老瓜頭總生物堿對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠胸膜炎的抑制作用

1、<p>　　老瓜頭總生物堿對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠胸膜炎的抑制作用</p><p>　　作者：陳虎，肖旭，王基云，李曉兵，楊衛(wèi)東</p><p>　　【摘要】 　　目的 研究老瓜頭(Cynanchum komarovii Al. Iljinski)總生物堿(ACKs)對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠胸膜炎的抑制作用及其作用機(jī)制。方法 采用吲哚美辛(10 mg·kg-1)或不同劑量的A

2、CKs(12,6,3 mg·kg-1)于角叉菜膠(0.2mL,10 mg·mL-1)制備大鼠胸膜炎模型前30min腹腔注射給藥，在造模后4h處死大鼠，測(cè)定胸腔滲出液體積，滲出液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)，測(cè)定肺組織勻漿中丙二醛（MDA）的含量以及超氧化物歧化酶（SOD）的活性,并做肺組織形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果 吲哚美辛和ACKs各劑量均能降低胸腔液體滲出和白細(xì)胞浸潤(rùn)，降低肺組織中MDA的含量，升高肺組織中SOD的活性。結(jié)論 ACKs對(duì)角

3、叉菜膠制備的大鼠胸膜炎有抑制作用并減少白細(xì)胞浸潤(rùn)和炎性滲出，其作用機(jī)制可能與抑制活性氧對(duì)機(jī)體的損傷作用有關(guān)。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 老瓜頭總生物堿；胸膜炎；白細(xì)胞浸潤(rùn)</p><p>　　Abstract: Objective To explore the anti-inflammatory effects of alkaloids from Cynanchum komar

4、ovii Al.Iljinski (ACKs) on rat carrageenin-induced pleurisy and to demonstrate the anti-inflammatory mechanism.Methods Rats were pretreated with an intraperitoneal injection of physical saline,indomethacin (10 mg·

5、kg-1) or ACKs (12,6,3 mg·kg-1).30min later,rats were anaesthetized and irritated with carrageenin (0.2mL,10 mg·kg-1) by pleural injection.And 4h later,rats were sacrificed by exsanguination</p><p>

6、;　　Key words:ACKs；pleurisy；leukocyte infiltration</p><p>　　老瓜頭（Cynanchum komarovii Al. Iljinski），別名牛心樸子草，系蘿摩科鵝絨藤屬植物。老瓜頭在西北地區(qū)是一種重要的蜜源植物，并可以作為生物殺蟲(chóng)劑加以開(kāi)發(fā)利用。在醫(yī)學(xué)方面，民間用于鎮(zhèn)痛、退燒、止瀉和治療膽囊炎等。近20余年的實(shí)驗(yàn)研究表明老瓜頭還有止咳、祛痰、平喘和抗炎等

7、藥理作用［1-6］。本研究用角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠胸膜炎模型來(lái)研究老瓜頭總生物堿(ACKs)對(duì)急性炎癥的抑制作用。</p><p><b>　　1 材料和方法</b></p><p><b>　　1.1 動(dòng)物 </b></p><p>　　SD大鼠，雄性，體重200～250g，購(gòu)于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：S

8、CXK(寧)2005-0001。</p><p>　　1.2 藥物與試劑 </p><p>　　老瓜頭總生物堿，寧夏回族自治區(qū)物理研究所分析測(cè)試中心制備，用Tris-HCl液配成濃度為6、3、1.5 mg·mL-1的溶液，調(diào)pH值4.5；吲哚美辛，上海第十七制藥廠(chǎng)制，批號(hào)840303，用NaCO3-NaHCO3緩沖液配成濃度為5 mg·mL-1的水溶液，調(diào)pH值7.4

9、；水合氯醛，上海白鶴化工廠(chǎng)制，批號(hào)841218，配成7%的水溶液；角叉菜膠，由遼寧藥物研究所提供，使用前一天用生理鹽水配成1%的溶液，溶解過(guò)夜；蛋白定量、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。</p><p><b>　　1.3 儀器 </b></p><p>　　光學(xué)顯微鏡，日本Olympus公司產(chǎn)；CF16RX高速低

10、溫離心機(jī)，日立公司；電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；VIS-7220N可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京瑞利分析儀器公司。</p><p><b>　　1.4 方法 </b></p><p>　　大鼠胸膜炎模型的制備、取材和生化指標(biāo)檢測(cè) SD大鼠按體重隨機(jī)分成6組，每組8只，分別為正常對(duì)照組，模型組，吲哚美辛組(10 mg·kg-1)，ACKs高、中、低劑量組

