氟喹諾酮類藥物的篩選及達氟沙星間接競爭ELISA檢測方法的建立.pdf

1、氟喹諾酮類(F1uoroquinolones，F(xiàn)QNs)藥物是一種人工合成的新型抗菌藥物，隨著廣泛用于動物和人類的多種感染性疾病的治療[1～2]，其殘留問題已引起了人們的高度重視。目前，檢測FQNs藥物殘留常用的方法有HPLC<'[3～5]>、ELISA等，其中EIJSA法操作簡便，靈敏度又高，適用于大量快速檢出殘留藥物。本研究旨在建立這種間接競爭ELISA殘留檢測的方法。 本實驗首先是把常用的恩諾沙星(ENRO)、諾氟沙星(N

2、FLX)、達氟沙星(DFLX)3種FQNs類藥物，用N-羥基琥珀酰亞胺法與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)成各自的完全抗原，并且進行紫外掃描光譜等鑒定。通過免疫新西蘭白兔制備出了各自的抗血清。然后采用間接競爭ELISA分別與其它幾種常用的FQNs類藥物(恩諾沙星、沙拉沙星、諾氟沙星、達氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、培氟沙星)做競爭反應。通過計算交叉反應率，成功的篩選出了達氟沙星(DFLX)能同時與本身及恩諾沙星(

3、ENRO)、沙拉沙星(SALX)、諾氟沙星(NFLX)、洛美沙星(LMLX)、氧氟沙星(OFLX)5種FQNs類藥物同時發(fā)生競爭反應，且交叉反應率較高。 優(yōu)化EIJSA條件后，理想的包被抗原濃度為1.25μg/L，多抗(DFLX-PcAb)的工作濃度為1∶10000,酶標二抗的工作濃度為1∶4000。并且得到回歸方程(y=0.7975．0.125xR<'2>=0.989)、標準曲線和最適檢測范圍(0.1～10ng/L)。通過評價