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文檔簡(jiǎn)介
1、傳統(tǒng)的育種與分子育種相結(jié)合已經(jīng)成為現(xiàn)在家畜育種的主要方法之一。尋找與重要經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的主效基因和分子標(biāo)記是進(jìn)行分子育種的基礎(chǔ)。根據(jù)肌肉發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò),生理生化知識(shí),和人、鼠等生物種已經(jīng)取得的研究結(jié)果,選取了MKK6和AKT2基因作為影響豬肌肉品質(zhì)性狀的候選基因。利用比較基因組和電子克隆的方法,分離鑒定了豬MKK6和AKT2基因。利用半定量RT-PCR方法對(duì)目的基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜的研究;利用直接測(cè)序法對(duì)所分離的片段進(jìn)行多態(tài)性分析;并在大梅
2、F2資源家系中進(jìn)行了性狀關(guān)聯(lián)分析。
研究結(jié)果如下:
1.MKK6基因。
(1)獲得了豬MKK6基因獲得了包括CDS在內(nèi)1516bp的cDNA序列。ORF為1005bp,編碼334個(gè)氨基酸。與人91%同源與小鼠90%同源。獲得了第3、8內(nèi)含子序列。
(2)對(duì)所獲得的序列進(jìn)行了多態(tài)性檢測(cè),建立了MKK6基因第8內(nèi)含子667bp處的PCR-FspBI-RFLP分型技術(shù)。
(
3、3)遺傳標(biāo)記與重要經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明該位點(diǎn)的不同基因型組合間的肥肉率、瘦肉率、瘦肥肉比例、眼肌面積存在顯著差異。AA基因型的肥肉率顯著高于AB基因型(p<0.05)。AA基因型的瘦肉率極顯著低于BB基因型(p<0.01)。從基因型的瘦肥肉比例顯著低于BB基因型(p<0.05)。AA基因型的眼肌面積顯著低于BB基因型(p<0.05)。
(4)通過(guò)半定量RT-PCR的方法分析了MKK6基因在四月齡梅山的肝臟、子宮、卵巢
4、、肺、胃、心、小腸、腎臟、脂肪、脾、肌肉等十一個(gè)組織中的表達(dá)情況。MKK6基因在肌肉中表達(dá)量最高,在心臟和腎中也有表達(dá),在其余組織中均不表達(dá)。
2.AKT2基因。
(1)獲得了豬AKT2基因獲得了包括CDS在內(nèi)1589bp的cDNA序列。ORF為1344bp,編碼447個(gè)氨基酸,CDS序列與人93%同源,與鼠92%同源。獲得了第5、7內(nèi)含子序列。
(2)對(duì)所獲得的序列進(jìn)行了多態(tài)性檢測(cè),建立了AK
5、T2基因第10內(nèi)含子348bp處的PCR-Sacl-RFLP分型技術(shù)。
(3)遺傳標(biāo)記與重要經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明位點(diǎn)的不同基因型組合間的肩部最厚處膘厚,肌肉PH值(BF),系水率(LD),水分(LD)存在顯著差異。從基因型肩部最厚處膘厚顯著低于BB基因型(p<0.05)。AB基因型的肌肉PH值(BF)顯著高于BB基因型(p<0.05)。AA基因型的系水率(LD)顯著高于AB基因型(p<0.05)。AB基因型的水分(L
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