中藥學(xué)畢業(yè)論文三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 中藥學(xué)(中藥分析與

2、鑒定方向) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　誠 信 聲 明</b><

3、;/p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者（簽名）：</p><p>

4、<b>　　年月日</b></p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要Ⅰ–Ⅱ</b></p><p><b>　　1前言1</b></p><p>　　1.1自由基的研究1</p><p&g

5、t;　　1.2三棱研究概括2</p><p>　　2 三棱抗氧化活性成分提取工藝研究3</p><p>　　2.1材料與儀器3</p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法3</b></p><p>　　2.3結(jié)果與分析5</p><p><b>　　2.4討論11</b

6、></p><p><b>　　2.5結(jié)論11</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)13</b></p><p><b>　　綜述15</b></p><p><b>　　致謝23</b></p><p>　　

7、三棱抗氧化活性成分提取工藝的優(yōu)化研究</p><p>　　摘要:目的 以三棱為原料，對(duì)三棱抗氧化有效成分提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法 通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對(duì)三棱的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化（1）考察乙醇體積分?jǐn)?shù)（水、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇）、料液比（10:1、15:1、20:1）、提取時(shí)間（0.5h、1h、1.5h、2h）、提取次數(shù)（1、2、3次）得到相對(duì)最佳提取條件。（2

8、）在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以清除率為指標(biāo)，采用響應(yīng)面分析法研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、液固比和提取時(shí)間對(duì)烏梅總黃酮提取率的影響。結(jié)果（1）單因素試驗(yàn)中，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比15:1，提取時(shí)間1.5h，提取次數(shù)2次為相對(duì)最佳提取條件。（2）通過響應(yīng)面分析法得出三棱抗氧化有效成分的最佳提取工藝條件：乙醇體積分?jǐn)?shù)為72.44%，液固比為20:1 ml/g，提取時(shí)間為1.06 h，提取2次。在此條件下三棱清除率為56.59%，與理論值56.59%%基

9、本相符。結(jié)論 通過響應(yīng)面分析法優(yōu)化三棱抗氧化有效成分提取工藝條件簡(jiǎn)單可行，可用于三棱中抗氧化有效成分的提取。</p><p>　　關(guān)鍵詞：三棱；抗氧化；單因素實(shí)驗(yàn)；響應(yīng)面分析法；提取工藝優(yōu)化 </p><p>　　Optimization of the extraction process of Rhizoma sparganii antioxidative compo

10、nents</p><p>　　Abstract: Objective Rhizoma sparganii as raw material, the effective components of Rhizoma sparganii antioxidant extraction process was optimized. Methods single

11、factor experiment and response to optimize the extraction process. (1) Investigation of ethanol concentration (water, 50% ethanol, 60% ethanol, 70% ethanol, 80% ethanol, 90% ethanol, 95% ethanol), sol

12、id-liquid ratio (10: 1,15: 1,20: 1), extraction time (0.5h, 1h, 1.5h, 2h), extraction times (1,2,3) to obtain a relative optimum extractio</p><p>　　Keywords: Rhizoma sparganii; antioxidant; single factor; re

13、sponse surface methodology; Extraction Process Optimization</p><p><b>　　1前言</b></p><p>　　1.1 自由基的研究</p><p>　　隨著人類社會(huì)的發(fā)展和生物技術(shù)的不斷進(jìn)步,人們對(duì)疾病的本質(zhì)加深了認(rèn)識(shí)。自1956年Harman首次提出自由基衰老學(xué)說后,大

14、量研究證明,自由基及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)是導(dǎo)致生物衰老和人體多種疾病的主要起因之一[1]。</p><p>　　近年來關(guān)于中藥抗氧化劑的研究十分引人注目,中草藥是繼香辛料之后的另一個(gè)很有潛力的天然抗氧化劑資源。我國臺(tái)灣學(xué)者對(duì)195種中草藥的抗氧化性能進(jìn)行了系統(tǒng)的篩選和評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)幾乎一半的中草藥表現(xiàn)出抗氧化作用。韓國的Kim[2]等對(duì)180種中藥的甲醇提取物進(jìn)行試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其中44種對(duì)油酸有強(qiáng)抗氧化能力。郭江寧[3]從6

15、5種中藥中篩選高效天然抗氧化劑,發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂、厚樸等具有較強(qiáng)抗氧化活性。其他還有一些學(xué)者對(duì)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、氨基酸以及美拉德(Malllard)反應(yīng)產(chǎn)物的抗氧化性能進(jìn)行了研究后發(fā)現(xiàn)它們也具有一定抗氧化性能。此外,一些學(xué)者還從細(xì)菌和酵母中提取抗氧化劑。中藥材富含的黃酮、酚酸類化合物具有明顯的抗氧化活性[4],臨床調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,中藥治療一些疾病的療效被認(rèn)為與其抗氧化活性密切相關(guān)[5]。黃酮類化合物具有消炎、抗癌、抑制微生物、清除自由基的功效,對(duì)

