麻疹病毒基因分型及血清學研究.pdf

1、目的:了解天津市源自病人的麻疹病毒野毒株的基因變異狀況及評價麻疹減毒活疫苗的免疫保護效果。
　　 方法:
　　 1.采集2002～2008年疑似麻疹患者的咽拭子和尿液標本,用Vero-SLAM細胞分離麻疹病毒；
　　 2.提取病毒培養(yǎng)液中的RNA,用一步RT-PCR方法擴增麻疹病毒編碼核蛋白(nucleoprotein)的N基因C端594個核苷酸片段,擴增產(chǎn)物直接測序后與國際標準株進行生物信息學分析；
　　

2、 3.使用GENRUNER軟件篩選N基因C端594個核苷酸片段的限制性內切酶位點,確定BcnⅠ用來建立RT-PCR-RFLP的麻疹病毒基因分型方法,以區(qū)分麻疹病毒疫苗株和中國流行的野毒株；
　　 4.采用酶聯(lián)免疫吸附方法對8月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前的抗體水平進行分析,了解保護性抗體的衰減過程；
　　 5.采用酶聯(lián)免疫吸附方法和中和抗體檢測法對接種麻疹減毒活疫苗的健康人群免疫前后的抗體水平進行測定,評價麻疹減毒活疫苗對

3、流行病毒株的保護效果；
　　 6.采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測2010年麻疹疑似病例血清特異性IgM抗體,了解天津麻疹疫情變化趨勢,據(jù)此評價麻疹計劃免疫和2008年麻疹強化免疫的效果。
　　 結果:
　　 1.采集2002～2008年天津地區(qū)散發(fā)和暴發(fā)的麻疹疑似病例標本,共189份,其中132份尿液中分離到57株麻疹病毒,陽性分離率為43.18％；采集57份咽拭子中分離到23株麻疹病毒,陽性分離率為40.35％;

4、r>　　 2.在所有分離到的80株麻疹病毒株中有11人是咽拭子和尿液同時陽性,取其一做PCR和序列分析,鑒定的總數(shù)為69株。69株麻疹病毒經(jīng)對N基因C端594bp的RT-PCR-RFLP證實均為H1基因型,其中除2002年1株(1.45％)病毒為H1b基因亞型,其余均為H1a(98.55％)基因亞型,未發(fā)現(xiàn)疫苗相關株(A基因型),表明H1a亞型為優(yōu)勢流行型；
　　 3.選取24株麻疹病毒進行N基因C端450個核苷酸的種系發(fā)育分

5、析,2002～2008年流行的H1a亞型毒株的變異范圍為0.002～0.038(1～17個核苷酸差異),表明天津地區(qū)流行的麻疹是由不同麻疹病毒株的多個傳播鏈引起的；
　　 4.本論文建立的RT-PCR-RFLP方法可以區(qū)分中國麻疹病毒流行株H1a、H1b基因亞型及A基因型(疫苗株),與序列分析結果完全一致。該方法簡便、快速、特異、經(jīng)濟,適用于大量的流行病學調查；
　　 5.對922名不同年齡組健康人疫苗免疫前后的特異性I

6、gG抗體水平比較,顯示其陽性率無顯著性差異；但抗體效價的幾何平均滴度(GMT)方差分析提示小于8月齡、高中二年級和20～25歲三個年齡組的GMT水平較低,其差異具有統(tǒng)計學意義；
　　 6.采用中和抗體法評價13名8月齡兒童麻疹疫苗初免后IgG抗體對疫苗株和流行病毒株的保護作用,兩者無顯著性差異,表明當前使用麻疹減毒活疫苗預防的有效性；
　　 7.對160例8月齡以下嬰兒的麻疹保護性抗體水平進行分析,新生兒麻疹IgG抗體陽

7、性率僅為36.8％,到7月齡時降至12.5％,隨著月齡增長逐漸衰減；
　　 8.2010年565例疑似麻疹病例中,小于8月齡組和大于14歲組共計509例(90.09％),遠遠多于8月齡～14歲組(9.91％)。509例疑似病例,實驗室確診329例,陽性率高達64.64％,表明2008年麻疹強化免疫是有效的,但現(xiàn)行麻疹疫苗的免疫程序需要進一步調整。
　　 結論:
　　 1.天津市流行的麻疹病毒株以H1a亞型為優(yōu)勢流

8、行型,N基因C端450個核苷酸分析顯示流行毒株間有1～17個核苷酸的差異,表明存在多個不同的傳播鏈,其變異屬于抗原漂移；
　　 2.8月齡兒童麻疹疫苗初免后產(chǎn)生的中和抗體對疫苗株和流行病毒株的保護作用無顯著性差異,表明當前使用的麻疹減毒活疫苗用來預防是有效的；
　　 3.8月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前抗體平均濃度(GMC)隨著月齡增長逐漸衰減,易感兒增多；不同年齡組健康人群疫苗免疫前后的特異性IgG抗體效價的幾何平均滴度(