利用黃瓜幼苗內(nèi)生真菌種子處理防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的研究.pdf

1、黃瓜(Cucumis sativus L.)是世界范圍內(nèi)廣泛種植的蔬菜，其生產(chǎn)常常受到根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne spp.)的危害。為了提高產(chǎn)量，化學(xué)殺線劑被應(yīng)用到生產(chǎn)中，但化學(xué)殺線劑往往使用成本高、毒性強(qiáng)，并且破壞土壤環(huán)境，因此有必要積極尋求其替代防治措施。內(nèi)生真菌是一類對(duì)植物有保護(hù)作用的有益真菌，近年來(lái)開(kāi)發(fā)利用內(nèi)生真菌防治植物線蟲(chóng)稱為了研究熱點(diǎn)之一。根結(jié)線蟲(chóng)是土傳病原，為了讓內(nèi)生真菌從作物生長(zhǎng)的早期階段即開(kāi)始保護(hù)其免受根結(jié)線蟲(chóng)

2、的危害，并盡量減少使用劑量，種子處理被認(rèn)為是一種適宜的施用方法。但迄今為止相關(guān)研究還較少。本論文對(duì)利用黃瓜內(nèi)生真菌種子處理防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的可行性進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　　 1.分離了來(lái)自熱帶、亞熱帶和溫帶的514個(gè)黃瓜幼苗內(nèi)生真菌菌株，這些菌株分布在枝頂霉屬(Acremonium spp.)、放射毛霉屬(Actinomucor spp.)、曲霉屬(Aspergillus spp.)、短梗霉屬(Aureobasidium

3、spp.)、黑霉屬(Cercospora spp.)、毛殼菌屬(Chaetomium spp.)、瓜枝孢屬(Cladosporium spp.)、炭疽菌屬(Colletotrichum spp.)、彎孢菌屬(Curvularia spp.)、鐮刀菌屬(Fusarium spp.)、黑腐質(zhì)霉屬(Humicola spp.)、擬青霉屬(Paecilomyces spp.)、青霉屬(Penicillium spp.)、葉點(diǎn)霉屬(Phyllos

4、ticta spp.)、殼多孢屬(Stagonospora spp.)、毛霉屬(Trichoderma spp.)等16個(gè)屬及其他未知的屬中，其中鐮刀菌屬菌株分離頻率最高。篩選了其中在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)及產(chǎn)孢良好的294個(gè)菌株在溫室中對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的控制效果，其中23個(gè)菌株顯著降低了根結(jié)形成數(shù)，占總篩選菌株數(shù)的7.9％。對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)抑制效果最好的10個(gè)菌株分別為鐮刀菌Fu7、Fu9、Fu546、Fu234、Fu654、葉點(diǎn)霉Ph511

5、、毛殼菌Ch1001、毛霉菌Tr882、擬青霉菌號(hào)Pa972、枝頂孢Ac985。他們作為種子處理對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的控制效果在24.0％到58.4％之間。重復(fù)測(cè)定了10菌株的防治效果，重復(fù)測(cè)定防治效果在15.6％和44.3％之間，在兩次測(cè)驗(yàn)中，F(xiàn)u234、Ch1001和Pa972表現(xiàn)出了最高的控制效果。測(cè)定首次發(fā)現(xiàn)了葉點(diǎn)霉屬真菌菌株對(duì)植物線蟲(chóng)一定程度的控制作用。
　　 2.10個(gè)菌株對(duì)黃瓜幼苗的生長(zhǎng)均沒(méi)有負(fù)面影響，說(shuō)明他們不是幼苗致

6、病菌株。其中Ac985和Fu546對(duì)幼苗的生長(zhǎng)有顯著促進(jìn)作用。定植實(shí)驗(yàn)表明，5個(gè)鐮刀菌傾向于定植根部，它們?cè)诟康亩ㄖ猜试?0.1％到44.0％之間，毛霉Tr882、擬青霉Pa972及枝頂霉Ac985在地上部和地下部的定植均較低。葉點(diǎn)霉Ph511和毛殼菌在根部和地上部均能較好定植，Ch1001定植能力最強(qiáng)，其在根部和地上部的定植率分別為70.5％和73.5％。
　　 3.Ch1001、Pa972、Ac985菌株的培養(yǎng)濾液對(duì)南方根

