轉(zhuǎn)基因大豆及其加工產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、自1983年首例轉(zhuǎn)基因作物(geneticallymodifiedcrops，GMCs)問(wèn)世以來(lái)，其生物安全性(biosafety)問(wèn)題便受到了廣泛爭(zhēng)論。同時(shí)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的GMOs(geneticallymodifiedorganisms)成為商品進(jìn)入市場(chǎng)。由于其生物安全性，對(duì)GMOs的檢測(cè)和對(duì)GMOs特性的敘述又引起了更多的關(guān)注?！　CR檢測(cè)方法在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品材料上被證明具有特異性和靈敏性，例如對(duì)roundup

2、readysoybean，RR大豆的檢測(cè)。本研究將PCR技術(shù)用于轉(zhuǎn)基因大豆及其加工產(chǎn)品的檢測(cè)，建立了定性PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆及其加工產(chǎn)品的方法，利用市場(chǎng)上購(gòu)買的樣品，進(jìn)行了實(shí)際檢測(cè)工作?！　榱舜_保能從大豆原材料和加工食品(初加工和深加工食品)中提取到高質(zhì)量的模板DNA，降低PCR反應(yīng)中的抑制物(例如加工食品中的可可粉成分)，本實(shí)驗(yàn)用改良的CTAB、SDS和試劑盒三種提取方法，并比較了它們之間的差異，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：油脂類豆制品和發(fā)酵豆

3、制品采用改良的SDS法提取基因組DNA較好，蛋白類豆制品采用改良的CTAB法提取基因組DNA較好，非發(fā)酵豆制品三種方法都可以，并以大豆特異性內(nèi)源基因-大豆凝集素基因(lectin)為參照，對(duì)獲得的DNA的可擴(kuò)增性加以驗(yàn)證。　　本研究建立了轉(zhuǎn)基因大豆及其加工產(chǎn)品常用的調(diào)控基因CaMV35S啟動(dòng)子、NOS終止子和目的基因CP4-EPSPS及其相互交叉基因序列的PCR檢測(cè)技術(shù)，對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)一步用酶切和測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。針對(duì)41種樣品材料進(jìn)行檢

4、測(cè)。研究結(jié)果表明：本試驗(yàn)中PCR法的豆粕轉(zhuǎn)基因檢測(cè)檢出下限為：重量稀釋法分析轉(zhuǎn)基因最低檢測(cè)限為0.5％(w/w)。該實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)易，效率高，適用于對(duì)大豆及其加工產(chǎn)品的檢測(cè)?！　「鶕?jù)目前外源基因旁側(cè)序列對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的安全性是否有影響還不確定，利用反向PCR(invertedPCR，IPCR)方法，測(cè)定并分析了轉(zhuǎn)基因豆粕(roundupreadysoybean)中外源基因的旁側(cè)序列，該研究為今后對(duì)GMOs的生物安全性的進(jìn)一步研究奠定了基