煙草根結(jié)線蟲(chóng)生防菌的篩選及其技術(shù)體系的建立.pdf

1、煙草是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，煙草根結(jié)線蟲(chóng)病是世界煙草生產(chǎn)上的重要病害之一。在我國(guó)大部分煙草種植區(qū)均有發(fā)生，且多個(gè)省市危害嚴(yán)重。由于生產(chǎn)上所種植的煙草品種抗性程度不夠，防治上仍然以化學(xué)藥劑為主要防控手段。長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥易導(dǎo)致根結(jié)線蟲(chóng)抗（耐）藥性劇增、環(huán)境污染和煙葉重金屬含量超標(biāo)等影響防治效果、生態(tài)平衡和人類健康等問(wèn)題出現(xiàn)。為此，本文針對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)病生防控制設(shè)計(jì)試驗(yàn)，試驗(yàn)內(nèi)容主要是進(jìn)行了拮抗菌株室內(nèi)篩選及防效測(cè)定，拮抗菌溫室盆栽驗(yàn)證以及拮

2、抗菌株對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)育進(jìn)程影響的初步研究。通過(guò)本研究，從生防菌的初步篩選、拮抗菌對(duì)卵和二齡幼蟲(chóng)的拮抗試驗(yàn)、溫室盆栽控病試驗(yàn)、同時(shí)調(diào)查統(tǒng)計(jì)根結(jié)線蟲(chóng)在植株根內(nèi)發(fā)育進(jìn)程受拮抗菌的影響等幾個(gè)方面，建立一套較為系統(tǒng)、可行的根結(jié)線蟲(chóng)生防菌篩選體系。本研究的主要結(jié)果如下:
　　1、煙草根結(jié)線蟲(chóng)拮抗活性菌株初步篩選
　　分別利用實(shí)驗(yàn)室保存經(jīng)前人研究對(duì)煙草病害具有良好控病作用的的45株菌株進(jìn)行煙草根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)抑殺測(cè)定，得到有拮抗活性的菌

3、株13株，占待測(cè)菌總數(shù)的28.9％;其中真菌3株，細(xì)菌8株，放線菌2株。其中處理二齡幼蟲(chóng)校正死亡率超過(guò)70％的菌株共3株，分別為哈茨木霉菌YZL229(77.0％)，熒光假單胞桿菌P-72-10(74.0％)，枯草芽孢桿菌Itb162(72.3％)，占待測(cè)菌總數(shù)的11.1％。
　　2、拮抗菌YZL229，P-72-10，Itb162對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵和二齡幼蟲(chóng)的拮抗試驗(yàn)
　　通過(guò)初步篩選，分別選取對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)具有良好拮抗作用

4、的哈茨木霉菌YZL229，熒光假單胞桿菌P-72-10，枯草芽孢桿菌Itb162對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵和二齡幼蟲(chóng)進(jìn)行抑殺測(cè)定。結(jié)果表明，三種菌株不同濃度發(fā)酵液上清液均對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)的卵表現(xiàn)出較好的抑制作用。處理120h后，菌株發(fā)酵液對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的抑制作用從大到小為:YZL229＞P-72-10＞ Itb162。其中菌株YZL229發(fā)酵液原液抑制孵化作用最明顯，菌株Itb162發(fā)酵液5倍稀釋液抑制作用最小，但均與對(duì)照呈顯著性差異。同樣，

5、三種菌株不同濃度發(fā)酵液上清液均對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)的二齡幼蟲(chóng)表現(xiàn)出較好的抑制作用。處理48h后，菌株發(fā)酵液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)的抑殺作用從大到小為: YZL229＞P-72-10＞ Itb162。其中菌株YZL229發(fā)酵液原液在處理48h后對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死率高達(dá)94.7％，而菌株Itb162發(fā)酵液5倍稀釋液對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死率為62.3％，均與對(duì)照具顯著性差異。另外，還，針對(duì)菌株YZL229對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵作了寄生測(cè)定。結(jié)果表明，處理7d后菌株Y

6、ZL229對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的寄生率高達(dá)73.4％，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)發(fā)育較成熟的卵具有較高的寄生率，而對(duì)未發(fā)育成熟的卵寄生率較低。
　　3、拮抗菌株對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的溫室盆栽試驗(yàn)
　　選擇拮抗試驗(yàn)中對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)具有良好拮抗作用的哈茨木霉菌YZL229，熒光假單胞桿菌P-72-10，枯草芽孢桿菌Itb162對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行溫室盆栽試驗(yàn)。用灌根法先接種拮抗菌菌懸液14d后，再接種二齡幼蟲(chóng)，接種二齡幼蟲(chóng)60d后對(duì)煙草植株進(jìn)行調(diào)查。

