刺參酸性粘多糖對(duì)DEN誘導(dǎo)肝癌大鼠腫瘤形成的抑制作用.pdf

1、刺參酸性粘多糖對(duì)DEN誘導(dǎo)肝癌大鼠腫瘤形成的抑制作用’摘要。目的：觀察刺參酸性粘多糖(SJAMP)對(duì)二乙基亞硝胺(DEN)誘導(dǎo)大鼠肝癌形成過(guò)程中對(duì)腫瘤形成的抑制作用并通過(guò)免疫組化、PCR、western等方法來(lái)研究其作用的機(jī)制，為SJ／NP的應(yīng)用提供依據(jù)。方法：建立大鼠肝癌模型，將50只雄性wistar大鼠，隨機(jī)分為5組，每組10只，分為正常對(duì)照組(A組)，肝癌模型組(B組)，SJ／NP低劑量組(C組，11Smg／kg體重)、sJ／gt

2、P中劑量組(D組，35mg／kg體重)、SJAMP高劑量組(E組，70mg／kg體重)。SJAMP干預(yù)組在建立肝癌模型的同時(shí)，灌胃SJAMP，16周后停藥，麻醉處死大鼠。觀察大鼠腫瘤發(fā)生情況，并應(yīng)用熒光顯微鏡及電鏡觀察各組大鼠的瘤組織及細(xì)胞的變化，用免疫組化法檢測(cè)癌細(xì)胞內(nèi)PCNA、P53、P21、MDM2的表達(dá)，用RTPCR法檢測(cè)cyclinDl、CDK4及Westernblot印跡法檢測(cè)pRb、E2F一1的表達(dá)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)16周后處死

3、大鼠，病理檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了SJ／NP高劑量大鼠有l(wèi)例未發(fā)生肝癌外，其余各組大鼠均發(fā)生肝癌，且肝癌模型組大鼠的肝臟瘤結(jié)節(jié)數(shù)最多，sJ&llIP高劑量組大鼠肝臟瘤結(jié)節(jié)數(shù)最少，SJAMP各干預(yù)組瘤體積均明顯小于肝癌模型組(F=1653，q=523～960，PO05)，SJAMP高劑量組的瘤體積明顯小于SJAMP低劑量組(q=456，PO05)。電鏡下發(fā)現(xiàn)，SJAMP干預(yù)組的大鼠肝細(xì)胞中出現(xiàn)數(shù)量不等的凋亡小體。免疫組化結(jié)果表明，與肝癌模型組相比

4、，各組大鼠PCNA表達(dá)降低，差別有顯著性(F=6023，q=627“2057，PO05)；P53表達(dá)降低，差別有顯著性(F=6329，q=483～2047，PO05)；MDM2表達(dá)降低，差別有顯著性(F=4322，q=7251056，PO05)；P21表達(dá)增加，差別有顯著性(F=4722，q=530“1560，PO05)。RT—PCR結(jié)果顯示，與肝癌模型組相比，各組大鼠cyclinDl表達(dá)降低(F=4991，q=594“1852，PO0

5、5)；CDK4表達(dá)降低，差別有顯著性(F=5021，q=572～1808，PO，05)。WesternBlot結(jié)果顯示，與肝癌模型組相比，各組大鼠pRb蛋白表達(dá)增加，差別有顯著性(F=6325，q=356“16：36，PO05)；E2F1蛋白表達(dá)降低，差別有顯著性(F=26810，q=1455～3545，PO05)。結(jié)論：刺參酸性粘多糖對(duì)DEN誘導(dǎo)肝癌大鼠腫瘤形成有抑制作用，可能通過(guò)抑制增殖細(xì)胞核抗原PCNA、P53、MDM2蛋白，促進(jìn)

6、P21、pRb的表達(dá)及通過(guò)抑制細(xì)胞周期因子CyclinDl、CDK4、E2FI的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并可誘導(dǎo)異常增殖細(xì)胞發(fā)生凋亡。StichopusJaponicusacidmucopolysaccharideinhibitionoftumorformationonDENinducedlivercancerinratsAbstractObjective：ToobserveStichopusjaponicusacidmucopolys

7、accharide(SJ朋訂P)onDEN—inducedratlivercancerduringtheformationoftheinhibitoryeffectontumorbyimmunohistoehemistryPCRwesternblotandothermethodstoprovidethebasisfortheapplicationofSJAMEMethods：Modelofratslivercancerwasestabl

8、ished，wistarratswererandomlydividedintofivegroupsEachgroupincludedtenratsNormalcontrolgroup(A)，modelgroup(B)，SJAMPgroups：lowdosegroup(C，L5mg／kg)，themiddledosegroup(D，35mg／kg)，higlldosegroup(E，70mg／kg)SJAMPgroupsfeddiffer

9、entdosesofSJAMPwhileintheestablishmentoflivercancermodelAfterfed16weeks，ratswerekilledDuringtheexperiment，wecomparedtheincidenceoflivercancerandobservethechangesinthetumortissueandcellsofratsineachgroupinthefluorescencem

10、icroscopyandelectronmicroscopyimmunohistochemicalmethodtodetectcanogrcells，theexpressionofPCN八p53，p21，MDM2，theexpressionofcyclinD1andCDK4expressionbyRTPCRmethod，WesternblotdetectionofpRbandofE2F一1Results：Exceptoneratinhi

11、ghdosegroup，theremainingratsinothergroupsdevelopedlivercancerThemodelgroupratshadthemostnumberoftumbernoduleswhilehigll—dosegroupratshadtheleastnumberoftumornodulesThetumorvolumeofSJAMPgroupsweresignificantlylessthanthem

12、odelgroup(F=1653，q=5234960，PO05)SJAMPhiighdosegrouptumorvolumewassignificantlylessthanSJAMPlowdoseg咖(q=456，P005)ElectronmicroscopyinSJAMPgroupshad8mountsofapoptoticbodiesinrathepatocytesImmunohistoehemicalresultsshowedth

13、atcompared謝也themodelgroup，othergroupstheexpressionofPCNAdecreased，thedifferencesweresignificant(F=6023，q=6272057，P005)；theexpressionofP53decreased，thedifferencesweresignificant(F=6329，q=4832047，P005)；theexpressionofMDM2d

14、ecredsed，thedifferencesweresignificant(F=4322，q=725～1056，P005)；theexpressionofP21increased，thedifferencesweresignificant0：=4722，q_530~1560，P005)RTPCRresultsshowedthatcomparedwiththemodelgroup，theothergroupscyclinDlexpres