半島和日本。靈

13、芝作為擁有數(shù)千年藥用歷史的中國(guó)傳統(tǒng)珍惜藥材，具備很高的藥用價(jià)值，經(jīng)過(guò)科研機(jī)構(gòu)數(shù)十年的現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，靈芝對(duì)于增強(qiáng)人體免疫力，調(diào)節(jié)血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護(hù)肝，促進(jìn)睡眠等方面均具有顯著療效。一、 抗腫瘤作用自身免疫功能的低下或失調(diào)，是腫瘤之所以會(huì)發(fā)生并擴(kuò)展的重要原因。靈芝是最佳的免疫功能調(diào)節(jié)和激活劑，它可顯著提高機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)患者自身的抗癌能力。 靈芝可以通過(guò)促進(jìn)白細(xì)胞介素-2的生成，通過(guò)促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能、

14、通過(guò)提升人體的造血能力尤其是白細(xì)胞的指標(biāo)水平，以及通過(guò)其中某些有效成分對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用，成為抗腫瘤、防癌以及癌癥輔助治療的優(yōu)選藥物。 靈芝對(duì)人體幾乎沒(méi)有任何毒副作用。這種無(wú)毒性的免疫活化劑的優(yōu)點(diǎn)，恰恰是許多腫瘤化療藥物和其它免疫促進(jìn)劑都不具有的。 　　</p><p>　　保肝解毒作用 　靈芝對(duì)多種理化及生物因素引起的肝損傷有保護(hù)作用。無(wú)論在肝臟損害發(fā)生前還是發(fā)生后，服用靈芝都可保護(hù)肝臟，減輕肝損傷。靈芝能促進(jìn)

15、肝臟對(duì)藥物、毒物的代謝，對(duì)于中毒性肝炎有確切的療效。尤其是慢性肝炎，靈芝可明顯消除頭暈、乏力、惡心、肝區(qū)不適等癥狀，并可有效地改善肝功能，使各項(xiàng)指標(biāo)趨于正常。 所以，靈芝可用于治療慢性中毒、各類慢性肝炎、肝硬化、肝功能障礙。 三、 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用 　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均表明，靈芝可有效地?cái)U(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量，改善心肌微循環(huán)，增強(qiáng)心肌氧和能量的供給，因此，對(duì)心肌缺血具有保護(hù)作用，可廣泛用于冠心病、心絞痛等的治療和預(yù)防。對(duì)高血

16、脂病患者，靈芝可明顯降低血膽固醇、脂蛋白和甘油三脂，并能預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。對(duì)于粥樣硬化斑塊已經(jīng)形成者，則有降低動(dòng)脈壁膽固醇含量、軟化血管、防止進(jìn)一步損傷的作用。并可改善局部微循環(huán)，阻止血小板聚集。這些功效對(duì)于多種類型的中風(fēng)有良好的防治作用。</p><p>　　近幾十年來(lái),國(guó)內(nèi)外相關(guān)科技人員對(duì)靈芝多糖的分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性構(gòu)效等方面進(jìn)行了大量的工作,并取得了不少可喜的成果,但同時(shí)我們也應(yīng)當(dāng)看到

17、,一些實(shí)驗(yàn)研究成果與臨床應(yīng)用還存在一定的距離。一些提取、分離手段還僅局限在實(shí)驗(yàn)室,不能用于工業(yè)生產(chǎn)。在理論上對(duì)GLPS的機(jī)制還不清楚。隨著分離,純化技術(shù)的不斷創(chuàng)新,構(gòu)效關(guān)系的不斷深入,靈芝多糖會(huì)在更廣闊的領(lǐng)域具有更廣泛的發(fā)展前景</p><p><b>　　2儀器與材料</b></p><p><b>　　2.1實(shí)驗(yàn)儀器</b></p>

18、;<p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p><b>　　2.2.1主要試劑</b></p><p>　　試劑 規(guī)格 廠家</p><p>　　葡萄糖對(duì)照品

19、 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　濃硫酸 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　95%乙醇 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><

20、p>　　無(wú)水乙醇 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　氯仿 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　正丁醇 分析純

21、 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　蒸餾水 自制 </p><p>　　2.2.2舟山野生靈芝</p><p>　　于2010年采自舟山本島的野生靈芝</p><p><b>　　3

22、 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p><b>　　3.1樣品預(yù)處理</b></p><p>　　將靈芝用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，然后將靈芝粉末過(guò)70目篩，放于干燥箱中干燥備用。</p><p>　　3.2靈芝多糖的提取</p><p>　　準(zhǔn)確稱取1.000 g的靈芝粉末于三頸瓶中，加入蒸餾水，微波提取。離心分離2

23、0分鐘，抽濾，濾渣加入適量的水洗滌，過(guò)濾三次，合并幾次的提取液，減壓濃縮至原體積的1/4，Savage法除蛋白，活性炭脫色，置于分液漏斗中靜置3 h，取上層溶液，加入4倍體積的95%乙醇，靜置24 h，離心，取沉淀，真空冷凍干燥后得多糖粗品。取粗多糖粉末加蒸餾水定容至100 mL待用。</p><p>　　3.3不同因素對(duì)靈芝多糖提取量的影響（單因素實(shí)驗(yàn)）</p><p>　　3.3.1制

