豬MKK6、AKT2基因的克隆、SNP檢測及與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、傳統(tǒng)的育種與分子育種相結(jié)合已經(jīng)成為現(xiàn)在家畜育種的主要方法之一。尋找與重要經(jīng)濟性狀相關(guān)的主效基因和分子標(biāo)記是進行分子育種的基礎(chǔ)。根據(jù)肌肉發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，生理生化知識，和人、鼠等生物種已經(jīng)取得的研究結(jié)果，選取了MKK6和AKT2基因作為影響豬肌肉品質(zhì)性狀的候選基因。利用比較基因組和電子克隆的方法，分離鑒定了豬MKK6和AKT2基因。利用半定量RT-PCR方法對目的基因進行了組織表達譜的研究；利用直接測序法對所分離的片段進行多態(tài)性分析；并在大梅

2、F2資源家系中進行了性狀關(guān)聯(lián)分析。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1．MKK6基因。
　　 （1）獲得了豬MKK6基因獲得了包括CDS在內(nèi)1516bp的cDNA序列。ORF為1005bp，編碼334個氨基酸。與人91％同源與小鼠90％同源。獲得了第3、8內(nèi)含子序列。
　　 （2）對所獲得的序列進行了多態(tài)性檢測，建立了MKK6基因第8內(nèi)含子667bp處的PCR-FspBI-RFLP分型技術(shù)。
　　 （

3、3）遺傳標(biāo)記與重要經(jīng)濟性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明該位點的不同基因型組合間的肥肉率、瘦肉率、瘦肥肉比例、眼肌面積存在顯著差異。AA基因型的肥肉率顯著高于AB基因型（p<0.05）。AA基因型的瘦肉率極顯著低于BB基因型（p<0.01）。從基因型的瘦肥肉比例顯著低于BB基因型（p<0.05）。AA基因型的眼肌面積顯著低于BB基因型（p<0.05）。
　　 （4）通過半定量RT-PCR的方法分析了MKK6基因在四月齡梅山的肝臟、子宮、卵巢

4、、肺、胃、心、小腸、腎臟、脂肪、脾、肌肉等十一個組織中的表達情況。MKK6基因在肌肉中表達量最高，在心臟和腎中也有表達，在其余組織中均不表達。
　　 2．AKT2基因。
　　 （1）獲得了豬AKT2基因獲得了包括CDS在內(nèi)1589bp的cDNA序列。ORF為1344bp，編碼447個氨基酸，CDS序列與人93％同源，與鼠92％同源。獲得了第5、7內(nèi)含子序列。
　　 （2）對所獲得的序列進行了多態(tài)性檢測，建立了AK

5、T2基因第10內(nèi)含子348bp處的PCR-Sacl-RFLP分型技術(shù)。
　　 （3）遺傳標(biāo)記與重要經(jīng)濟性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明位點的不同基因型組合間的肩部最厚處膘厚，肌肉PH值（BF），系水率（LD），水分（LD）存在顯著差異。從基因型肩部最厚處膘厚顯著低于BB基因型（p<0.05）。AB基因型的肌肉PH值（BF）顯著高于BB基因型（p<0.05）。AA基因型的系水率（LD）顯著高于AB基因型（p<0.05）。AB基因型的水分（L