煙草根結(jié)線蟲生防菌株的篩選及活性菌株的初步研究.pdf

1、本文以煙草根結(jié)線蟲為靶標(biāo)，通過系統(tǒng)篩選，獲得了其代謝產(chǎn)物具有高殺線蟲活性的菌株snf0407009。對(duì)菌株snf0407009的生物學(xué)特性、發(fā)酵條件及其代謝物中活性物質(zhì)的殺線蟲活性和抗菌譜測定、分離純化工藝、防效和對(duì)植物安全性評(píng)價(jià)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。 從各地采集的土樣中分離到真菌517株，從實(shí)驗(yàn)室保存的菌種中得到捕食線蟲真菌158株。通過初步篩選獲得對(duì)煙草根結(jié)線蟲有活性的菌株30株。經(jīng)搖瓶發(fā)酵復(fù)篩，獲得了其代謝產(chǎn)物對(duì)煙草南方根結(jié)線

2、蟲有較高致死率生防真菌菌株snf0407009。 菌株snf0407009的代謝物對(duì)根結(jié)線蟲、大豆胞囊線蟲、甘薯莖線蟲均有活性，菌株活體和發(fā)酵液對(duì)西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporiumf.sp.niveum)、尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、小麥根腐病菌(Drechslerasorokiniana)、黃瓜黑星病菌(Cladosporiumcuc

3、umerinum)、茄腐鐮刀病菌(Fusariumsolani)、黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)和煙草赤星病菌(Alternariaalternate)均有很好的抑制效果。 經(jīng)分類鑒定該菌株snf0407009為黑曲霉(Aspergillusniger)。生物學(xué)特性研究表明，菌株snf0407009生長在查氏培養(yǎng)基中菌落直徑最大，且在35℃、pH2-8、全光照條件下生長較好，最

4、適碳源為麥芽糖，最適氮源為蛋白胨。菌株snf0407009搖瓶發(fā)酵最佳碳源是麥芽糖，最佳氮源為尿素。其發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基配方為麥芽糖3％、淀粉3％、尿素0.2％、KCl0.04％、K2HPO40.15％、MgSO4·7H2O0.06％、FeSO40.001％。 通過溶媒萃取試驗(yàn)，證明菌株snf0407009發(fā)酵液中的活性成分易溶于正丁醇，采用Doskochilova溶劑系統(tǒng)和pH紙層析和紙電泳初步推斷菌株snf0407009的活性

5、成分為多組分，并且主要活性物質(zhì)為酸性。snf0407009發(fā)酵液經(jīng)5倍無水乙醇沉淀，正丁醇萃取后，再經(jīng)硅膠柱層析和硅膠薄層層析分離，可在薄層板上獲得單個(gè)活性斑點(diǎn)。 溫室盆栽試驗(yàn)表明，菌株snf0407009發(fā)酵液的粗提物對(duì)煙草根結(jié)線蟲有較好的防治效果。濃縮5倍液和1倍液的防治效果與10μg·L-1涕滅威差異不顯著，濃縮5倍液達(dá)到88.1％的防治效果，發(fā)酵液原液也達(dá)到了72.9％的防治效果。對(duì)植物安全性試驗(yàn)研究表明，菌株snf04