16、防治糖尿病,降血壓,治療心血管疾病、降低血液膽固醇及延遲衰老等有明顯作用[6]。中藥材中的黃酮化合物是一種天然的抗氧化劑，具有清除自由基的能力，如芹菜提取物具有清除DPPH自由基的作用[7]；金花茶茶花提取物對(duì)羥自由基和超氧陰離子具有清除作用[8]；銀</p><p>　　隨著近20年來抗氧化劑的蓬勃發(fā)展,目前已從單純的合成抗氧化劑和食品氧化劑逐漸發(fā)展成為天然抗氧化劑與體內(nèi)自由基清除劑。因此,對(duì)抗氧化劑的要求也越

17、來越高,而各種廣泛使用的合成抗氧化劑由于其潛在毒性和致癌作用等逐漸受到人們的排斥,因此從植物中尋找天然、高效、低毒抗氧化劑成為了目前抗氧化劑發(fā)展的一個(gè)必然趨勢(shì),并且從天然植物中尋找體內(nèi)自由基消除劑也將是現(xiàn)代醫(yī)藥和保健行業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。</p><p><b>　　1.2三棱研究概況</b></p><p>　　三棱系黑三棱科植物黑三棱(Sparganium stolon

18、iferumBuch-Ham)削去外皮的干燥塊莖, 冬季至次年春采挖,除去殘莖及須根, 洗凈削去外皮, 曬干。此中藥味苦、性平, 入肝、脾經(jīng)。具有破血行氣、消積止痛等功能, 是活血化瘀的 常用中藥[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明, 三棱具有多種藥理作用和臨床應(yīng)用,本研究主要是對(duì)三棱抗氧化方面的作用本研究的目標(biāo)是通過單因素試驗(yàn)確定各單因素最佳值，再利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化三棱抗氧化活性成分的提取工藝，選取三棱抗氧化活性成分提取最佳的工藝條件，為三棱

19、藥材資源的開發(fā)和綜合利用提供了研究依據(jù)。</p><p>　　長期以來,人們?yōu)榱吮ｕr和防止氧化,一直使用合成抗氧化劑如:丁基輕基茵香醚(BHA)、二丁基輕基甲醚(BHT)、沒食子酸丙酷(PG)及特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)等。近年來,人們對(duì)于這些人工合成抗氧化劑的安全性問題進(jìn)行了廣泛的研究。世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)、歐共體兒童保護(hù)組織(HACSG)、英國生物工業(yè)協(xié)會(huì)(BIBRA)、日本、美國的政府和組織的研究

20、表明,合成抗氧化劑具有諸多副作用,如對(duì)人體的肝、脾、肺均有不利影響,會(huì)誘發(fā)惡性腫瘤等。所以美國食品藥品管理局(FDA)建議在一般認(rèn)為安全的物質(zhì)中刪去BHT;日本有關(guān)衛(wèi)生部門經(jīng)研究曾做出禁止使用BHA的結(jié)論;對(duì)于TBHQ,雖然美國等少數(shù)國家批準(zhǔn)了它在某些油脂中的使用,但歐盟、日本等國家認(rèn)為它的毒理試驗(yàn)資料不完善,尚未批準(zhǔn)使用?？傊?人們對(duì)人工合成抗氧化劑存在不安心理。事實(shí)也證明,在人們長期食用的食品中,天然抗氧化劑成分的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于人工合

21、成的抗氧化劑毒性。因此,近年來從自然界尋求天然抗氧化劑的研究已引起各國科學(xué)家的高度重視。</p><p>　　三棱系黑三棱科黑三棱屬植物黑三棱(Sparganiumstoloni ferum Buch.-Ham.)的干燥塊莖,冬季至次年春采挖,洗凈, 削去外皮,晾干,以塊莖入藥。三棱的化學(xué)成分復(fù)雜, 藥理作用和臨床應(yīng)用廣泛.現(xiàn)代化學(xué)和藥理研究已部分闡明了化學(xué)成分和臨床應(yīng)用之間的聯(lián)系.例如,三棱總黃酮具有抗血小板聚

