豬胸膜肺炎放線桿菌血清抗體快速檢測試劑盒的研制及應(yīng)用.pdf

1、1、rApxⅣ-ELISA反應(yīng)條件的優(yōu)化和試劑盒的研制重組ApxⅣ蛋白表達(dá)與提純經(jīng)過改進(jìn)，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)速由190rpm提高到220rpm；對早期經(jīng)建立的檢測豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)野毒感染抗體的rApxⅣ-ELISA進(jìn)行了反應(yīng)條件的優(yōu)化，封閉液使用1％BSA在37℃封閉2h。底物溶液中的H<,2>O<,2>工作濃度從0.025‰降低到0.020‰，顯色時間控制在8～10min。在此基礎(chǔ)上組裝成檢測APP抗體的試劑盒可在-20℃保存12個月

2、。該試劑盒的批次內(nèi)和批次間的變異系數(shù)分別為3.2～6.9％和0.1～6.4％，具有特異性、敏感性良好的特點，可快速檢測APP的ApxⅣ抗體水平的效果。 2、rApxⅣ-IHA方法的建立利用大腸桿菌表達(dá)的APP的rApxⅣ主要結(jié)構(gòu)蛋白，建立rApxⅣ-IHA檢測豬的抗體。致敏綿羊血紅細(xì)胞的蛋白濃度為15μg/mL，以pH4的TAP緩沖液作為致敏稀釋液，37℃水浴1h致敏。IHA采用30μl體系，37℃，作用45min．1:8孔全

3、凝時判定為陽性，用此方法與本試驗室先期建立的rApxⅣ-ELISA方法共同檢測血清，328份呈線性正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.974。 3、rApxⅣ-IHA試劑盒的研制和實際應(yīng)用對建立的檢測rApxⅣ抗體的IHA進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化，并組裝成ApxⅣ-IHA試劑盒，該試劑盒重復(fù)試驗批間變異系數(shù)為0～6.4％；而批內(nèi)變異系數(shù)為0～6.8％，4℃保存可達(dá)6個月。實際應(yīng)用中，該rApxⅣ-IHA試劑盒檢測豬血清陽性率32.0％(176/55