11、(12、 6、3 mg·kg-1)。參照Salvatore Cuzzocrea等人制備大鼠胸膜炎模型的方法［8-10］，分別腹腔注射生理鹽水和相應(yīng)的藥物；30min后用水合氯醛（280 mg·kg-1）腹腔注射麻醉大鼠，向胸膜腔注射1%的角叉菜膠溶液0.2mL和生理鹽水0.2mL（正常對(duì)照組）；致炎4h后再次用水合氯醛麻醉大鼠，沿膈肌邊緣打開(kāi)胸腔，吸出胸腔滲出液，用2mL含肝素(5 U·mL-1)的生理鹽水

12、沖洗胸腔，吸出，與胸腔滲出液合并，測(cè)定總體積，另外取部分合并液做白細(xì)胞計(jì)數(shù)；取出右肺，用生理鹽水洗去表面血液，濾紙蘸干，稱(chēng)取0.5g相同部位的肺組織加入4.5mL的生理鹽水，制備成10%肺勻漿溶液，800g離心10min，吸取上清液待測(cè)，按丙二醛、超氧化物歧化酶測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定肺組織中MDA的含量和SOD的活性。另取相同位置的肺組織，10%的甲醛溶液固定1周，脫水，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅染料(HE)染色,光學(xué)</p&g

13、t;<p>　　1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法</p><p>　　結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差分析中的LSD檢驗(yàn)方法處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2.1 ACKs對(duì)大鼠胸膜炎胸腔滲出液量、白細(xì)胞計(jì)

14、數(shù)的影響 </p><p>　　角叉菜膠致炎后4h，模型組大鼠胸腔滲出液量和白細(xì)胞數(shù)顯著高于正常對(duì)照組；ACKs三個(gè)劑量組均能降低大鼠胸腔滲出液量和白細(xì)胞數(shù)（P＞0.01），見(jiàn)表1。表1 ACKs對(duì)大鼠胸膜炎胸腔滲出液量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（略）</p><p>　　2.2 ACKs對(duì)大鼠胸膜炎肺組織中MDA和SOD的影響 </p><p>　　角叉菜膠致炎后4h

15、，模型組大鼠肺組織中MDA升高，而SOD下降（P＜0.01）；ACKs高、中劑量組能降低大鼠肺組織中MDA（P＜0.01），同時(shí)能升高SOD(P＜0.01），見(jiàn)表2。表2 ACKs對(duì)大鼠胸膜炎肺組織中MDA和SOD的影響（略）</p><p>　　2.3 肺組織形態(tài)學(xué)觀察 </p><p>　　與正常對(duì)照組相比，各致炎組大鼠的肺組織出現(xiàn)明顯的急性炎癥特征，表現(xiàn)為大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺被膜

16、增厚等。與模型組相比，吲哚美辛組和ACKs各劑量組大鼠肺組織的炎癥有所改善，圖1(見(jiàn)封3)。</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　急性炎癥是機(jī)體對(duì)致炎因子的刺激所發(fā)生的立即和早期反應(yīng)。急性炎癥的主要特點(diǎn)是以血管反應(yīng)為中心的滲出性變化，導(dǎo)致血管內(nèi)的白細(xì)胞和抗體等透過(guò)血管壁進(jìn)入炎癥反應(yīng)部位，消滅病原體，稀釋并中和毒素，為炎癥修復(fù)創(chuàng)造良好的條

17、件。急性炎癥起病急驟，持續(xù)時(shí)間短，以炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為主。急性炎癥反應(yīng)中的血管擴(kuò)張、通透性升高和白細(xì)胞滲出的發(fā)生機(jī)制，是炎癥發(fā)生機(jī)制的重要課題。有些致炎因子可直接損傷內(nèi)皮，引起血管通透性升高，但許多致炎因子并不直接作用于局部組織，而主要是通過(guò)內(nèi)源性化學(xué)因子的作用而導(dǎo)致炎癥［8-10］。活性氧及其代謝物是內(nèi)源性化學(xué)因子的重要組成成分，對(duì)炎癥的發(fā)生、發(fā)展和結(jié)局起著重要作用［7］。MDA就是活性氧代謝物之一，它是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)在脂質(zhì)過(guò)氧化物酶作用下生

18、成的終產(chǎn)物。而SOD是體內(nèi)清除超氧陰離子的重要酶類(lèi)，它的活性直接影響體內(nèi)活性氧的含量，反映機(jī)體的抗氧化能力。一般同時(shí)測(cè)定MDA和SOD更能說(shuō)明活性氧對(duì)機(jī)體損傷程度的大小。本研究結(jié)果表明，老瓜頭總生物堿能減少大鼠胸膜炎的液體滲出、白細(xì)胞浸潤(rùn)以及肺組織中MDA的含量，而升高SOD的活性。提示老瓜頭總生物堿抑制大鼠胸膜炎的作用機(jī)制可能是降低炎癥細(xì)胞的游走和</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b

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