22、集、抗血栓、鎮(zhèn)痛作用.但是還有很多活性成分未被找到,如抗腫瘤等成分.很多藥理研究也僅停留在提取物階段, 因此對(duì)其化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行深入研究,進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用間的聯(lián)系, 對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥和新藥開發(fā)是非常有必要的.清除DPPH自由基法是一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的評(píng)估植物抗氧化能力的可行方法,被廣泛應(yīng)用到評(píng)價(jià)各種天然產(chǎn)物的自由基的清除[11]。本文以三棱提取物清除DPPH自由基能力為參考指標(biāo),通過考察溶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取

23、時(shí)間、提取次數(shù)等因素,通過響應(yīng)面分析法確定三棱抗氧化物的最佳提取條件,為三棱藥材的有效開發(fā)和利用提供依據(jù)。</p><p>　　2三棱抗氧化活性成分提取工藝的研究</p><p>　　2.1實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑</p><p>　　UV2450紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；HH-4恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市杰瑞爾電器有限公司）；FW100型高速萬能粉碎機(jī)（天津市

24、泰斯特儀器有限公司）；FA10048B電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。</p><p>　　三棱藥材購于廣東至信中藥飲片有限公司、醋三棱（藥品生產(chǎn)許可證號(hào)：粵20110108。95%乙醇、鹽酸、1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）、水為超純水。</p><p>　　2.1.1藥材和試劑的處理</p><p>　?。?）三棱藥材的處理：將藥材于40℃干燥、用粉碎

25、機(jī)粉碎過40目篩,貯于干燥器中置暗處保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　?。?）95%乙醇的處理：將95%乙醇用酒精計(jì)分別配置成50%、60%、70%、80%、90%、100%濃度乙醇于容器中保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　?。?）1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）的處理：0.1mmol/LDPPH溶液的配制：精密稱定DPPH3.94mg，加95%乙醇使溶解，并用95%乙醇定容至100ml容量瓶

26、中，置于冰箱，備用。</p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1對(duì)DPPH自由基的抑制實(shí)驗(yàn)</p><p>　　分別量取各提取溶劑下的提取液2ml于試管中，分別加入2mlDPPH溶液，搖勻，置于陰暗處反應(yīng)30min,后在517nm處測(cè)定吸光度值，記為Ai；再分別量取2ml提取液，分別加入2ml95%乙醇，

27、搖勻，置暗處30min測(cè)吸光度值，記為Aj；再分別量取2ml95%乙醇，分別加入2mlDPPH溶液，搖勻，置暗處30min后測(cè)吸光度值，記為A0。</p><p>　　清除率%=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%</p><p>　　2.2.2單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)</p><p>　?。?）乙醇濃度的影響</p><p>　　精密稱取

28、1g三棱細(xì)粉,分別加入50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%濃度乙醇20ml，回流提取2h，抽濾,后用乙醇溶解定容于100mL容量瓶中搖勻備用。</p><p>　　（2）回流提取時(shí)間的影響</p><p>　　以70%乙醇為提取溶劑,其他條件同（1）,考察不同回流提取時(shí)間(0.5h、1h、1.5h、2h)對(duì)提取物清除DPPH自由基能力的影響。</p>&l

29、t;p><b>　?。?）料液比的影響</b></p><p>　　以1h為超聲提取時(shí)間,其他條件同（2）,考察不同料液比（l:10、1:15、1:20）對(duì)提取物清除DPPH自由基能力的影響。</p><p>　?。?）提取次數(shù)的影響</p><p>　　以1:15為料液比,其他條件同（3）,考察不同超聲提取次數(shù)（1、2、3）對(duì)提取物清除

30、DPPH自由基能力的影響。</p><p>　　2.2.3響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)</p><p>　　在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，固定提取2次，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、液固比、提取時(shí)間為響應(yīng)變量，根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)建立三因素三水平數(shù)學(xué)模型[12]，以DPPH清除率為響應(yīng)值，利用Design Expert 8.05b軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合，試驗(yàn)因素及水平見表1，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。</p>

31、<p>　　表1響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的因素和水平設(shè)計(jì)表</p><p><b>　　表2響應(yīng)面法設(shè)計(jì)</b></p><p>　　試驗(yàn)號(hào)乙醇濃度(%) 提取時(shí)間(h) 料液比（ml/g) 清除率（%）160.001.5015.00270.001.0015.00380.001.5015.00470.000.

