小麥白粉菌交配型和白化性狀的分子標(biāo)記及其與小麥互作基因初步研究.pdf

1、對(duì)影響RAPD擴(kuò)增圖譜的5個(gè)因子:Primer濃度、模板濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量和Mg<'2+>濃度設(shè)計(jì)了5個(gè)水平,再通過(guò)正交分析表組建了25個(gè)反應(yīng)體系,然后根據(jù)可辨識(shí)的電泳條帶進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)表中各組結(jié)果的統(tǒng)計(jì),建立起小麥白粉病菌的RAPD分析優(yōu)化體系.結(jié)果表明:在試驗(yàn)范圍內(nèi),5個(gè)因子中對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的影響由大到小依次為Primer濃度、模板濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量和Mg<'2+>濃度.在反應(yīng)體系中,各項(xiàng)因子最適濃度為:引

2、物濃度2.0μmol/L,模板濃度5ng,dNTPs濃度0.1 mmol/L、Taq酶用量1.5U,Mg<'2+>濃度2.0mmol/L.在所得的RAPD優(yōu)化體系的基礎(chǔ)上,采用集群分析法(BSA),分別對(duì)小麥白粉菌交配型和白化性狀進(jìn)行了多態(tài)性分析.結(jié)果表明,在520條隨機(jī)引物中有478條單引物能擴(kuò)增出條帶,占擴(kuò)增引物總數(shù)的92﹪,擴(kuò)增片段在300-2000bp之間.對(duì)交配型性狀,有24個(gè)引物或引物組合在DNA池中擴(kuò)出多態(tài)性條帶;對(duì)白化性

3、狀,有15個(gè)引物擴(kuò)出多態(tài)性條帶,但只有兩個(gè)RAPD標(biāo)記,OPQ03<,775>和OPQ09<,685>可能分別與交配型和白化性狀相關(guān).將這兩個(gè)RAPD標(biāo)記片段克隆,序列分析顯示:這兩段序列與目前已知的任何序列都沒(méi)有同源性,且只有OPQ03<,775>有較長(zhǎng)的開(kāi)放式閱讀框架.根據(jù)克隆片段末端序列設(shè)計(jì)引物,成功的將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為更為穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記.標(biāo)記OPQ03<,775>能在7個(gè)已知交配型菌株中擴(kuò)增出特異性條帶,在由34個(gè)野生菌組

4、成的菌群中的出現(xiàn)與否符合1:1的比例,跟交配型分布的理論值一致;標(biāo)記OPQ09<,685>在白化和正常菌株的43個(gè)雜交后代中與白化性狀的交換率是25.6﹪,經(jīng)軟件MAP AKER3.0計(jì)算,遺傳距離為15.2cM,表明該標(biāo)記與白化性狀有一定的連鎖性.從大麥白粉菌已克隆的174個(gè)基因中調(diào)出20個(gè)與大麥互作的基因,并從中選取了4個(gè)基因:BIG2,大麥誘導(dǎo)表達(dá)基因,在侵染初期起調(diào)控作用;Cat1,過(guò)氧化氫酶基因;CLg,與大麥白粉菌的毒力,侵