24、定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg, 置于100mL容量瓶中, 加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,配置成1.00mg/mL。精密吸取0.0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL。加入有塞試管，補(bǔ)水至4mL。精密加入6%苯酚溶液1mL，迅速加入濃硫酸5mL，蓋上塞搖勻，置于100℃水浴10min，冷卻后于490nm處測(cè)定吸光度，同樣處理的蒸餾水作為空白。<

25、/p><p>　　以吸光度為縱坐標(biāo)，多糖的濃度為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算回歸方程。（結(jié)果見圖3-1）</p><p>　　3.3.2多糖提取量的測(cè)定</p><p>　　取制備好的靈芝多糖溶液0.3ml，補(bǔ)水至4 mL，加入6%苯酚1mL，混勻后加入濃硫酸5 mL，沸水浴加熱15min取出，流水冷卻，在490nm下測(cè)定其吸光度， 各濃度平行測(cè)定三次，以4.0 mL水按同樣

26、操作為空白，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得出靈芝多糖溶液的濃度，計(jì)算靈芝多糖提取量。</p><p>　　3.3.3微波功率對(duì)靈芝多糖提取量的影響</p><p>　　準(zhǔn)確稱取1 g靈芝粉末4份，分別置于三頸瓶中，加入20mL的蒸餾水，溫度50 ℃，分別設(shè)置微波功率300 W、400 W、500 W、600 W，提取20 min。然后按照3.2項(xiàng)方法進(jìn)行操作，用苯酚—硫酸法測(cè)定多糖含量，計(jì)算多糖提取

27、率，結(jié)果見圖3-2。</p><p>　　3.3.4溫度對(duì)靈芝多糖提取量的影響</p><p>　　準(zhǔn)確稱取1 g靈芝粉末4份，分別置于三頸瓶中，加入20 mL的蒸餾水，微波功率500 W，設(shè)置溫度分別為40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃，提取時(shí)間20 min，然后按照3.2項(xiàng)方法進(jìn)行操作，用苯酚—硫酸法測(cè)定多糖含量，計(jì)算多糖提取率，結(jié)果見圖3-3。</p><p&

28、gt;　　3.3.5時(shí)間對(duì)靈芝多糖的影響</p><p>　　準(zhǔn)確稱取1 g靈芝粉末4份，分別置于三頸瓶中，加入20 mL的蒸餾水，微波功率500W，溫度50 ℃，分別提取10min、20min、30 min、40 min。然后按照3.2項(xiàng)方法進(jìn)行操作，用苯酚—硫酸法測(cè)定多糖含量，計(jì)算多糖提取率，結(jié)果見圖3-4。</p><p>　　3.3.6料液比對(duì)靈芝多糖提取量的影響</p>

29、;<p>　　準(zhǔn)確稱取1 g靈芝多糖4份，分別置于三頸瓶中，微波功率500 W，溫度50 ℃，分別加入20 mL、30 mL、40 mL、50 mL的蒸餾水，提取10 min。然后按照3.2項(xiàng)方法進(jìn)行操作，用苯酚—硫酸法測(cè)定多糖含量，計(jì)算多糖提取率，結(jié)果見圖3-5。</p><p>　　3.4制定靈芝多糖最佳制備工藝條件的正交試驗(yàn)</p><p>　　3.4.1靈芝多糖的制備

30、</p><p>　　準(zhǔn)確稱取1.000 g的靈芝粉末于三頸瓶中，加入蒸餾水，微波提取。離心分離20分鐘，抽濾，濾渣加入適量的水洗滌，過(guò)濾三次，合并幾次的提取液，減壓濃縮至原體積的1/4，Savage法除蛋白，活性炭脫色，置于分液漏斗中靜置3 h，取上層溶液，加入4倍體積的95%乙醇，靜置24 h，離心，取沉淀，真空冷凍干燥后得多糖粗品。取粗多糖粉末加蒸餾水定容至100 mL待用。按下表進(jìn)行正交試驗(yàn)</p&

31、gt;<p>　　表1 因素水平設(shè)置表</p><p><b>　　表2正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　4結(jié)果與討論</b></p><p>　　4.1不同因素對(duì)靈芝多糖提取量的影響</p><p>　　4.1.1繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p

32、>　　表2 各濃度葡萄糖的吸光度</p><p>　　圖3-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=1.2176x-0.0087，相關(guān)系數(shù)R2=0.9990。</p><p>　　4.1.2微波功率對(duì)仙人掌多糖提取量影響的結(jié)果</p><p>　　圖 3-2 微波功率對(duì)提取率的影響</p>&l

