低滲誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體的研究.pdf

1、本文以蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)為研究對象，嘗試開發(fā)了一種多倍體誘導(dǎo)的新方法——低滲誘導(dǎo)，通過低滲處理抑制蝦夷扇貝受精卵第二極體(PB2)的釋放產(chǎn)生三倍體。研究中探索了低滲處理的最佳誘導(dǎo)條件，進(jìn)行了多倍體的誘導(dǎo)和培育以及幼蟲和幼貝的生長、存活、倍性變化等觀察研究，并通過電鏡觀察了受精卵經(jīng)低滲處理后超微結(jié)構(gòu)的變化，以期為多倍體育種理論提供新的實(shí)驗(yàn)和實(shí)踐依據(jù)，為貝類多倍體育種開辟一條新的途徑。 研究主要

2、分為以下三個(gè)部分： 1、低滲誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體最佳誘導(dǎo)參數(shù)的探討 采用低滲方法，通過不同誘導(dǎo)參數(shù)包括：低滲鹽度(S=8、10、12、14、16、18)、處理時(shí)機(jī)(第二極體出現(xiàn)率達(dá)30％、50％和出現(xiàn)第一個(gè)第二極體時(shí))和處理持續(xù)時(shí)間(10min、15min、20min、25min)分別抑制受精卵第二極體的釋放誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體，以獲得最佳誘導(dǎo)條件。結(jié)果表明：以低滲鹽度S=12，在第一個(gè)PB2出現(xiàn)時(shí)開始處理，持續(xù)處理20mi

3、n，能夠最有效地誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體，平均誘導(dǎo)率為(81.12±3.82)％，最高可達(dá)84.74％。 2、蝦夷扇貝三倍體的培育 采用低滲方法，以最佳誘導(dǎo)條件誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體，進(jìn)行了兩次小規(guī)模生產(chǎn)性實(shí)驗(yàn)研究：在海陽，對誘導(dǎo)的蝦夷扇貝三倍體進(jìn)行幼蟲培育，處理組的卵裂率、孵化率分別為39.03％、42.91％，對照組分別為48.63％、58.25％。；三倍體處理組的幼蟲比二倍體對照組的幼蟲生長速度具有一定的優(yōu)勢，尤其在進(jìn)入殼頂

4、幼蟲時(shí)期，兩組生長差異明顯(P<0.001)，進(jìn)入匍匐幼蟲以后，差異開始減小(P<0.05)；三倍體處理組的相對存活率不斷下降，存活率低于同期對照組；三倍體處理組的三倍體率由剛孵化出D形幼蟲時(shí)為73.86％，培育13天后下降到56.47％。在獐子島，對誘導(dǎo)的蝦夷扇貝三倍體培育至幼貝，在幼蟲期、稚貝期、5月齡、8月齡和12月齡處理組三倍體率分別為55.81％、35.00％、13.33％、8％、8％，5月齡和8月齡時(shí)發(fā)現(xiàn)有2n/3n嵌和體的

5、存在，嵌合體率分別為3.33％和2.00％；三倍體在幼貝階段未表現(xiàn)明顯的生長優(yōu)勢。 3、低滲處理蝦夷扇貝受精卵的電鏡觀察 采用透射電鏡對低滲處理的蝦夷扇貝受精卵進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)的觀察，對比處理前后受精卵結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)果表明，低滲處理能夠引起受精卵發(fā)生很大變化：卵膜破壞，質(zhì)膜發(fā)生皺縮和部分溶解，細(xì)胞基質(zhì)變稀疏，卵黃顆粒皺縮變形，線粒體空泡化、膨脹甚至部分單位膜破壞，高爾基復(fù)合體囊泡化，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體脫落；當(dāng)處理結(jié)束放入正常海