牙鲆和圓斑星鰈雜交三倍體誘導(dǎo)的初步研究.pdf

1、牙鲆（Paralichthys olivaceus）是我國(guó)重要的海水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，具有重要的商品價(jià)值。很多研究表明，三倍體魚(yú)類(lèi)除了在生長(zhǎng)等性狀方面的優(yōu)勢(shì)外，在生殖方面具有低育性和不育性。正是因?yàn)槿扼w魚(yú)在生殖方面獨(dú)特的不育性，近年來(lái)伴隨分子生物學(xué)和基因重組技術(shù)的發(fā)展，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育帶有特異標(biāo)記的品系，對(duì)原始生殖細(xì)胞（PGC）進(jìn)行標(biāo)記、分離，經(jīng)過(guò)顯微操作技術(shù)實(shí)現(xiàn)原始生殖細(xì)胞的移植，在魚(yú)類(lèi)生殖細(xì)胞移植方面不育的三倍體可以作為理想的受體魚(yú)。不

2、育的三倍體魚(yú)在接受外源生殖細(xì)胞移植后，可以排除內(nèi)源性生殖細(xì)胞的干擾。本文以牙鲆和圓斑星鰈（Verasper variegatus）為研究對(duì)象，首先對(duì)圓斑星鰈的精子進(jìn)行了冷凍保存實(shí)驗(yàn)，然后用靜水壓法誘導(dǎo)牙鲆（♀）×圓斑星鰈（♂）雜交三倍體和四倍體，篩選了最佳誘導(dǎo)條件，得到生殖細(xì)胞移植需要的三倍體。主要結(jié)果如下：
　　1.將圓斑星鰈精子收集后，超低溫冷凍保存，篩選出HBSS作為冷凍稀釋液，15％DMSO作為冷凍保護(hù)劑。對(duì)解凍后的圓斑星

3、鰈精子進(jìn)行受精實(shí)驗(yàn)，受精率能達(dá)到（61.00±2.00）%，同時(shí)對(duì)精子激活后的運(yùn)動(dòng)率進(jìn)行了檢測(cè)，解凍后激活的精子的存活時(shí)間會(huì)顯著縮短，解凍后的精子的存活時(shí)間大約為150s，激活后的新鮮精子存活時(shí)間大約為250s。經(jīng)過(guò)冷凍后的精子其形態(tài)特征會(huì)受到損傷，其生理活性也會(huì)下降。
　　2.本研究利用牙鲆（♀）和圓斑星鰈（♂）的配子受精后，用靜水壓法抑制受精卵第二極體的排出，誘導(dǎo)雜交三倍體。并篩選出最佳的誘導(dǎo)條件。實(shí)驗(yàn)證明，靜水壓法可以誘導(dǎo)出

4、牙鲆（♀）×圓斑星鰈（♂）雜交三倍體，誘導(dǎo)率主要受到受精后處理起始時(shí)刻、處理壓強(qiáng)和壓強(qiáng)處理時(shí)間三個(gè)因素的影響。靜水壓法的最佳誘導(dǎo)條件為：在海水溫度為15℃±0.2℃時(shí)，受精后3min起，以70MPa壓力處理6min，此時(shí)相對(duì)孵化率為（24.06±1.10）%，利用倍性分析儀對(duì)其進(jìn)行倍性鑒定，三倍體率為（26.67±6.67）%。染色體分析表明，三倍體胚胎的染色體數(shù)目為71條，對(duì)照組二倍體胚胎的染色體數(shù)目為47條。還發(fā)現(xiàn)了少量染色體數(shù)目為