‘碭山酥梨’及其褐皮芽變果皮結(jié)構(gòu)觀察和差異表達(dá)基因分析.pdf

1、‘碭山酥梨’(Pyrus bretschneideri cv.Dangshansuli)是產(chǎn)于黃河故地安徽碭山縣的品種，栽培史高達(dá)2500年，在2005年發(fā)現(xiàn)的‘碭山酥梨’變種‘銹酥’全果著褐色，風(fēng)味獨(dú)特，是優(yōu)異的呈穩(wěn)定變異的梨品系，然而在各類果皮研究中，對于褐色果皮的成因研究較少，而對于綠皮梨和紅皮梨的研究較多，主要研究的方向也是生理方面，此實(shí)驗(yàn)為了研究褐皮產(chǎn)生的基因差異，以碭山酥梨及其褐皮芽變品系銹酥的5個(gè)時(shí)期的梨皮為實(shí)驗(yàn)材料，提取

2、其RNA，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)并探討了二者之間的基因差異，旨在探討梨果實(shí)褐皮形成機(jī)理，為梨皮顏色的進(jìn)一步
　　 1.‘碭山酥梨’表面平滑，呈黃綠色，‘銹酥’粗糙不研究建立理論基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)探討了基因研究的方法。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：平，呈褐色，通過掃描電鏡觀察‘碭山酥梨’及‘銹酥’，二者之間的表皮結(jié)構(gòu)也有很大不同，‘碭山酥梨’表皮的細(xì)胞結(jié)構(gòu)較之‘銹酥’，排列更為松散，初生壁較厚，表皮細(xì)胞層與木栓形成層之間沒有明顯界限，而在‘銹酥’中，可以很

3、明顯的觀察到臨近表皮的2-3層細(xì)胞呈由淺到深的褐色木栓化變化。
　　 2.優(yōu)化了DDRT-PCR體系，利用DNA-STAR軟件設(shè)計(jì)出隨機(jī)引物B0319以及錨定引物T11C，按照正交設(shè)計(jì)16個(gè)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得出了優(yōu)化過的PCR程序體系，94℃預(yù)變性2 min，94℃變性30 s，40℃退火2 min，72℃延伸40 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7 min，4℃保存。除此以外，PCR混合物體系是：dNTP濃度0.1 mmol·L

4、-1，錨定引物和隨機(jī)引物濃度0.5μmol·L-1，Mgc12濃度3mmol·L-1，Taq酶用量0.5 U。
　　 3.利用聚丙烯酰胺凝膠技術(shù)，篩選出了63條差異基因，其中60條質(zhì)量較高，其余3條質(zhì)量較低，根據(jù)(GO)基因功能差異表達(dá)，運(yùn)用Blast軟件比對60個(gè)EST序列進(jìn)行組裝、拼接、分析，得到11個(gè)Contigs(ESTs numbers≧2)序列，22個(gè)Singlets(ESTs numbers=1)。
　　

5、4.以花后75 d、100 d、125 d、150 d和175 d梨皮中的RNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA為模板，用熒光定量技術(shù)驗(yàn)證了先前篩出的基因中的α-微管蛋白基因。從果實(shí)幼果期至成熟期，銹酥和碭山酥梨的α-微管蛋白基因變化量是呈曲線狀的?；ê?5天是，碭山酥梨大于銹酥，花后100天和花后125天銹酥大于碭山酥梨，但是到了花后150天和花后175天，碭山酥梨的此基因含量大于銹酥。同時(shí)以3-磷酸甘油醛脫氫酶為引物，用熒光定量PCR驗(yàn)證了在傳遞