32、5010.00570.001.0015.00680.001.0020.00760.001.0010.00860.000.5015.00970.001.0015.001070.001.5010.001170.001.0015.001270.001.5020.001380.000.5015.001470.000.5020

33、.001560.001.0020.001670.001.0015.001780.001.0010.00</p><p>　　2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析</p><p>　　2.3.1單因素實(shí)驗(yàn)</p><p>　?。?）乙醇濃度的影響</p><p>　　不同濃度乙醇對(duì)提取物清除DPPH自由基的能力的測(cè)定結(jié)果如

34、圖1所示。</p><p>　　圖1乙醇濃度對(duì)提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　從圖1可知,70%乙醇提取物抗氧化能力最強(qiáng)。50%濃度乙醇提取物抗氧化能力低,不適宜用作提取劑。乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，清除率會(huì)隨濃度的增加而下降。所以應(yīng)該選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%。根據(jù)相似相溶的原理，乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大會(huì)使溶液黏度增加，從而影響黃酮類化合物的溶出，乙醇體積分?jǐn)?shù)與提取液極

35、性最相似時(shí)，能使抗氧化活性成分達(dá)到最大值。另外，乙醇體積分?jǐn)?shù)過高，會(huì)使一些醇溶性雜質(zhì)成分溶出增多，導(dǎo)致抗氧化活性物質(zhì)提取率下降。</p><p>　　（2）回流提取時(shí)間的影響</p><p>　　圖2回流提取時(shí)間對(duì)提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　由圖2可知，當(dāng)提取時(shí)間在0.5 h~1 h范圍內(nèi)時(shí)，清除率隨提取時(shí)間的增大而上升，提取時(shí)間為1h時(shí)

36、，提取率最高。之后，清除率隨時(shí)間增多而稍稍降低，這可能是隨著提取時(shí)間增多導(dǎo)致一些雜質(zhì)溶出從而影響抗氧化活性成分溶出導(dǎo)致，所以本實(shí)驗(yàn)選擇提取時(shí)間為1h。</p><p><b>　　（3）料液比的影響</b></p><p>　　圖3料液比對(duì)提取物清除DPPH自由基能力的影響</p><p>　　由圖3可知，當(dāng)料液比為15:1時(shí)，清除率最大，所以

37、選擇料液比在15:1為宜。清除率隨料液比增大到一定值后呈下降趨勢(shì)，這可能是隨著溶劑體積的增大，其他一些非抗氧化活性物質(zhì)溶解度也逐漸增大，進(jìn)而致使清除率的下降。</p><p>　　（4）提取次數(shù)的影響</p><p>　　圖4提取次數(shù)影響提取物清除DPPH自由基能力</p><p>　　由圖4可知，當(dāng)提取次數(shù)為3次時(shí)，三棱抗氧化活性物質(zhì)提取率最高，但第二次第三次清除

38、率相差不到1%，提取次數(shù)的增多并不會(huì)明顯提高清除率，考慮到節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間，所以確定最佳提取次數(shù)為2次，不再進(jìn)行優(yōu)化。</p><p>　　2.3.2響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)</p><p>　　表3響應(yīng)面法設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　試驗(yàn)號(hào) 乙醇濃度(%) 提取時(shí)間(h) 料液比（ml/g) 清除率（%）160.001.5015.002

39、8.65270.001.0015.0045.55380.001.5015.0028.36470.000.5010.0043.98570.001.0015.0053.93680.001.0020.0048.46760.001.0010.0014.06860.000.5015.005.41970.001.0015.0049.221070.0

40、01.5010.0015.191170.001.0015.0046.61270.001.5020.0048.71380.000.5015.0044.851470.000.5020.0048.71560.001.0020.0030.291670.001.0015.0052.361780.001.0010.0045.37</p><

41、p>　　由表4可知，回歸模型的P<0.01，表明該模型整體達(dá)到高度顯著水平，即用該回歸方程描述各因子與響應(yīng)值之間的關(guān)系時(shí)，因變量與全體自變量之間的關(guān)系是顯著的，說明了該方法是可靠的。失擬項(xiàng)P=0.0657>0.05，差異不顯著，表明無失擬因素存在，因此可以用該模型分析和預(yù)測(cè)三棱抗氧化有效成分提取。各因素中一次項(xiàng)A（乙醇體積分?jǐn)?shù)）和C（提取時(shí)間）對(duì)黃酮的提取影響差異高度顯著（P<0.01），二次項(xiàng)A2對(duì)黃酮的提取影

42、響差異顯著；而B、AB、AC、BC、B2、C2對(duì)黃酮的提取影響差異不顯著，表明各影響因素與黃酮提取率之間不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。此外，從P值可看出各因素對(duì)總黃酮提取率的影響次序?yàn)椋◤拇蟮叫∨帕校篈>C>B，即乙醇體積分?jǐn)?shù)>料液比>提取時(shí)間。</p><p>　　表4響應(yīng)面分析擬合回歸模型的方差分析結(jié)果</p><p>　　響應(yīng)面坡度陡峭程度和等高線橢圓形狀反映出交互效

