大豆轉基因技術體系的建立及大豆蛋白激酶(GmPK)基因的導入的研究.pdf

1、大豆(Glycine max(L.) Merr.)是一種重要的油料和飼料作物，也是人類的主要食用蛋白和工業(yè)原料的來源。遺傳轉化不僅可以是研究基因功能，也是將優(yōu)良外源基因導入大豆中培育大豆新品種的主要方法。與其他作物相比，大豆是較難轉化的作物，主要體現(xiàn)在轉化效率低、轉化后植株再生頻率低及重復性差等方面，因此建立理想、高效的大豆轉化體系，是目前研究熱點之一。
　　 目前有多種植物遺傳轉化的方法，其中根癌農(nóng)桿菌介導的子葉節(jié)法是國內(nèi)外植

2、物基因工程中較為常用的方法之一，本研究以大豆品種“中黃10”、“中豆32”、“Peking”的成熟種子為材料，用攜帶有抗旱、耐鹽目的基因GmPK(pBI121/pEGAD)的農(nóng)桿菌EHA105侵染外植體，對農(nóng)桿菌介導轉化大豆的影響因素進行研究，同時從培養(yǎng)基改進等方面對遺傳轉化體系進行優(yōu)化，以提高農(nóng)桿菌的侵染率、叢生芽的誘導率等，建立一種穩(wěn)定性好、通用性強的大豆轉化技術體系，達到將目的基因導入大豆，獲得轉基因植株，提高轉化效率的目的。

3、r>　　 獲得的主要結果如下：
　　 1.大豆子葉節(jié)高再生力基因型的篩選。用含不同質粒(pBI121/pEGAD)的同一農(nóng)桿菌菌株EHA105浸染13個不同基因型大豆的子葉節(jié)，不同基因型之間再生頻率有明顯差異，它們的再生頻率變幅分別為0-51％和0-51.9％，從中篩選出中黃10、中豆32、Peking三個再生頻率較高的基因型。
　　 2.葡萄糖濃度對農(nóng)桿菌侵染效率的影響。通過葡萄糖濃度(5 g/L、10 g/L、15

4、 g/L)的梯度實驗，發(fā)現(xiàn)向共培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入10 g/L的葡萄糖可以有效促進農(nóng)桿菌對外植體的侵染，用GUS化學組織染色檢測，結果表明農(nóng)桿菌侵染效率平均達76.7％。
　　 3.不同濃度維生素C對不同基因型抑制褐變的效果。在誘導叢生芽階段，通過濃度梯度實驗發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中針對不同基因型加入適宜濃度的Vc(中黃10：25 mg/L，Peking：50 mg/L，中豆32：100 mg/L)，可有效防止外植體褐化，阻止細胞死亡。