豬瘟C株單克隆抗體制備和豬瘟膠體金快速診斷試紙條的研制.pdf

1、豬瘟（ClassicalSwineFever，CSF），是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的最重要的一種高度接觸性烈性傳染病之一。多年來一直是我國豬病防治研究的首要對象之一。世界許多國家雖然采取了許多措施較好地控制了豬瘟的大規(guī)模爆發(fā)流行，但自上世紀(jì)70年代末以來豬瘟的流行與發(fā)病特點(diǎn)發(fā)生了很大的變化，近年來我國豬瘟的發(fā)生又呈上升趨勢，臨床表現(xiàn)更為復(fù)雜，而且免疫豬群發(fā)生豬瘟越來越多。 本試驗(yàn)采用純化后的豬瘟兔化弱毒病毒液免疫六周齡健康BALB/c小鼠

2、，用間接ELISA檢測免疫抗體滴度，取免疫鼠脾細(xì)胞與F0骨髓瘤細(xì)胞用PEG1500進(jìn)行融合并篩選，最終獲得一株能夠穩(wěn)定分泌抗CSFV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，將得到的陽性細(xì)胞注入小鼠腹腔，收取腹水，測定效價(jià)，間接ELISA試驗(yàn)檢測腹水單抗效價(jià)為1：105，雜交瘤細(xì)胞上清液的抗體效價(jià)為1：160。用間接ELISA檢測，該單抗只與豬瘟病毒呈陽性反應(yīng)，而與鴿新城疫病毒，豬繁殖呼吸綜合癥病毒，豬傳染性胃腸炎病毒，雞產(chǎn)蛋下降綜合征病毒無交叉反應(yīng)，

3、為建立一種快速、簡便的檢測豬瘟病毒的膠體金免疫層析法。采用檸檬酸鈉還原法制備膠體顆粒，用辛酸-硫酸銨鹽析法純化小鼠抗CSFV抗體，確定標(biāo)記膠體金的最適pH值和抗體的最佳包被量，周膠體金標(biāo)記抗體，并包被在玻璃纖維膜上，另外將純化的CSF抗體和羊抗鼠抗體包被在硝酸纖維膜上，組裝成CSF快速檢測條，對豬瘟病毒進(jìn)行檢測。使用所研制CSF快速檢測條，檢測收集的70份待檢樣品，檢出豬瘟陽性病例26例，而經(jīng)病毒分離鑒定陽性病例有28例，陽性符合率達(dá)9