33、t;p>　　在提取溫度為50℃，提取時(shí)間20min，料液比（g/ml）1/30的條件下不同微波功率對(duì)靈芝多糖提取量的影響見圖3-2。由圖3-2可知，靈芝多糖的提取量隨微波功率的增大先升高再降低，微波爐功率為600 W時(shí)，靈芝多糖提取量最大。這可能是因?yàn)楫?dāng)微波功率小于600 W時(shí)，隨著微波功率的增加，浸提物所吸收的微波輻射能越多，物系的溫度升高得越快，固液擴(kuò)散的速度加快，溫度越高對(duì)物料細(xì)胞的破壞作用越大，有利于物料有效成分的浸出，提

34、高多糖的提取量。當(dāng)微波功率大于600W時(shí)，隨著微波功率的增大，多糖提取量減小，可能是微波功率的增大，造成靈芝多糖的化學(xué)性質(zhì)的變化，降解為單糖或其他物質(zhì)，而使多糖提取量下降。也可能是當(dāng)微波的功率太大時(shí)，細(xì)胞膜并不會(huì)無(wú)限制的破碎，而微波對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的選擇性加熱性能差異則減少，一些易溶于水的物質(zhì)先被溶解，造成多糖的提取率降低4.1.3溫度對(duì)靈芝多糖提取量影響的結(jié)果</p><p>　　圖 3-3 微波溫度對(duì)提取率的影

35、響</p><p>　　在微波功率為600W，提取時(shí)間20min，料液比（g/ml）1：30的條件下，不同提取溫度對(duì)靈芝多糖提取量的影響見圖3-3。由圖3-3可知，靈芝多糖的提取量隨著溫度的增高而則增大，并在70℃時(shí)達(dá)到最大值，隨后漸減。這可能是因?yàn)椋涸谝欢ǖ臏囟确秶鷥?nèi)溫度的提高能加快靈芝細(xì)胞壁的破碎，提高破碎率，從而有利于靈芝多糖的溶出，提高多糖的提取量。但過(guò)高的溫度會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu)，使有些多糖發(fā)生降解而影響其生

36、物活性，使得提取量降低。</p><p>　　4.1.4時(shí)間對(duì)仙人掌多糖提取量影響的結(jié)果</p><p>　　圖 3-4 提取時(shí)間對(duì)提取率的影響</p><p>　　在微波功率為600W，提取溫度50℃，料液比（g/ml）1：30的條件下，不同提取時(shí)間對(duì)靈芝多糖提取量的影響見圖3-4。由圖3-4可知，靈芝多糖提取量隨提取時(shí)間的增加而增加，在30min達(dá)到最大值。其原

37、因可能是微波在短時(shí)間內(nèi)即對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了較大的破壞作用，在溶劑的作用下溶出物較多，提取量高。但隨著時(shí)間增加，細(xì)胞膜進(jìn)一步破裂，溶解的雜質(zhì)增多，溶劑達(dá)到飽和，有效成分不再被溶解，提取量沒(méi)有明顯提高。并且時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)使其他成分溶出而使多糖的溶解率降低從而使提取率降低。</p><p>　　4.1.5料液比對(duì)仙人掌多糖提取量影響的結(jié)果</p><p>　　圖3-5 不同料液比對(duì)提取率的影響<

38、/p><p>　　在微波功率為600W，提取溫度50℃，提取時(shí)間20min的條件下，不同料液比對(duì)仙人掌多糖提取量的影響見圖3-5。由圖3-5可知，靈芝多糖提取量隨溶劑量的增加而增加，在1：40處達(dá)到最大。其原因可能是仙人掌多糖在仙人掌中的含量是一定的，其中的水溶性多糖在溶劑中的溶解度也是有限。當(dāng)溶液趨于飽和時(shí)，仙人掌多糖溶解量減小。當(dāng)溶解達(dá)到飽和狀態(tài)后，提取量停止增長(zhǎng)[20]。</p><p>

39、;　　4.2正交試驗(yàn)靈芝多糖粗品得量</p><p>　　表1 因素水平設(shè)置表</p><p><b>　　表2正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)</b></p><p>　　表3 正交試驗(yàn)方差分析</p><p>　　由表二、三可知：以靈芝多糖提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，D因素影響差異有高度顯著性。各因素對(duì)提取效果的影響程度依次為D（微波功率）＞C

40、（料液比）＞A（微波提取溫度）＞B（微波時(shí)間）?？梢娭苽涔に嚨膮?shù)對(duì)靈芝多糖得量的影響并不一樣，綜合各方面的影響因素，確定靈芝多糖制備的最佳工藝為微波功率為600W，溫度為50℃，時(shí)間為30min，料液比（g/ml）為1：40。算的靈芝多糖提取率為0.76%。</p><p><b>　　5結(jié)論</b></p><p>　　本文采用微波輔助提取技術(shù)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)

41、上，采用正交試驗(yàn)。研究了微波功率、提取溫度、時(shí)間、料液比等因素對(duì)靈芝多糖提取量的影響規(guī)律。得出了仙人掌多糖制備工藝的最佳參數(shù)組合為：微波功率為600 W，提取溫度為50℃，時(shí)間為30min，料液比為1∶40(g/mL)。在此條件下仙人掌多糖提取率為0.76%。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 鄭漢臣. 藥用植物學(xué)[M]. 北

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