轉(zhuǎn)基因大豆及其制品檢測技術(shù)的研究.pdf

1、本文基于目前國際上對轉(zhuǎn)基因食品還沒有建立統(tǒng)一完善的定性和定量檢測體系，為了探索建立轉(zhuǎn)基因檢測體系的策略，以抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆及其加工產(chǎn)品為材料，試圖建立經(jīng)濟靈敏、準(zhǔn)確可靠的轉(zhuǎn)基因大豆及其制品的內(nèi)外源基因檢測體系。主要取得了以下結(jié)果： 1、建立了以CTAB法為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因大豆及其粗加工和深加工產(chǎn)品抽提基因組DNA的技術(shù)。其結(jié)果顯示：利用傳統(tǒng)CTAB法對大豆種子抽提的基因組：DNA基本完整，能完全滿足PCR擴增要求；對粗加工產(chǎn)品(豆

2、粕，豆奶粉)而言，延長CTAB法中抽提緩沖液的抽提時間為40～60min能得到基本完整的DNA；而對于深加工制品色拉油而言，在此基礎(chǔ)上還需增加前處理階段，即將樣品適量溶解于TE緩沖液并充分混勻攪拌；此外對于醬油而言，抽提前用100mmoL/L的Tris-HCl洗2～3次可在DNA溶出前去掉水溶性和部分脂溶性色素以及部分多糖。 2、設(shè)計合成檢測轉(zhuǎn)基因大豆內(nèi)源基因Lectin、外源基因CaMV35S啟動子、NOS終止子及抗除草劑基因

3、EPSPS基因的特異性引物。應(yīng)用優(yōu)化的常規(guī)PCR方法，對大豆及其加工產(chǎn)品豆粕、豆奶粉、醬油、色拉油等進(jìn)行了檢測。所有樣品均檢測到內(nèi)標(biāo)基因Lectin，其中在大豆和豆粕、豆奶粉中用此法可檢測到外源基因CaMV35S、NOS和EPSPS基因片段。 3、采用常規(guī)PCR技術(shù)在深加工產(chǎn)品色拉油、醬油樣品中未檢測出外源基因CaMV35S啟動子和NOS終止子，故利用巢式PCR技術(shù)，設(shè)計兩對引物，成功擴增出CaMV35S啟動子的大小兩段基因片段

4、，分別為195bp和117bp。本研究建立的常規(guī)PCR方法檢測的相對靈敏度可達(dá)到0.1％，完全滿足國際檢測的需求。 4、利用TaqManR探針法熒光定量PCR技術(shù)對轉(zhuǎn)基因大豆及豆粕進(jìn)行熒光定量PCR檢測技術(shù)的研究，從內(nèi)源Lectin基因的擴增情況表明TaqManR探針法熒光定量PCR技術(shù)重現(xiàn)性和靈敏度良好。 在此基礎(chǔ)上，對大豆和豆粕的CaMV35S啟動子和EPSPS基因分別進(jìn)行了定量檢測。結(jié)果表明在對轉(zhuǎn)基因大豆的檢測中，