胸膜肺炎放線桿菌血清學分型和基因分型的研究.pdf

1、胸膜肺炎放線桿菌是豬傳染性胸膜肺炎的病原,該試驗中,將引進的胸膜肺炎放線桿菌13種血清型標準菌株,在TM/SN培養(yǎng)基上增殖,收獲菌體,滅活后用于免疫家兔,制備了分型血清.分別應(yīng)用玻片凝集試驗、瓊脂擴散試驗和免疫電泳試驗,對抗血清的特異性、效價和保存期進行了監(jiān)測,結(jié)果表明,制備的抗血清有較好的特異性,在4℃下保存1個月、-20℃下8個月和-80℃下1年其效價無明顯變化.用制備的分型血清采用瓊脂擴散試驗對PCR陽性的胸膜肺炎放線桿菌地方分離

2、菌株進行了鑒定,分別為血清2、3和8型,說明抗血清可用于分離菌株的鑒定分型.為了能通過檢測送檢血清了解動物感染病原的血清型,將增殖并收獲的胸膜肺炎放線桿菌13個血清型標準菌株,采用洗滌直接離心、超聲波處理和酚抽提等方法,制備不同血清型抗原,通過玻片凝集試驗、瓊脂擴散試驗和對流免疫電泳,以標準抗血清作為參考,評價各種診斷抗原的特異性和靈敏性.分別應(yīng)用研制的3種抗原對來自湖北、湖南、江西、河南和安徽等五省的155份送檢血清進行檢測,初步結(jié)果

3、表明定型抗原及其檢測方法能準確地進行血清學鑒別診斷和血清分型.基因分型是近幾年來用于細菌分型的新技術(shù),能克服經(jīng)典的血清學分型方法對部分菌株不能進行分型的缺點,已經(jīng)應(yīng)用于其它細菌的分型.該研究中,根據(jù)胸膜肺炎放線桿菌各血清型之間某些毒力相關(guān)因子的基因差異,設(shè)計不同的引物,分別對各血清型外毒素(Apx)、外膜蛋白(OmlA)、轉(zhuǎn)鐵蛋白B(TbpB)進行PCR擴增,得到不同的特異性片段,可區(qū)分胸膜肺炎放線桿菌生物Ⅰ型13個標準菌株血清型中的8

4、個血清型,建立了基因分型方法,常見病原菌如大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、波氏桿菌和鏈球菌在apx-PCR中不能擴增出特異性片段.對分離的12株野生菌用此方法進行分型,其結(jié)果與常規(guī)的血清學分型結(jié)果一致,為血清2、3和10型.將此分型系統(tǒng)用于臨床送檢的126份肺臟和42份扁桃體檢測,結(jié)果表明,可直接檢測出胸膜肺炎放線桿菌感染,并能判定感染病原的血清型.該方法還可以將一些尚未定型的菌株進行歸類,彌補了血清學方法的不足,而且,縮短了診斷的時間.