東北虎源等孢球蟲蟲種鑒定及其生物學(xué)特性與藥物防治研究.pdf

1、珍稀觀賞動物的球蟲疾病報(bào)道近年來逐漸增多。筆者對黑龍江省某動物園的92只貓科動物進(jìn)行了球蟲感染調(diào)查并進(jìn)行了六種糞檢法檢測效力的測定，結(jié)果teleman法+飽和鹽-糖溶液漂浮法為最佳的檢測方法，其球蟲卵囊檢出率為17.39％（16/92），其中幼齡動物感染明顯多于成年動物。
　　 對球蟲卵囊培養(yǎng)后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察：未孢子化卵囊多數(shù)呈卵圓形，平均長為45.875μm，平均寬為34.775μm，形狀指數(shù)為1.19。卵壁光滑沒有顏色。卵膜

2、共分兩層，外層薄而無色，內(nèi)層厚呈黑色。無卵膜孔，無極粒，無殘?bào)w。卵囊孢子化后，胚囊分裂成為兩個(gè)孢子囊，每個(gè)孢子囊中含有四個(gè)子孢子，殘?bào)w清晰可見。孢子囊呈橢圓形，平均長為26.875μm，平均寬為22.375μm，形狀指數(shù)為1.25。提取蟲體基因組DNA，并根據(jù)GenBank上發(fā)表的貓等孢球蟲核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)Ⅰ（Cystoisospora felis internal transcribed spacer 1, ITS1）序列設(shè)計(jì)引物，

3、對目的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列測定。應(yīng)用DNAStar軟件，將長為389bp的目的片段與Genbank中發(fā)表的19種球蟲相應(yīng)的ITS1序列進(jìn)行同源性比較，序列分析顯示東北虎源球蟲與其它19種球蟲相應(yīng)序列同源性為38.11％～98.71％之間，其中與等孢球蟲的同源性為55.64％～98.71％之間。綜合對東北虎源球蟲形態(tài)學(xué)觀察、PCR擴(kuò)增其ITS1序列并進(jìn)行序列分析，構(gòu)建分子進(jìn)化樹及系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系的分析以及動物感染實(shí)驗(yàn)，確定東北虎源球蟲為等

4、孢屬球蟲，并且與貓等孢球蟲親緣最近。
　　 應(yīng)用單卵囊分離技術(shù)，獲得東北虎源等孢球蟲純種卵囊。分別給貓感染30、103、104個(gè)孢子化卵囊，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及每克糞便中卵囊數(shù)（OPG值）。通過對比，驗(yàn)證了潛隱期、顯露期、OPG值與感染劑量存在相關(guān)關(guān)系，即感染劑量越小，潛隱期越長，顯露期越長，OPG值越??；反之亦然。感染30個(gè)卵囊的貓無明顯臨床病征；感染103個(gè)卵囊的貓腹瀉出現(xiàn)少量血便；感染10

5、4個(gè)卵囊的貓水樣腹瀉后出現(xiàn)大量血便。
　　 感染103與104個(gè)孢子化卵囊的貓完成卵囊排放，于10d后再次感染103個(gè)孢子化卵囊，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結(jié)果表明感染強(qiáng)度與免疫力存在正相關(guān)關(guān)系，即首次感染強(qiáng)度較大組產(chǎn)生的免疫記憶較強(qiáng)，再次感染相同劑量卵囊后，其卵囊排出數(shù)量少，表現(xiàn)出的病癥也相對較輕。
　　 妥曲株利和莫能菌素分別按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂貓

6、并于當(dāng)日接種104個(gè)孢子化卵囊，首次用藥后24h再給藥一次。于感染后三天（PID3）開始，用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查糞便，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結(jié)果表明兩預(yù)防組均無卵囊檢出，妥曲株利與莫能菌素給藥后均可有效地預(yù)防等孢球蟲感染。
　　 給貓感染104個(gè)孢子化卵囊，于卵囊始現(xiàn)日將妥曲株利和莫能菌素分別按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂貓，首次用藥后24h再給藥一次。結(jié)果給

7、藥后，兩治療組的卵囊排出強(qiáng)度快速下降。與莫能菌素相比，百球清表現(xiàn)出更強(qiáng)、更快的殺蟲和抑蟲作用，其治療效果更為優(yōu)秀。
　　 利用妥曲株利和莫能菌素進(jìn)行藥物預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)的貓，于糞中卵囊最早消失的時(shí)間延后10d，再次感染104個(gè)孢子化卵囊，于PID3開始，用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查糞便，觀察貓的排卵囊規(guī)律，包括潛隱期、顯露期、排卵囊高峰期及OPG值。結(jié)果表明：兩藥物預(yù)防組的貓?jiān)俅胃腥韭涯液?，其卵囊排出?qiáng)度與正常一次感染組相似，遠(yuǎn)大