牡丹皮、赤芍總苷對(duì)急性細(xì)菌性腹膜炎的抑制作用研究.pdf

1、目的： 提取、分離牡丹皮、赤芍中的總苷并測(cè)定其中主要藥效成分芍藥苷的含量，分別從抑菌、局部血流變化、腸粘膜通透性、細(xì)胞因子四個(gè)方面考察所提取的兩種總苷對(duì)急性細(xì)菌性腹膜的多途徑抑制作用，旨在明確二者的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。 方法： 實(shí)驗(yàn)一提取、分離牡丹皮和赤芍中的總苷，以70％乙醇熱回流分別提取牡丹皮、赤芍3次，合并各自提取液，濃縮經(jīng)大孔復(fù)合樹脂柱，分離70％乙醇洗脫液，合并洗脫液蒸干

2、即得各自總苷。建立總苷中芍藥苷的反相高效液相色譜定量法，色譜條件為：色譜柱：KromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：0.2％磷酸水溶液：甲醇(70：30)，流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，柱溫：室溫。 實(shí)驗(yàn)二以平板二倍稀釋法考察牡丹皮、赤芍總苷對(duì)大腸埃希菌、肺炎克雷白菌、銅綠假單孢菌、糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)及臨床8種菌株的體外抑菌作用。將兩種總苷分別配制成7個(gè)濃度依次減半的樣品溶液，加入瓊脂培養(yǎng)基中

3、鋪板，并設(shè)蒸餾水為陰性對(duì)照。將各板接種菌種，在35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18個(gè)小時(shí)后觀察抑菌結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)三以盲腸結(jié)扎加穿孔法(CLP法)制備急性細(xì)菌性腹膜炎大鼠模型，觀察牡丹皮、赤芍總苷對(duì)模型大鼠的局部血流變化、腸粘膜通透性、細(xì)胞因子等3個(gè)因素的影響。將健康wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、牡丹皮總苷和赤芍總苷給藥組，每天灌胃給藥2次，連續(xù)觀察急性炎癥期3天，用MP150生理信號(hào)記錄儀測(cè)定腸系膜血管血流量和腸粘膜微循環(huán)血流

4、量；收集模型大鼠尿液樣本，用反相高效液相色譜法測(cè)定乳果糖(L)與甘露醇(M)濃度，計(jì)算二者比值(L/M)；腹主動(dòng)脈取血，以ELISA法測(cè)定細(xì)胞因子TNF—α的含量。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用spss軟件進(jìn)行分析和比較。 結(jié)果： 1、牡丹皮、赤芍總苷的收率分別為4％和11％，經(jīng)HPLC測(cè)定，其芍藥苷含量分別為8.03mg/g和23.5mg/g。 2.牡丹皮、赤芍總苷對(duì)8種菌株均有一定的抑制作用，其中牡丹皮總苷對(duì)銅綠假單孢菌標(biāo)

5、準(zhǔn)株及臨床株作用最強(qiáng)，對(duì)肺炎克雷白菌標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株作用相對(duì)較弱，對(duì)大腸埃希菌、糞腸球菌的標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株的抑菌效果相同；赤芍總苷則對(duì)大腸埃希菌、銅綠假單孢菌的標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株有較好抑制作用，對(duì)肺炎克雷白桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、臨床株的作用較差。 3.牡丹皮、赤芍總苷均可改善小腸組織微循環(huán)、降低細(xì)胞因子TNF—α水平，且二者效果相當(dāng)；但牡丹皮總苷降低腸粘膜通透性的效果較好。 結(jié)論： 1.經(jīng)優(yōu)化、篩選的牡丹皮、赤芍總苷的提取分離條件

6、，簡(jiǎn)單易行，且收率較高；建立的HPLC芍藥苷定量方法簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，重復(fù)性好，適用于提取物中芍藥苷的定量分析。 2.在測(cè)定兩種總苷中芍藥苷含量的基礎(chǔ)上，進(jìn)行它們的體外抑菌實(shí)驗(yàn)，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的水煎劑的體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究相比，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、真實(shí)，確定了總苷部位的是二味中藥的抑菌活性部位之一，為二種藥材的I臨床應(yīng)用提供了科學(xué)、合理的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 3.明確了牡丹皮、赤芍總苷的抑菌作用后，又通過(guò)實(shí)驗(yàn)分別證實(shí)了兩者對(duì)急性細(xì)菌性腹