黑根霉胞外多糖對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、轉(zhuǎn)移是造成惡性腫瘤患者的死亡的主要原因，市面上大多數(shù)的化療藥物主要針對(duì)的是惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，很少有能夠有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物。因此，高效且低毒副作用的抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的研發(fā)在惡性腫瘤的治療過(guò)程中尤為關(guān)鍵。
　　抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物的研發(fā)即尋找或設(shè)計(jì)出能夠有效抑制轉(zhuǎn)移中關(guān)鍵環(huán)節(jié)的物質(zhì)。目前，除了抗血管生成藥物以外，其它藥物的研發(fā)進(jìn)展較緩慢。臨床研究表明，抗血管生成藥物能夠延長(zhǎng)晚期腫瘤患者壽命，提高病人存活率，但具有一定的局限性，并不適用

2、于所有的腫瘤，且副作用較嚴(yán)重。
　　研究表明，活性多糖在腫瘤轉(zhuǎn)移方面有一定的功效。活性多糖免疫調(diào)節(jié)、低毒副作用等優(yōu)勢(shì)，能夠在一定程度上彌補(bǔ)化療療法的不足，對(duì)其抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究具有重要的意義。
　　本課題組從黑根霉發(fā)酵液中分離、純化得到的一種天然多糖Exopolysaccharides1-1(EPS1-1)。前期發(fā)現(xiàn)，EPS1-1能夠顯著抑制CT26荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，增強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)的功能，顯著減輕5-氟尿嘧啶所造成免疫

3、力低下、體重降低等不良反應(yīng)，增強(qiáng)化療療效。本論文主要以CT26細(xì)胞為研究對(duì)象，研究EPS1-1在抗轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用，并初步分析其作用機(jī)制。
　　體外實(shí)驗(yàn):
　　侵襲是腫瘤轉(zhuǎn)移啟始環(huán)節(jié)之一，采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分析EPS1-1對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲能力的影響，發(fā)現(xiàn)EPS1-1能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞侵襲，0.1、0.2、0.4 mg/ml多糖處理組侵襲抑制率分別為25.00％、45.37％、50.93％。惡性腫瘤細(xì)胞到達(dá)遠(yuǎn)處的靶位點(diǎn)

4、的過(guò)程離不開(kāi)腫瘤細(xì)胞的遷移，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析EPS1-1對(duì)CT26遷移能力的影響，發(fā)現(xiàn)0.1、0.2、0.4 mg/ml EPS1-1處理后，腫瘤細(xì)胞的遷移能力均明顯降低，細(xì)胞遷移抑制率分別為36.23％、48.30％、65.70％。腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的過(guò)程均有腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的黏附的參與，CT26與Matrigel黏附實(shí)驗(yàn)表明，0.2、0.4 mg/ml EPS1-1處理組，CT26細(xì)胞與Matrigel黏附能力均顯著下降

5、，EPS1-1對(duì)腫瘤細(xì)胞黏附的抑制率分別為36.1％和50.4％。內(nèi)皮細(xì)胞管形成實(shí)驗(yàn)常用于抗血管藥物的篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EPS1-1能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞管道的形成。MMP-2、MMP-9是主要的降解胞外基質(zhì)的蛋白酶，Vimentin常被視為判斷腫瘤細(xì)胞侵襲能力的指標(biāo)，VEGF則是調(diào)節(jié)腫瘤新生血管生成的關(guān)鍵內(nèi)皮因子。MMP-2、MMP-9、Vimentin和VEGF表達(dá)量升高，細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力也往往增強(qiáng)。E-鈣黏素在腫瘤細(xì)胞的黏附過(guò)程中發(fā)揮了重要的

6、功能，E-鈣黏素表達(dá)水平的下降，通常會(huì)加速腫瘤的轉(zhuǎn)移。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，EPS1-1能夠明顯降低CT26細(xì)胞中MMP-2及MMP-9活性。qPCR表明，EPS1-1顯著降低了CT26細(xì)胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin和VEGF mRNA表達(dá)量，顯著上調(diào)E-cadherin的表達(dá)量。Western-blot、免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示，EPS1-1處理組CT26細(xì)胞中的MMP-9、Vimentin和VEGF蛋白表達(dá)水平均明顯降

7、低。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn):
　　建立小鼠黑色素瘤和結(jié)腸癌尾靜脈轉(zhuǎn)移模型，體內(nèi)研究EPS1-1抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。肺指數(shù)統(tǒng)計(jì)分析表明，EPS1-1可以抑制黑色素瘤和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移，與模型組相比肺指數(shù)分別降低48.50％，38.37％。qPCR表明，EPS1-1組荷瘤小鼠肺組織中MMP-2、MMP-9、Vimentin和VEGF基因表達(dá)水平顯著降低。同時(shí)，Western-blot結(jié)果表明，EPS1-1處理后，小鼠肺部MMP-9、Viment

8、in和VEGF蛋白表達(dá)量明顯減少。免疫組化結(jié)果顯示，EPS1-1組小鼠肺組織中CD31陽(yáng)性著色程度降低。此外，EPS1-1處理后，小鼠的胸腺指數(shù)上升，血清中的IL-2的釋放量增加，表明EPS1-1可能增強(qiáng)了小鼠的免疫能力。
　　結(jié)論:
　　EPS1-1能夠體外抑制CT26腫瘤細(xì)胞黏附、侵襲、遷移及內(nèi)皮細(xì)胞管道生成;體內(nèi)抑制結(jié)腸癌、黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并增強(qiáng)了BaLb/c小鼠免疫功能。EPS1-1抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用可能與其調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移中