產(chǎn)幾丁質(zhì)酶卵寄生真菌存厚垣普奇尼亞菌(Pochonia chlamydosporia)對(duì)根結(jié)線蟲生防潛力的研究.pdf

1、根結(jié)線蟲（Meloidogynespp.）是世界性分布的威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要病原物之一。該病害嚴(yán)重威脅我國(guó)保護(hù)地蔬菜和果樹的生產(chǎn)?；瘜W(xué)殺線劑給環(huán)境乖農(nóng)產(chǎn)品帶來安全隱患，而利用天敵真菌防治植物線蟲病害的生防措施成為替代措施之一。
　　 本研究對(duì)從7株不同來源的根結(jié)線蟲卵寄生真菌—厚垣普奇尼亞菌進(jìn)行了生物學(xué)和生化特性及其對(duì)南方根結(jié)線蟲的生防潛力的研究。
　　 1采用玻片和平板菌落培養(yǎng)的方法，對(duì)7株不同來源的卵寄生真菌—厚垣普奇

2、尼亞菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察和比較。結(jié)果表明，不同菌株在形態(tài)和培養(yǎng)性狀上存在明顯差異。各菌株在CMA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率不同，CFCC80919生長(zhǎng)最快，氣生菌絲發(fā)達(dá);CFCC80919和CFCC84964菌落背面乳白色;QNAV97-5分生孢子梗細(xì)長(zhǎng)。7個(gè)菌株均能夠產(chǎn)生菌絲膨大和厚垣孢子，其中QNAV97-6和CFCC84963厚垣孢子著生方式除間生外還有側(cè)生，NRRL13094厚垣孢子大量間生成串，CFCC84964和CFCC84963厚垣

3、孢子稀少。QNAV97-2、QNAV97-5、CFCC84963、NRRL13094和CFCC80919能產(chǎn)生晶體。
　　 2厚垣普奇尼亞菌各菌株在玉米粉液體培養(yǎng)基內(nèi)產(chǎn)生厚垣孢子的能力不同，菌株CFCC84964產(chǎn)厚垣孢子能力最強(qiáng)，菌株CFCC84963產(chǎn)厚垣孢子能力最弱。在第2d，7個(gè)菌株都沒有產(chǎn)生厚垣孢子;第4d厚垣孢子的產(chǎn)生出現(xiàn)差異，菌株QNAV97-2、QNAV97-6、CFCC84964和CFCC80919開始有厚垣孢

4、子產(chǎn)生;第20d，菌株CFCC84964厚垣孢子可達(dá)到106.65×104個(gè)/mL，菌株CFCC84963厚垣孢子僅有29.12×104個(gè)/mL。
　　 37株厚垣普奇尼亞菌在含有0.2％膠體幾丁質(zhì)(colloidalchitin)為主要C源和N源的半液體培養(yǎng)基內(nèi)，他們的培養(yǎng)濾液存在明顯差異。其中QNAV97-5、QNAV97-6和CFCC84963培養(yǎng)濾液未測(cè)定出幾丁質(zhì)降解酶活性。具有幾丁質(zhì)降解酶系的4個(gè)菌株從第2d開始測(cè)定出

5、活性，CFCC80919酶活性上升迅速，第12d就達(dá)到酶活性高峰值10.99μmol/hmL，隨后緩慢下降;而QNAV97-2和CFCC84964第24d達(dá)到酶活性高峰，分別為21.39μmol/hmL和17.30μmol/hmL，至32d仍保持高峰活性水平;NRRL13094第28d達(dá)到酶活性高峰值15.79μmol/hmL，隨后略有下降。
　　 47株厚垣普奇尼亞菌從第2d開始均能產(chǎn)生幾丁質(zhì)外切酶（N-acetyl-β-D-

6、glucosaminidase）。其中CFCC80919、CFCC84964培養(yǎng)濾液第6d達(dá)到酶活性高峰，至32d一直保持高水平活性，穩(wěn)定在0.21-0.23μmol/hmL之間;而QNAV97-2培養(yǎng)濾液酶活性第4d快速上升至0.13μmol/hmL，隨后下降，20d后又明顯上升，第28d達(dá)到高峰值0.20μmol/hmL;NRRL13094培養(yǎng)濾液酶活性第14d達(dá)到高峰值0.09μmol/hmL，隨后下降。在未測(cè)定出幾丁質(zhì)降解酶系的

7、3株厚垣普奇尼亞菌中，QNAV97-6和CFCC84963培養(yǎng)濾液幾丁質(zhì)外切酶活性較高，第6d達(dá)高峰值，分別為0.21μmol/hmL和0.17μmol/hmL;QNAV97-5酶活性緩慢上升，至30d達(dá)高峰值0.13μmol/hmL。
　　 5應(yīng)用含0.01％糖基化幾丁質(zhì)的改良SDS-PAGE電泳檢測(cè)厚垣普奇尼亞菌具幾丁質(zhì)酶活性的蛋白譜帶，并估算他們產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶的分子量。CFCC84964有4條幾丁質(zhì)酶活性譜帶，分子量分別為

8、17kDa、19.1kDa、22.9kDa和26.3kDa;CFCC80919有2條幾丁質(zhì)酶活性譜帶，分子量分別為27.5kDa和38.9kDa;QNAV97-2有2條幾丁質(zhì)酶活性譜帶，分子量分別為39.8kDa和50.1kDa;NRRL13094有2條幾丁質(zhì)酶活性譜帶，分子量分別為81.3kDa和97.7kDa。厚垣普奇尼亞菌具有較高產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的活性，其產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶可以引起根結(jié)線蟲卵殼的裂解，抑制根結(jié)線蟲卵的孵化。
　　

9、6厚垣普奇尼亞菌7個(gè)菌株的幾丁質(zhì)酶培養(yǎng)濾液對(duì)根結(jié)線蟲卵孵化具有不同程度的抑制作用。28℃下培養(yǎng)，7個(gè)菌株的培養(yǎng)濾液在濃度遞增的情況下，對(duì)根結(jié)線蟲的卵孵化抑制率隨時(shí)間的增加而遞增。其中培養(yǎng)7d，25％濃度的培養(yǎng)濾液對(duì)根結(jié)線蟲的卵孵化抑制率最大。比較25％濃度下各菌株對(duì)根結(jié)線蟲卵孵化的抑制率可知，菌株QNAV97-2對(duì)根結(jié)線蟲卵孵化的抑制率最高，7d可達(dá)到55.15％;菌株CFCC84963對(duì)根結(jié)線蟲卵孵化的抑制率最低，7d達(dá)到12.14％

10、。
　　 7對(duì)測(cè)定出幾丁質(zhì)降解酶活性的4個(gè)厚垣普奇尼亞菌培養(yǎng)2周后，在2％水瓊脂培養(yǎng)基上直接測(cè)定菌絲對(duì)根結(jié)線蟲卵和雌蟲的寄生情況。QNAV97-2、NRRL13094、CFCC84964和CFCC80919都可以寄生根結(jié)線蟲的卵和雌蟲，卵寄生率分別為55.62％、57.13％、47.87％和52.75％;雌蟲寄生率分別為85％、90％、80％和95％。菌絲對(duì)卵和雌蟲的寄生程度有差異。
　　 綜上所述，厚垣普奇尼亞菌QNA