7、試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株YZL229，P-72-10和Itb162均對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)侵染有不同程度的抑制作用。三種拮抗菌均能不同程度的減小寄主植株的GI(egg index)和EMI(egg mass index)，均能不同程度的增加寄主植株的生長(zhǎng)指數(shù)（葉片長(zhǎng)度，根長(zhǎng)，葉面積），均能增加寄主植株的干重和鮮重，同時(shí)也能減少寄主根圍線蟲(chóng)密度和減少煙草根結(jié)線蟲(chóng)的產(chǎn)卵量。其中菌株YZL229具有三者之中最好的拮抗效果，其效果由大到小依次為:YZL229

8、＞P-72-10＞ Itb162，三者均與發(fā)病對(duì)照具有顯著性的差異，均展現(xiàn)了良好的生防潛力。
　　4、熒光假單胞桿菌P-72-10對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)育進(jìn)程的影響
　　選擇經(jīng)前人研究能定殖于煙草根表且對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)具有良好拮抗作用的熒光假單胞桿菌P-72-10菌株進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，分別于接種二齡幼蟲(chóng)后二齡幼蟲(chóng)侵染和不同時(shí)間段不同齡期對(duì)線蟲(chóng)發(fā)育進(jìn)程進(jìn)行調(diào)查，以直觀的說(shuō)明拮抗菌株P(guān)-72-10對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)育進(jìn)程的影響，從而驗(yàn)證其生防

9、潛力。試驗(yàn)結(jié)果表明，接種二齡幼蟲(chóng)后第2d，4d，6d，8d，10d二齡幼蟲(chóng)侵染煙草植株數(shù)量逐漸增大，但經(jīng)菌株P(guān)-72-10處理過(guò)的侵染率除第4d外均顯著低于對(duì)照。接種后第10d對(duì)侵染的煙株進(jìn)行移栽，在接種二齡幼蟲(chóng)第14d，21d，28d和35d對(duì)煙草植株根系內(nèi)線蟲(chóng)進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)。結(jié)果表明，經(jīng)菌株P(guān)-72-10處理的煙株根系內(nèi)的根結(jié)線蟲(chóng)與對(duì)照相比其發(fā)育進(jìn)程受到了顯著的抑制和延緩，這表明拮抗菌P-72-10能在整個(gè)根結(jié)線蟲(chóng)生活史時(shí)段中有效的抑

10、制根結(jié)線蟲(chóng)的發(fā)育進(jìn)程和繁殖，具有良好的生防潛力。
　　5、建立一套較為系統(tǒng)、可行的煙草根結(jié)線蟲(chóng)生防菌篩選技術(shù)體系
　　本研究利用初步篩選出的三株菌株從其對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵和二齡幼蟲(chóng)的抑制試驗(yàn)、溫室控病試驗(yàn)，對(duì)侵染煙株不同發(fā)育進(jìn)程根結(jié)線蟲(chóng)的影響三個(gè)不同角度充分驗(yàn)證了三種拮抗菌株對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)的生防潛力，建立起一套較系統(tǒng)、可行的煙草根結(jié)線蟲(chóng)生防菌篩選技術(shù)體系。在對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)卵和二齡幼蟲(chóng)的抑制試驗(yàn)中，針對(duì)可能對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵和二齡幼蟲(chóng)

11、具有寄生能力的真菌菌株進(jìn)行了卵和二齡幼蟲(chóng)的寄生測(cè)定，同時(shí)利用三株拮抗菌株不同濃度發(fā)酵液上清液分別對(duì)卵進(jìn)行孵化抑制試驗(yàn)和對(duì)二齡幼蟲(chóng)進(jìn)行抑殺試驗(yàn)，同時(shí)觀察統(tǒng)計(jì)二齡幼蟲(chóng)在不同濃度發(fā)酵液上清液中的行為特征，充分驗(yàn)證三株拮抗菌株的抑制效果;在溫室盆栽控病試驗(yàn)中，利用三株菌株菌懸液對(duì)煙株進(jìn)行灌根處理，調(diào)查其根結(jié)指數(shù)(GI)和卵塊指數(shù)(EMI)及單位土壤中線蟲(chóng)數(shù)量，并從煙株的生長(zhǎng)指數(shù)等方面充分說(shuō)明菌株的控病能力;在進(jìn)行三株菌株對(duì)侵染煙株后不同發(fā)育進(jìn)程