棉鈴蟲幼蟲中腸脂筏理化性質(zhì)研究及鈣粘素免疫檢測.pdf

1、脂筏是細(xì)胞膜上富含膽固醇、鞘脂類和糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨著蛋白的去垢劑不溶性微結(jié)構(gòu)域。根據(jù)脂筏在低溫（4℃）不溶于去垢劑的性質(zhì)，我們用去垢劑TritonX-100處理棉鈴蟲幼蟲及其它三種鱗翅目幼蟲（菜青蟲，斜紋夜蛾，二化螟）中腸刷狀緣膜囊泡，溶解非脂質(zhì)筏，再用Optiprep密度梯度離心將去垢劑不溶組分分離。以神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）作為脂筏的標(biāo)志分子，采用辣根過氧化物酶標(biāo)記的霍亂毒素-β-亞基對其進(jìn)行親和標(biāo)記，點(diǎn)印跡法化學(xué)發(fā)光檢測神經(jīng)

2、節(jié)苷脂的表達(dá)。結(jié)果成功分離制備了四種鱗翅目昆蟲幼蟲中腸刷狀緣膜囊泡上脂筏。
　　 比較了轉(zhuǎn)Bt基因棉棉鈴蟲抗性品系（YCR）和敏感品系（YCS）幼蟲中腸液、BBMV及其上脂筏中的酶活性。胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶是兩類主要的絲氨酸蛋白酶，測定結(jié)果顯示兩種酶活性是中腸液高于BBMV，BBMV高于其上脂筏；氨肽酶活性則相反：中腸液活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于BBMV，而BBMV低于其上脂筏的活性，這是由于氨肽酶是GPI-錨膜蛋白，在中腸液中的含量較低，

3、而BBMV中氨肽酶活性低于其上脂筏活性說明相對BBMV，氨肽酶在脂筏中有一定程度的富集。而比較抗感品系之間大部分酶活性均是敏感品系高于抗性品系。僅堿性磷酸酯酶中腸液，總蛋白酶中脂筏抗性高于敏感品系。
　　 比較了四種鱗翅目昆蟲-棉鈴蟲、斜紋夜蛾、二化螟和菜青蟲幼蟲BBMV和其上脂筏的酶活性。其中氨肽酶的活性均存在BBMV低于其上脂筏的關(guān)系，而胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，堿性磷酸酯酶均存在BBMV高于其上脂筏的關(guān)系。其后又對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)

4、行進(jìn)行如下處理：將每種昆蟲BBMV和脂筏酶活性相比得到一數(shù)值發(fā)現(xiàn)它們的差異程度存在如下關(guān)系：二化螟大于菜青蟲，菜青蟲大于斜紋夜蛾（以棉鈴蟲敏感品系為標(biāo)準(zhǔn)），這與幾種昆蟲在分類上的近遠(yuǎn)源關(guān)系是一致的。
　　 研究中我們分別采用點(diǎn)印跡（Dot-blot），酶聯(lián)免疫（ELISA）和免疫印跡（Westernblotting）的方法檢測棉鈴蟲抗性和敏感品系中的鈣粘蛋白。應(yīng)用Dot-blot和ELISA方法檢測時，分別從定性和定量的角度對鈣