43、應(yīng)的強(qiáng)弱趨勢(shì)，如果響應(yīng)面坡度相對(duì)較為平緩，表示其可以忍受處理?xiàng)l件的變異，而不影響響應(yīng)值大??；相反，如果坡度非常陡峭，表明處理?xiàng)l件的變異對(duì)響應(yīng)值的影響非常大，即響應(yīng)值對(duì)于處理?xiàng)l件的改變非常敏感[13]。如果等高線呈橢圓形表示兩因素交互作用顯著，而圓形則與之相反[14]。為確定乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間3個(gè)因素和交互作用對(duì)三棱抗氧化活性成分提取率的影響，根據(jù)回歸方程繪出響應(yīng)面及等高線圖如下。從圖5-圖7可看出，3個(gè)因素之間的交互作用對(duì)三

44、棱抗氧化活性成分提取率的影響均不顯著，表現(xiàn)為曲線較平滑，與方差分析結(jié)果相一致。</p><p>　　圖5乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比對(duì)清除率影響的響應(yīng)面和等高線</p><p>　　圖6提取時(shí)間和乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)清除率影響的響應(yīng)面和等高線</p><p>　　圖7料液比和提取時(shí)間對(duì)清除率影響的響應(yīng)面和等高線</p><p>　　2.3.4 最佳提取工藝

45、及驗(yàn)證 </p><p>　　表5響應(yīng)面分析擬合回歸模型的最佳提取工藝結(jié)果</p><p>　　Number 濃度 時(shí)間 料液比 清除率 Desirability</p><p>　　1 72.44 1.06 20.00 56.5959 0.5412

46、 72.46 1.05 20.00 56.593 0.5413 72.75 1.03 20.00 56.5778 0.5414 73.15 1.01 20.00 56.5203 0.5405 73.13 1.07 20.00 56.514

47、 0.5406 71.48 1.04 20.00 56.4208 0.5397 78.90 0.50 10.00 52.7079 0.500</p><p>　　通過Design Expert 8.05b軟件得到的三棱總黃酮最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)72.44%，液固比20ml/g，提取時(shí)間為

48、1.06 h，提取2次，清除率理論值為56.5959%。考慮到實(shí)際操作的方便性，選擇最佳提取工藝參數(shù)為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為72.44%，料液比20:1 ml/g，提取時(shí)間1.06 h，提取2次，在此條件下，重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)，每次稱取三棱藥材粉末1.000 g，得到DPPH自由基清除率為57.2854%。與理論值相比，其相對(duì)誤差為1.218%，優(yōu)化結(jié)果可靠。</p><p><b>　　2.4討論</b&g

49、t;</p><p>　　響應(yīng)面法的優(yōu)點(diǎn)是在試驗(yàn)條件優(yōu)化過程中可以連續(xù)地對(duì)試驗(yàn)因素的各個(gè)水平進(jìn)行分析，而克服了正交試驗(yàn)只能對(duì)一個(gè)個(gè)孤立的試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行分析和不能給出直觀圖形的缺陷，所以響應(yīng)面法被廣泛應(yīng)用于試驗(yàn)設(shè)計(jì)與工藝優(yōu)化研究[15]。本實(shí)驗(yàn)選擇以乙醇溶液作為提取溶劑，是因?yàn)槿饪寡趸钚猿煞种饕獮辄S酮類物質(zhì)屬于中等極性物質(zhì)，在乙醇溶液中比水更能溶解。實(shí)驗(yàn)主要考察了乙醇濃度、液固比和提取時(shí)間這三個(gè)因素，結(jié)果顯示，對(duì)三

50、棱抗氧化活性成分影響最主要的因素是乙醇濃度，最小的因素是提取時(shí)間，所以在進(jìn)行三棱抗氧化活性成分提取時(shí)，要特別注意乙醇濃度合不合適。</p><p>　　本人在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，三棱提取液多為淡黃色透明溶液，猜測(cè)提取液中的黃酮類物質(zhì)為三棱抗氧化活性成分中的主要成分。</p><p><b>　　2.5結(jié)論</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)初次采用

51、響應(yīng)面分析法對(duì)烏梅總黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，得出三棱總黃酮提取的最佳工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)為72.44%，液固比20:1 ml/g，提取時(shí)間1.06 h，提取2次。為方便提取操作，可進(jìn)一步優(yōu)化為乙醇體積分?jǐn)?shù)為72%，液固比20:1 ml/g，提取時(shí)間1h，提取次數(shù)為2次。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得出的工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，操作容易。為三棱抗氧化活性成分的開發(fā)研究提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b

