蘋(píng)果MdFT基因克隆及功能的初步鑒定.pdf

1、果樹(shù)花芽形成是產(chǎn)量形成的基礎(chǔ)，而大多數(shù)果樹(shù)在第一次開(kāi)花結(jié)果之前常常需要經(jīng)歷一個(gè)漫長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期——童期。童期的存在嚴(yán)重阻礙了雜交育種的進(jìn)程，延長(zhǎng)了育種周期?；蚬こ碳夹g(shù)的發(fā)展為解決這一難題提供了新途徑。最近，F(xiàn)T蛋白已被證明是植物中的“成花素”，蘋(píng)果MdFT基因是擬南芥AtFT基因的同源基因，本研究開(kāi)展了該基因的克隆和功能鑒定工作，取得的結(jié)果有： 1、通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增，從蘋(píng)果栽培品種‘嘎拉’葉片cDNA中克隆了MdFT基因，

2、同時(shí)，從擬南芥生態(tài)型Columbia中克隆了AtFT基因作為對(duì)照。序列分析表明，在氨基酸水平上，MdFT與AtFT的同源性為72．6%。 2、聚類(lèi)分析表明，推導(dǎo)的MdFT蛋白與來(lái)自擬南芥、水稻、柑桔、楊樹(shù)等的FT同源基因推導(dǎo)的蛋白同歸于FT類(lèi)。 3、構(gòu)建了植物表達(dá)載體35S：：MdFT和35S：：AtFT。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將它們導(dǎo)入擬南芥生態(tài)型Columbia和番茄栽培品種‘中蔬一號(hào)’中，得到了抗卡那霉素的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化

3、植株。經(jīng)PCR擴(kuò)增檢測(cè)，證明它們已經(jīng)導(dǎo)入轉(zhuǎn)化的擬南芥基因組；經(jīng)PCR擴(kuò)增和半定量RT-PCR檢測(cè)，證明它們已經(jīng)導(dǎo)入轉(zhuǎn)化的番茄基因組，并在轉(zhuǎn)錄水平得到了表達(dá)。 4、轉(zhuǎn)基因擬南芥的Quantitative RT-PCR檢測(cè)表明，MdFT基因通過(guò)調(diào)節(jié)下游成花相關(guān)基因的表達(dá)誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生早花現(xiàn)象。 5、亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，MdFT-GFP蛋白主要定位在細(xì)胞膜上。 6、形態(tài)鑒定結(jié)果表明，無(wú)論是轉(zhuǎn)基因擬南芥植株還是番茄植株，