寄生于南方根結(jié)線蟲卵的長梗木霉幾丁質(zhì)酶基因TlChi46的克隆.pdf

1、植物病原線蟲造成的土傳植物病害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了相當(dāng)大的經(jīng)濟損失。根結(jié)線蟲病害頻繁為害世界范圍的蔬菜生產(chǎn)，尤其是我國保護地最常出現(xiàn)的土傳植物病害?；瘜W(xué)殺線劑已被廣泛的用于線蟲病害的治理，但化學(xué)殺線劑對土壤環(huán)境和人類健康的高毒性，已使得如溴甲烷等殺線劑已經(jīng)或即將限制其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。采用生防真菌防治線蟲的生物防治方法符合可持續(xù)治理的觀念，正發(fā)展成為治理根結(jié)線蟲的不可或缺的方法。
　　為進一步篩選高效寄生線蟲真菌和闡明其寄生線蟲卵的

2、機理，本研究從湖北省煙草南方根結(jié)線蟲卵分離到1株具高效生防潛力的菌株HBF1。形態(tài)學(xué)、rDNA-ITS和翻譯延長因子tef1-α序列分析鑒定該菌為長梗木霉菌Trichoderma longibrachiatum，該菌是1株可以產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的南方根結(jié)線蟲卵寄生真菌，其對南方根結(jié)線蟲卵第10天寄生率為80.45％。分別采用NAG（N-乙酰葡聚糖胺）和pNP（對硝基苯酚）制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線測定HBF1菌株分泌的幾丁質(zhì)降解酶系和外切幾丁質(zhì)酶的活性，

3、這兩者幾丁質(zhì)酶的活性在接種后的第10天分別達(dá)到最大為30.12和24.88μmol/h/mL。
　　為明確具體功能基因在長梗木霉菌株防治根結(jié)線蟲病害中的重要作用，本文通過簡并引物設(shè)計和RACE技術(shù)克隆其幾丁質(zhì)酶基因，分析該基因序列及與其他幾丁質(zhì)酶的同源性。本研究首次從長梗木霉HBF1菌中克隆到1個幾丁質(zhì)酶基因TlChi46，該基因DNA全長1793bp，含3個內(nèi)含子和1個1272bp的開放閱讀框，編碼423個氨基酸，理論分子量45