52、></p><p>　　[1]Cheng,F.C.,J.F.,Tsai,T.H.Hydroxyl radical in living systems and its separation methods [J]. Joumral of Chromatography B,2002,781:481-496</p><p>　　[2]Kim,S.Y., Kim,J.H.Antioxida

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58、<p>　　[14]徐媛,王魯峰,徐曉云,等.響應(yīng)面法優(yōu)化紅葡萄柚番茄紅素的提取工藝[J].食品科學(xué),2010,31(22):255-259.</p><p>　　[15]徐秀泉, 虞倩, 徐穎. 趕黃草總黃酮超聲提取工藝的響應(yīng)面法優(yōu)化及其體外抗氧化活性分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2012,18(18):38.</p><p><b>　　綜述</b&g

59、t;</p><p>　　三棱的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展</p><p>　　1三棱的化學(xué)成分研究</p><p><b>　?。?）揮發(fā)油類</b></p><p>　　朱鳳妹[1]等利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用方法從三棱揮發(fā)油中分離并確認(rèn)出32種化學(xué)成分。然后用峰面積歸一化法通過G1710BA化學(xué)站數(shù)據(jù)處理

60、系統(tǒng)得出各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的百分含量, 其中主要成分為 3, 5, 6, 7,8, 8a- 六氫-4, 8a-二甲基-6- (11-methylethyenyl)-2 (1H)萘酮 (12.95%) , 2, 4, 6, 7, 8, 8a-六氫-5 (1H) -黃酮 (10. 72%) ,十氫-4a-甲基-1-萘(5. 78%) , 3H-3a , 7-甲撐苷菊環(huán)烴 (5. 69%) 。</p><p><

61、;b>　?。?）脂肪酸</b></p><p>　　三棱中所含有機(jī)酸主要為脂肪酸類。張淑運(yùn)[ 2]應(yīng)用GC-MS聯(lián)用色譜儀對(duì)混合脂肪酸進(jìn)行了分析, 鑒定了21種脂肪酸, 占總脂肪酸含量97.7%, 其中十六酸、十八二烯酸、十八烯酸、十八酸含量較高, 占混合脂肪酸90%。張衛(wèi)東[3]等從三棱的乙醇提取物中分離得到了三棱酸,將其結(jié)構(gòu)鑒定為6, 9, 10-三羥基-7-十八烯酸。</p>

62、<p><b>　?。?）皂苷類</b></p><p>　　張衛(wèi)東[ 3]等先后從三棱乙醇提取物中分得了β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、△5, 6膽酸甲酯-3-O-α-L-鼠李糖 (1→4) -β-D-吡喃葡萄糖苷、△5-膽酸甲酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸- ( 1→4) -α-L-鼠李糖苷、△5-膽酸甲酯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。Shin , SooYo

63、ng[4]等分離得到β-谷甾醇-3-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。</p><p><b>　?。?）黃酮類</b></p><p>　　張衛(wèi)東[ 3]等從三棱的乙醇提取物中分離得到了3個(gè)黃酮類化合物, 分別為芒柄花素、山奈酚、5, 7, 3, 5-四羥基黃酮醇-3-O-β-D-吡喃葡糖糖苷, 后者為新的天然產(chǎn)物。</p><p><b>

64、;　?。?）苯丙素類</b></p><p>　　三棱中含有苯丙素類，主要以甘油酯和配糖體的形式存在。Shirota[ 4]等從三棱的甲醇提取物中分離得到了1,3-O-di-p-coumaroylglycerol等8個(gè)苯丙素類化合物;YingXiong[5]等乙醇提取物氯仿萃取部分分離得到2個(gè)苯丙素類化合物,β-D-(1-O-Acety-3-O-cis-feructo-furanosylα-D-2,

65、3, 6-O-triacetylg lucopyranoside 和1-O-cis-Feruloyl-3-O-trans-p-coumaroylglycer -ol 。 </p><p>　　2三棱的藥理學(xué)作用研究</p><p><b>　?。?）抗氧化作用</b></p><p>　　三棱的黃酮類能夠有效清除體內(nèi)的自由基(Free Radi

66、cal)及毒素，預(yù)防、減少疾病的發(fā)生；消炎、抗過敏、廣譜抗菌、抗病毒作用。解除醇中毒、保肝護(hù)肝。清熱解毒、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨、抗婦女更年期綜合癥等功效。它們與維生素C有協(xié)同效應(yīng)，可以使維生素C在人體組織中趨于穩(wěn)定。本文在單因素的基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面分析法得出三棱總黃酮提取的最佳工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)為72.44%，液固比20:1 ml/g，提取時(shí)間1.06 h，提取2次，對(duì)DPPH自由基清除率為57.2854%。 </p>&l

