不同佐劑對(duì)金黃色葡萄球菌CP8-FnBPB-ClfA多價(jià)毒力因子疫苗免疫效果影響的研究.pdf

1、奶牛乳房炎(Bovine mastitis)是由于奶牛乳腺組織被外界因素所刺激而發(fā)生的炎癥反應(yīng)。奶?；既榉垦缀螅橄俳M織遭到損傷，導(dǎo)致組織病變、乳中體細(xì)胞數(shù)增加、產(chǎn)奶量和牛奶品質(zhì)下降。由于病原微生物是導(dǎo)致奶牛乳房炎的最主要因素，因此，本研究針對(duì)金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎，在本實(shí)驗(yàn)室過去的研究基礎(chǔ)上，自制了CP8-FnBPB-ClfA金黃色奶牛乳房炎疫苗，并通過兔乳房炎模型對(duì)佐劑進(jìn)行篩選，確定其免疫途徑后，與CP8-FnBPB-ClfA配

2、合免疫奶牛，評(píng)價(jià)其免疫效果，結(jié)果如下:
　　1.在以前的基礎(chǔ)上，提取出已被本實(shí)驗(yàn)室鑒定為血清8型S.aureus的莢膜多糖1.7970g，將含F(xiàn)nBPB-ClfA融合蛋白的質(zhì)粒在大腸桿菌中表達(dá)并將其與CP8偶聯(lián)，得到CP8-FnBPB-ClfA。
　　2.以CP8-FnBPB-ClfA為疫苗，分別配合弗氏佐劑、鋁膠鹽水佐劑、脂質(zhì)體佐劑和大腸桿菌不耐熱腸毒素B(LTB)佐劑，對(duì)新西蘭大耳白兔進(jìn)行免疫，在免疫后不同時(shí)期，通過間接

3、ELISA法和Western blot對(duì)各組兔血清中的抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，評(píng)價(jià)體液免疫效果;通過檢測(cè)Th1/Th2類細(xì)胞因子水平檢測(cè)及T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫效果。抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，以脂質(zhì)體為佐劑的試驗(yàn)組7d時(shí)開始產(chǎn)生抗體，產(chǎn)生抗體最早，但14d后抗體水平就開始下降;以LTB為佐劑的試驗(yàn)組抗體水平最高，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。Th1/Th2類細(xì)胞因子水平檢測(cè)結(jié)果顯示，各試驗(yàn)組Th1/Th2類細(xì)胞因子水平均有不同程度的提高，以ALUM與LTB作為佐

4、劑，免疫效果優(yōu)于弗氏佐劑及脂質(zhì)體試驗(yàn)組，但ALUM與LTB試驗(yàn)組差別不大。T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)ConA刺激后，各組T淋巴細(xì)胞普遍增殖，無顯著差異，刺激指數(shù)都在1.0左右;用抗原刺激的組中，以LTB為佐劑的組T淋巴細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)，刺激指數(shù)為2.23。在對(duì)免疫部位進(jìn)行篩選后，進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果證實(shí)，3次免疫部位均為肌肉時(shí)，所產(chǎn)生的抗體滴度最高，能夠在最大程度上提高Th1/Th2類細(xì)胞因子水平。攻毒試驗(yàn)結(jié)果所示，自制疫苗保護(hù)率可達(dá)

5、80％。
　　3.用鋁膠鹽水(ALUM)佐劑配合CP8-FnBPB-ClfA偶聯(lián)物免疫本動(dòng)物，通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，將免疫組與對(duì)照組相比，免疫組的體細(xì)胞數(shù)下降至正常范圍或保持在正常范圍內(nèi)不變，對(duì)照組體細(xì)胞數(shù)升高超出正常范圍或在非正常范圍內(nèi)不變;通過對(duì)免疫組與對(duì)照組乳汁中的細(xì)菌分離鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫組乳汁中的金黃色葡萄球菌隨免疫天數(shù)的增加逐漸減少，而對(duì)照組乳汁中的金黃色葡萄球菌隨天數(shù)的增加呈逐漸增多的趨勢(shì)。通過ELISA，評(píng)價(jià)奶牛血清及乳汁