氟損傷甲狀腺機(jī)理研究.pdf

1、氟是機(jī)體必需的微量元素，攝入適量能維持機(jī)體正常的生命活動，但它還是一種全身性毒物，其對機(jī)體內(nèi)分泌腺的影響已成為近年來的研究熱點(diǎn)。有實(shí)驗(yàn)表明氟能夠引起甲狀腺腫大，但是也有學(xué)者持反對意見。
　　 本實(shí)驗(yàn)分別復(fù)制SD大鼠氟中毒動物模型和氟化鈉處理原代培養(yǎng)SD大鼠甲狀腺細(xì)胞、大鼠甲狀腺細(xì)胞系（fisher rat thyroid cell line，F(xiàn)RTL）。80只SD大鼠飲水中添加的氟化鈉含量分別為0，50mg/L，100mg/L，

2、200mg/L，原代培養(yǎng)的SD大鼠甲狀腺細(xì)胞染氟化鈉濃度分別為0，10μmol/L，100μmol/L，1000μmol/L，F(xiàn)RTL細(xì)胞染氟化鈉濃度分別為0，1.25mg/L，2.5mg/L，5.0mg/L，10.0mg/L，20mg/L。運(yùn)用電鏡學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等技術(shù)研究氟對甲狀腺激素代謝基因表達(dá)、功能蛋白表達(dá)和分布、細(xì)胞因子基因表達(dá)及分泌的影響，體外實(shí)驗(yàn)?zāi)芙獬虑鹉X-腺垂體-甲狀腺軸的影響，影響因素單一。本實(shí)驗(yàn)通過體內(nèi)體外氟

3、中毒實(shí)驗(yàn)闡述氟引起甲狀腺腫大的分子機(jī)理，從而為揭示氟引起甲狀腺損傷提供理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)成功的復(fù)制SD大鼠氟中毒動物模型和制備體外氟中毒甲狀腺細(xì)胞樣品，通過形態(tài)學(xué)觀察及競爭放射性免疫法測定反映甲狀腺細(xì)胞結(jié)構(gòu)和分泌激素功能的一系列指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)氟引起甲狀腺激素T3、T4合成和分泌障礙及直接影響整個甲狀腺細(xì)胞的生長和發(fā)育過程。
　　 高氟（200mg/L）大鼠甲狀腺血管增生和大面積增生結(jié)節(jié)，尤其氟對甲狀腺細(xì)胞膜損傷嚴(yán)重；

4、本實(shí)驗(yàn)通過甲狀腺組織切片HE染色和掃描電鏡等手段檢測氟對甲狀腺細(xì)胞的損傷，結(jié)果證明氟能夠引起甲狀腺腫大和一序列的損傷；運(yùn)用RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光組織化學(xué)等方法測定甲狀腺相關(guān)功能酶類，以及部分相關(guān)蛋白和生長因子的表達(dá)與含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲狀腺球蛋白（TG）、過氧化物酶（TPO）、鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體（NIS）、促甲狀腺激素受體（TSHR）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等與甲狀腺功能密切相關(guān)的指標(biāo)均表現(xiàn)異常；氟引起自由基代謝紊亂，致NO生成

5、的功能酶以及相關(guān)生長因子（如iNOS和VEGF）表達(dá)受到影響發(fā)生顯著變化，微血管增生，自由基和脂質(zhì)過氧化物在甲狀腺中蓄積，破壞了甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，干擾膠質(zhì)的代謝，抑制甲狀腺中碘的轉(zhuǎn)運(yùn)和有機(jī)化過程，干擾甲狀腺過氧化物酶的活性，破壞甲狀腺激素合成和分泌的各個環(huán)節(jié)，阻斷了TSH對甲狀腺細(xì)胞刺激作用，導(dǎo)致TSHR-cAMP無法發(fā)揮正常作用，甲狀腺細(xì)胞功能下降。
　　 此外本實(shí)驗(yàn)研究FRTL細(xì)胞在外界氟的作用下NO分泌、細(xì)胞因

6、子基因表達(dá)和分泌的影響。運(yùn)用RT-PCR、ELISA檢測氟刺激FRTL細(xì)胞72h后IL-6 mRNA、IL-8mRNA、IFN-γmRNA，TNF-a mRNA水平和細(xì)胞上清中VEGF分泌量；同時western blot測定NF-κB p65蛋白水平，結(jié)果表明：氟刺激這些細(xì)胞因子的表達(dá)，一方面通過抑制甲狀腺激素代謝基因表達(dá)而影響甲狀腺細(xì)胞甲狀腺激素的分泌；另一方面，氟刺激細(xì)胞因子和NF-κB p65表達(dá)導(dǎo)致甲狀腺細(xì)胞自身抵抗氟能力下降，