67、t;p>　　（2）抗血小板凝集和抗血栓作用</p><p>　　胡旭光[ 6]等以凝血時(shí)間, 偏癱恢復(fù)數(shù)為指標(biāo),研究了關(guān)于不同三棱提取物的抗凝血、抗血栓作用。結(jié)果表明, 三棱總黃酮具有較強(qiáng)的抗血小板聚集和抗血栓作用, 提示總黃酮是三棱活血化瘀的有效活性成分。</p><p>　?。?）對(duì)血液流變性的影響</p><p>　　黨春蘭[7]等運(yùn)用生物力學(xué)理論 ,

68、研究了中藥三棱對(duì)血液流變學(xué)指標(biāo)的影響。 結(jié)果表明, 三棱組的全血粘度、血細(xì)胞壓積以及血沉速率與空白對(duì)照組相比有明顯減小 (P<0. 01)。所以作者認(rèn)為三棱活血祛瘀的藥理作用機(jī)理為血細(xì)胞壓積和血沉速率的顯著減小導(dǎo)致全血粘度降低,起到了活血祛瘀的功效。</p><p><b>　?。?）鎮(zhèn)痛作用</b></p><p>　　邱魯嬰[8] 等采用小鼠扭體法、熱板法,

69、以阿司匹林為陽性對(duì)照,對(duì)三棱的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明,三棱總黃酮能明顯減少因醋酸刺激引起的扭體反應(yīng)的次數(shù)，提高小鼠的痛閾值，有顯著鎮(zhèn)痛作用。鄧英君[9]采用小鼠扭體法、熱板法, 對(duì)三棱飲片的氯仿、醋酸乙酯、正丁醇等提取物進(jìn)行了鎮(zhèn)痛及抗凝血作用的研究。 結(jié)果表明，三棱不同提取物均能明顯減少小鼠因醋酸刺激引起的扭體反應(yīng)次數(shù),能顯著提高小鼠因熱刺激而引起疼痛反應(yīng)的痛閾值，有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其中以醋酸乙酯提取物作用最強(qiáng)而持久。</p&

70、gt;<p>　?。?）對(duì)心腦血管的作用</p><p>　　于永紅[9] 等研究了三棱對(duì)培養(yǎng)的兔胸主動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞 (SMC)DNA合成的影響。結(jié)果表明,三棱提取物可以抑制兔動(dòng)脈SMC的增殖。 而SMC向內(nèi)膜的增殖是動(dòng)脈粥樣硬化 (AS)和經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈(PTCA)術(shù)后再狹窄的主要原因。此研究為防治AS及PTCA術(shù)后再狹窄提供了依據(jù)。曾慶杏等在wistar鼠大腦中動(dòng)脈阻塞的局灶性腦缺血模型上研究

71、了其對(duì)腦電圖的影響。結(jié)果表明, 復(fù)方三棱、莪術(shù)、黃芪能增加梗死側(cè)腦電圖波幅,減輕神經(jīng)功能缺損程度,減小梗死灶體積。于永紅[9]等研究了三棱對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性AS病灶的消退作用及原癌基因 C-myc, C-fs, V-sis表達(dá)的影響。 結(jié)果表明, 三棱具有不同程度促進(jìn)主動(dòng)脈AS 病灶及冠狀動(dòng)脈AS病灶消退的作用 (與對(duì)照組比較 P<0. 01);同時(shí)還具有不同程度抑制原癌基因 C-myc, C-fos, V-sis表達(dá)的作用 (與對(duì)照組

72、比較P<0. 01)。 </p><p><b>　　（6）抗腫瘤作用</b></p><p>　　王喆[10] 等人運(yùn)用 EPICS-ELITE型流式細(xì)胞儀, 研究三棱對(duì)人肺癌A549細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。結(jié)果顯示三棱對(duì)人肺癌細(xì)胞的凋亡具有顯著的誘導(dǎo)作用。徐立春[11]等用 S E(三棱、莪術(shù))提取物對(duì)經(jīng)過絲裂霉素滅活處理后的K562腫瘤細(xì)胞進(jìn)行修飾異構(gòu),

73、 修飾后的腫瘤細(xì)胞 ( K562)作為瘤苗免疫小鼠, 14天后再去接種B16小鼠惡性黑色素瘤細(xì)胞觀察抗瘤效應(yīng)。而結(jié)果顯示, SE中藥修飾腫瘤細(xì)胞疫苗可以明顯增強(qiáng)對(duì)B16的抗瘤效應(yīng)。陳平等[12]對(duì)三棱、莪術(shù)的揮發(fā)油成分進(jìn)行生物修飾構(gòu)建, 經(jīng)修飾SGC-7901瘤苗治療荷瘤小鼠, 能明顯阻止胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。</p><p><b>　　（7）其它作用</b></p><p&g