7、結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)(J2)有致死作用，Ph511菌株的培養(yǎng)濾液對(duì)J2有麻痹效果。Tr882、Pa972、Ac985、Ph511及Ch1001菌株的培養(yǎng)濾液對(duì)J2有趨避作用。Fu234、Ch1001、Fu654、Fu9和Ac985培養(yǎng)濾液顯著降低了卵孵化率和生活力。J2與Fu234、Fu654、Pa972、Ph511及Ch1001的菌絲后活動(dòng)性降低，而Pa972、Ch1001、Fu234、Fu654及Fu9的菌絲能寄生根結(jié)線蟲(chóng)的卵。
　

8、　 4.用黃瓜裂根系統(tǒng)(split root system)研究了10菌株誘導(dǎo)黃瓜幼苗產(chǎn)生根結(jié)線蟲(chóng)抗性的能力。鐮刀菌Fu234、Fu654、毛殼菌Ch1001以及葉點(diǎn)霉Ph511在挑戰(zhàn)根系中接種后應(yīng)答根系中的線蟲(chóng)入侵分別減少了42.4％、35.7％、38.4％及23.6％；10菌株挑戰(zhàn)接種對(duì)應(yīng)答根系中根結(jié)線蟲(chóng)的發(fā)育均沒(méi)有影響；Ch1001、Fu234、Pa972挑戰(zhàn)接種后，應(yīng)答根系中的雌蟲(chóng)的平均產(chǎn)卵數(shù)顯著性降低。
　　 5.根

9、據(jù)菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)在溫室盆缽中的控制效果、對(duì)黃瓜生長(zhǎng)影響、定植能力、對(duì)二齡幼蟲(chóng)和卵的離體作用及誘導(dǎo)抗性測(cè)定結(jié)果等，分離白海南的毛殼菌Ch1001被認(rèn)為是很有潛力用于黃瓜種子處理防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的菌株。結(jié)合菌株的形態(tài)學(xué)和rDNA-ITS片段特征，鑒定菌株Ch1001為球毛殼菌(C.globosum Kunze)。
　　 6.從Ch1001培養(yǎng)濾液中用乙酸乙酯提取到了一種褐色的疑似為毛殼菌素的純物質(zhì)，但生物測(cè)定結(jié)果表明該物質(zhì)不是毒殺J

10、2的化合物。毒殺J2的化合物可能是一種具揮發(fā)性的有機(jī)酸。從Ch1001培養(yǎng)濾液中檢測(cè)到了幾丁質(zhì)酶活性，膠體幾丁質(zhì)能提高ch1001幾丁質(zhì)酶產(chǎn)量，培養(yǎng)濾液的幾丁質(zhì)酶活性與卵孵化抑制率呈正相關(guān)性。
　　 7.1×107孢子以下劑量處理黃瓜種子不會(huì)降低幼苗根系活力，是ch1001種子處理的安全劑量。Ch1001對(duì)幼苗苯丙氨酸解氨酶和幾丁質(zhì)酶的活性沒(méi)有影響。1×105到1×107之間的孢子劑量處理種子，幼苗的過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶活性顯

11、著增強(qiáng)。Ch1001孢子劑量從1×104到1×108均顯著性降低了根結(jié)線蟲(chóng)的入侵。1×106到1×107孢子是達(dá)到根結(jié)線蟲(chóng)最高防效的Ch1001種子處理劑量。
　　 8.黃瓜根系分泌物對(duì)J2的活動(dòng)有趨向性，根邊緣細(xì)胞對(duì)J2的活動(dòng)沒(méi)有趨向性，Ch1001處理后根系分泌物和根邊緣細(xì)胞對(duì)J2的活動(dòng)沒(méi)有影響；黃瓜根系分泌物促進(jìn)卵孵化，根邊緣細(xì)胞不能促進(jìn)卵孵化，Ch1001處理后在根系分泌物和根邊緣細(xì)胞中卵的孵化也沒(méi)有影響；在Ch1001