肝硬化動(dòng)物模型常用的單因素造模法

1、<p>　　肝硬化動(dòng)物模型常用的單因素造模法</p><p>　　摘要：肝硬化是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)疾病，其顯著特點(diǎn)是門靜脈高壓。構(gòu)建穩(wěn)定、可復(fù)制、便捷和仿真性強(qiáng)的肝硬化動(dòng)物模型是研究肝硬化的必要條件，根據(jù)不同研究目的，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選用以及建模的方法上都有所不同。本文就肝硬化模型常用的建立方法加以綜述。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：肝硬化，動(dòng)物模型，造模方法 </p&g

2、t;<p>　　中圖分類號(hào)：R657.3+1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： </p><p>　　肝硬化門靜脈高壓癥是威脅人類健康的重要疾病之一，引起肝硬化的原因很多如飲食、肝毒性藥物、寄生蟲、病毒感染等等。目前對(duì)此類疾病的研究需要以肝硬化動(dòng)物模型(cirrhosis model, CM)為基礎(chǔ)，因此必須構(gòu)建一種穩(wěn)定、可復(fù)制、便捷和仿真性強(qiáng)的肝硬化動(dòng)物模型，其病理改變應(yīng)呈現(xiàn)階段性進(jìn)展、分期明顯。當(dāng)前主

3、要有兩大類建模方案:單因素誘導(dǎo)建模和多因素誘導(dǎo)建模。下面對(duì)目前常用的幾種肝硬化的造模方法進(jìn)行闡述。 </p><p><b>　　1.單因素造模 </b></p><p>　　1.1四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4) </p><p>　　CCl4是最為常用的肝臟毒素，是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性肝損傷動(dòng)物模型所用外源性化合物。C

4、Cl4進(jìn)入機(jī)體后，首先經(jīng)肝細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素P450激活生成活性三氯甲基(CCl3-),攻擊肝細(xì)胞膜的磷脂引起脂質(zhì)過(guò)氧化從而破壞肝細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)，CCl3-還可與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合，損害線粒體導(dǎo)致還原性輔酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝內(nèi)生成受阻，抑制脂肪酸氧化和三羧酸循環(huán)。肝組織受到損害-修復(fù)-損害的循環(huán)破壞作用，最終導(dǎo)致肝纖維化及肝硬化的發(fā)生。 </p><p>　　CCl4造模途徑主要有灌胃、皮下注射

5、及腹腔注射等，造模時(shí)間隨給藥途徑、劑量以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的不同而不同。常用40%～60%CCl4橄欖油溶液皮下注射，0.3ml/100g體重，首劑加倍，每周2次，共8～12周形成肝纖維化。楊開選等于實(shí)驗(yàn)期的第1、3、6和8周用10%（1體積CCl4和9體積玉米油混合）的CCl4，按0.1ml/100g體重，對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射，取肝組織作組織病理學(xué)觀察，第8周肝小葉中央?yún)^(qū)和匯管區(qū)纖維間隔相互連接，肝小葉結(jié)構(gòu)和血液循環(huán)形成假小葉，即出現(xiàn)肝硬化。

6、</p><p>　　1.2 酒精性肝硬化模型(alcoholic cirrhosis model,ACM) </p><p>　　肝臟是酒精在機(jī)體內(nèi)代謝的主要場(chǎng)所，長(zhǎng)期過(guò)度飲酒是導(dǎo)致酒精性肝硬化的主要原因。乙醇進(jìn)入肝細(xì)胞抑制線粒體三羧酸循環(huán)，脂肪酸氧化減少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝內(nèi)蓄積導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變4。同時(shí)乙醇還可以直接損傷血管內(nèi)皮，導(dǎo)致血小板聚集，釋放大量細(xì)胞因子，激活儲(chǔ)脂細(xì)

7、胞轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞，合成分泌大量膠原引起肝纖維化甚至發(fā)展為肝硬化。 </p><p>　　目前國(guó)內(nèi)常用方法是喂養(yǎng)固體飼料的同時(shí)，將一定濃度的酒精定時(shí)定量灌胃。李異玲等用40%乙醇，每日8g/kg體重，每天3次灌胃，自第5周開始，以50%乙醇，每日9g/Kg，每天3次灌胃，自第9周開始50%乙醇，每日10g/Kg，每天3次灌胃至12周末，通過(guò)不斷遞增乙醇的濃度，于12周末形成輕度肝纖維化改變。酒精誘導(dǎo)造模比較困難，因

8、為酒精的攝入量比較難控制，管導(dǎo)入技術(shù)比較難掌握，同時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昂貴，耗時(shí)比較長(zhǎng)。 </p><p>　　1.3 其他造模法 </p><p>　　長(zhǎng)期應(yīng)用低劑量致癌物可以引起肝硬化，如二甲基亞硝胺（DMNA）是常見(jiàn)的致肝癌劑，常用的造模方法是按1mL/Kg腹腔注射1%DMNA，每周前3d給藥，每天1次，持續(xù)3周，第4周僅在周一給藥1次，4周后大鼠肝硬化形成；膽總管結(jié)扎，4～8周即可形成肝硬化

9、，國(guó)內(nèi)史留斌曾建立豬的膽汁性肝硬化模型，用于評(píng)估原位輔助性肝移植手術(shù)效果；免疫誘導(dǎo)法通常采用異種動(dòng)物血清、蛋白作為抗原，通過(guò)反復(fù)注射的方式來(lái)建立免疫性肝硬化模型，黃志剛等用Wistar大鼠腹腔注射豬血清誘導(dǎo)免疫性肝纖維化模型，第8周后均形成肝纖維化；采用皮下注射曼氏血吸蟲尾蚴，亦可經(jīng)皮膚或水感染，蟲卵沿門靜脈肝內(nèi)分支大量沉積，可誘發(fā)肝內(nèi)廣泛的肉芽腫性炎癥反應(yīng)及免疫反應(yīng)，同時(shí)促使大量成纖維細(xì)胞活化增生，產(chǎn)生過(guò)多膠原纖維，最終導(dǎo)致肝硬化的形

10、成，造模時(shí)間長(zhǎng)60-90天，死亡率高約為40%-50%；20世紀(jì)80年代起，樹?人HBV感染模型的研究不斷取得進(jìn)展，樹?感染人HBV以后，呈慢性肝炎及輕度纖維組織增生圖像，部分肝細(xì)胞呈腺管樣排列，并出現(xiàn)肝細(xì)胞增生灶或增生結(jié)節(jié)，可見(jiàn)少量的散在或聚集分布的異形增生的肝細(xì)胞。 </p><p><b>　　參考文獻(xiàn)： </b></p><p>　　[1]Henkel C,

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13、;　　[3]Kremsdorf D, Brezillon N. New animal models for hepatitis C viral infection and pathogenesis studies[J]. World J Gastroenterol,2007,13(17):2427- 2435. </p><p>　　作者簡(jiǎn)介：陳玉龍（1984-）男，江西豐城人，助教，碩士，江西中醫(yī)學(xué)院教師。研究