74、t;　　裘柱婷[13] 等研究發(fā)現(xiàn)三棱、莪術(shù)有保護(hù)肝細(xì)胞、 減輕肝細(xì)胞變性壞死, 恢復(fù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能作用;減少纖維化發(fā)展, 促進(jìn)纖維組織降解作用。邱頌平[ 14]等研究了三棱、莪術(shù)對(duì)肺纖維化大鼠的肺形態(tài)學(xué)影響。結(jié)果表明,三棱、莪術(shù)能有效地抑制博來霉素引起的肺纖維形成。XuLuMing[15]等研究了三棱提取物的降糖活性。結(jié)果表明,濃度為10μg/ml的三棱乙酸乙酯提取物,香草酸及對(duì)羥基苯甲醛的α-糖苷酶抑制率分別為72. 71%,20

75、. 13%和30. 42%?！?</p><p><b>　　（8）總結(jié)</b></p><p>　　三棱的化學(xué)成分復(fù)雜, 有多種藥理活性。黃酮類、皂苷類成分的抗凝血、鎮(zhèn)痛作用是研究的熱點(diǎn)。近年來, 三棱的新成分、新活性不斷被發(fā)現(xiàn), 如β-D-(6 -Otrans-feruloyl)fructofuranosyl-α-D-O-glu-copyranoisde等苯丙素類

76、化合物, 三棱乙酸乙酯提取物的降糖活性等。目前, 已經(jīng)闡明三棱總黃酮具有抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用, 但三棱的研究仍存在諸多問題: (1)有效成分不明確, 如抗腫瘤活性成分和降血糖活性成分;藥理研究仍處于提取物階段。(2)三棱中化學(xué)成分含量低,如何正確合理的評(píng)價(jià)三棱藥材品質(zhì)尚待研究。(3)三棱資源的減少。近年來, 隨著城市化的深入, 大量的土地被征用以及種植三棱收益不高等原因造成三棱產(chǎn)區(qū)減小甚至消失如河南鄭州產(chǎn)區(qū)。(4)水

77、污染對(duì)三棱品質(zhì)的影響。由于生長環(huán)境特殊, 三棱極易受到水污染的影響。因此對(duì)三棱化學(xué)成分和藥理活性的深入研究, 進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用的關(guān)系;采取相關(guān)措施, 有效地保護(hù)三棱資源以及減少水污染對(duì)三棱品質(zhì)的影響對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥和新藥研究具有重要意義。</p><p><b>　　總結(jié)</b></p><p>　　本文對(duì)三棱黃酮類化合物抗氧化性能進(jìn)行了研究,為該資源的綜

78、合開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。三棱的化學(xué)成分復(fù)雜, 含揮發(fā)油類、脂肪酸、皂苷類、苯丙素類。有多種藥理活性。黃酮類、皂苷類成分的抗凝血、鎮(zhèn)痛作用是研究的熱點(diǎn)。</p><p>　　近年來, 三棱的新成分、新活性不斷被發(fā)現(xiàn)。目前, 已經(jīng)闡明三棱總黃酮具有抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用, 但三棱的研究仍存在諸多問題: (1)有效成分不明確, 如抗腫瘤活性成分和降血糖活性成分;藥理研究仍處于提取物階段。(2)三棱中化

79、學(xué)成分含量低,如何正確合理的評(píng)價(jià)三棱藥材品質(zhì)尚待研究。(3)三棱資源的減少。近年來, 隨著城市化的深入, 大量的土地被征用以及種植三棱收益不高等原因造成三棱產(chǎn)區(qū)減小甚至消失如河南鄭州產(chǎn)區(qū)。(4)水污染對(duì)三棱品質(zhì)的影響。由于生長環(huán)境特殊, 三棱極易受到水污染的影響。因此對(duì)三棱化學(xué)成分和藥理活性的深入研究, 進(jìn)一步闡明化學(xué)成分和臨床應(yīng)用的關(guān)系;采取相關(guān)措施, 有效地保護(hù)三棱資源以及減少水污染對(duì)三棱品質(zhì)的影響對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥和新藥研究具有重要

80、意義。</p><p>　　中藥三棱中的黃酮類化合物具有消炎、抗癌、抑制微生物、清除自由基的功效,對(duì)防治糖尿病,降血壓,治療心血管疾病、降低血液膽固醇及延遲衰老等有明顯作用。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]朱鳳妹,杜彬,李軍,等.利用GC-MS技術(shù)分析三棱揮發(fā)油化學(xué)成分[J] .天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2

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