小麥Wx基因分子標(biāo)記研究及其應(yīng)用.pdf

1、顆粒結(jié)合型淀粉合成酶(GBSS)，也稱Wx蛋白，是直連淀粉合成的關(guān)鍵酶。普通小麥(Triticum aestivum L.，AABBDD)有3個(gè)Wx蛋白亞基Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1，分別由Wx-A1、Wx-B1和Wx-D13個(gè)基因編碼。目前，積極開發(fā)簡便、實(shí)用和可靠的Wx基因分子標(biāo)記，使之成為糯麥選育的更加有效的輔助手段，是糯麥研究的重要內(nèi)容。本研究的主要結(jié)果如下： 1、本研究利用10種已知Wx蛋白亞基基因型組成的小麥

2、材料，對已開發(fā)的12對Wx基因引物的有效性進(jìn)行了驗(yàn)證。在篩選出的10對引物中，有3對引物(＃1、＃2、＃3)是Wx-A1位點(diǎn)的共顯性標(biāo)記；3對引物(＃5、＃6、＃7)是Wx-B1位點(diǎn)的顯性標(biāo)記；2對引物(＃9、＃11)是Wx-D1位點(diǎn)的共顯性標(biāo)記，1對引物(＃10)是Wx-D1位點(diǎn)的顯性標(biāo)記：1對引物(＃12)是Wx-A1位點(diǎn)的共顯性標(biāo)記，同時(shí)也是Wx-D1位點(diǎn)的顯性標(biāo)記。這一結(jié)果表明，大部分引物對于Wx基因的鑒定都是有效的。

3、2、選用＃5和＃122對引物，對黃淮麥區(qū)的54個(gè)小麥品種進(jìn)行了鑒定，并在蛋白(1D-SDS-PAGE)水平上進(jìn)行了驗(yàn)證，新發(fā)現(xiàn)了1份缺失Wx-A1亞基的材料(百農(nóng)3217)；2份缺失Wx-B1亞基的材料(綿陽33、邯鄲6172)。用＃5引物在新麥9號中擴(kuò)增出854 bp的特異條帶，檢測出Wx-B1基因，但卻未檢測出相應(yīng)的蛋白亞基，可能是因?yàn)閃x-B1基因沒有表達(dá)的原因。 3、用引物＃5和＃12，對矮抗58×糯麥1902的F2代7

4、3個(gè)單株進(jìn)行了檢測，得到了全部8種Wx基因型：野生型A B D56株；單缺型aaB D3株(編號分別為5、33、71)、A bbD6株(編號分別為6、25、37、44、61、64)、A_B_dd2株(編號分別為7、45)；雙缺型A_bbdd2株(編號分別為49、73)、aaB dd1株(編號為39)、aabbD1株(編號為11)；全糯型aabbdd1株(編號為56)。其中A_bbdd、aaB_dd和aabbdd3種類型在自然界中不存在。

5、理論上F2植株中，應(yīng)有大約10株分別缺失Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1亞基，3株同時(shí)缺失兩個(gè)亞基，1株全部缺失3個(gè)亞基。結(jié)果表明，2個(gè)或3個(gè)亞基的同時(shí)缺失接近理論值，而單個(gè)亞基的缺失低于理論值。 4、建立了一個(gè)可以一次反應(yīng)能夠同時(shí)鑒定Wx-A1、Wx-D1和Wx-B1基因的多重PCR反應(yīng)體系?？稍谛←淲x-A1、Wx-B1和Wx-D13個(gè)基因中分別擴(kuò)增出230 bp/265 bp、854bp和20.bp大小的目的片段。經(jīng)反復(fù)