犬場三種傳染病的免疫程序及其中藥佐劑的研究和應(yīng)用.pdf

1、犬瘟熱、犬細(xì)小病毒病和犬傳染性肝炎是嚴(yán)重危害犬業(yè)的3種重要傳染病。由于這3種傳染病都是病毒性傳染病，預(yù)防接種是控制其發(fā)生的重要措施。制定科學(xué)合理的免疫程序至關(guān)重要，基礎(chǔ)抗體水平、幼犬首免日齡、疫苗和劑量等因素均直接影響防控效果。西崗犬場是公安部南京警犬研究所社會化養(yǎng)犬基地之一，目前執(zhí)行《警犬疾病防治工作規(guī)則》所規(guī)定的免疫程序。這些程序是否科學(xué)合理？本研究進(jìn)行了初步探討。
　　 本研究系統(tǒng)測定了成年犬常規(guī)免疫后血清犬瘟熱病毒(CD

2、V)抗體、犬細(xì)小病毒(CPV)抗體、犬腺病毒(CAV)抗體效價(jià)及外周血白細(xì)胞的變化，首免不同日齡、首免不同劑量、首免不同來源疫苗對幼犬3種血清抗體效價(jià)的影響，中藥佐劑對免疫幼犬3種血清抗體效價(jià)和血清細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10含量的影響。本研究的目的，旨在找出最佳首免日齡、劑量、疫苗及佐劑，為制定科學(xué)合理的免疫程序、提高3種傳染病的防控效果提供理論依據(jù)。試驗(yàn)分為以下六個(gè)部分:
　　 試驗(yàn)一、成年犬常規(guī)免疫后

3、3種抗體效價(jià)及白細(xì)胞的變化為驗(yàn)證成年犬3種疫苗常規(guī)預(yù)防接種的效果和基礎(chǔ)抗體水平、性別及年齡對體液免疫的影響，隨機(jī)選擇青年母犬5頭(Ⅰ)、老年公犬4頭(Ⅱ)、青年公犬4頭(Ⅲ)，均肌肉注射輝瑞四聯(lián)苗1頭份，分別于免疫前(D0)和免疫后第15天(D15)、1個(gè)月(M1)、3個(gè)月(M3)、6個(gè)月(M6)、9個(gè)月(M8)采血測定CDV抗體、CPV抗體、CAV抗體、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的變化。結(jié)果顯示，CDV抗體，各組犬在各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異，全年呈高

4、—低—高的態(tài)勢;CPV抗體，3組在全年呈高—低—高—低的態(tài)勢，老年公犬在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著低于其余2組;CAV抗體，在全年呈高—低—高—低的態(tài)勢，青年公犬在M6顯著低于其余2組。青年母犬在接種前3種抗體均處于較高水平;白細(xì)胞總數(shù)，青年母犬在D15上升幅度大，顯著高于其余2組;3組在各時(shí)間點(diǎn)的白細(xì)胞分類無顯著差異。結(jié)果表明，按照《警犬疾病防治工作條例》對成年犬每年例行一次免疫接種是可行、有效的，老年犬免疫記憶應(yīng)答保存完整，青年母犬的抗體水平較

5、高，在擬定新生仔犬免疫程序時(shí)應(yīng)考慮母源抗體水平。
　　 試驗(yàn)二、幼犬首免日齡對血清抗體效價(jià)的影響為驗(yàn)證本場執(zhí)行的幼犬45日齡首免是否為最適宜的時(shí)間，隨機(jī)選擇35日齡（Ⅰ組）、40日齡(Ⅱ組)、50日齡（Ⅲ組）、45日齡（對照組，C）幼犬各4頭，均用犬瘟熱-細(xì)小病毒二聯(lián)苗免疫，首免后第14、28天分別用英特威四聯(lián)活疫苗、輝瑞四聯(lián)苗重復(fù)免疫。分別于首免前(D0)、首免后第7天(D7)、14天(D14)、21天(D21)、28天(D2

6、8)、35天(D35)、42天(D42)采血，測定血清CDV抗體、CPV抗體和CAV抗體的變化。結(jié)果表明，CDV抗體，大幅上升的時(shí)間點(diǎn)隨著日齡的增長而逐步提前，母源抗體水平與幼犬免疫后抗體的增幅成反比，以50日齡首免最好，其次是45日齡;CPV抗體，45日齡首免最好，40日齡次之;CAV抗體，35日齡首免最好，45日齡次之。綜合考慮以45日齡首免為宜。
　　 試驗(yàn)三、幼犬首免劑量對血清抗體效價(jià)的影響為尋找幼犬首免疫苗的最佳劑量，

7、選擇45日齡仔犬16頭隨機(jī)分為4組，每組4頭，均用英特威犬瘟熱-細(xì)小病毒二聯(lián)活疫苗分別按0.5頭份（Ⅰ組）、1.5頭份（Ⅱ組）、2.0頭份（Ⅲ組）、1頭份（對照組，C）首免，首免后第14、28天分別用英特威四聯(lián)苗、輝瑞四聯(lián)苗二免、三免，于免疫前(D0)和免疫后第7天(D7)、14天(D14)、21天(D21)、28天(D28)、35天(D35)、42天(D42)采血，測定血清CDV抗體、CPV抗體和CAV抗體的變化。結(jié)果顯示，CDV抗體

8、，0.5頭份組在D7即開始上升，此后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)均處于高位，峰值出現(xiàn)的時(shí)間較其它3組為早，峰值增幅最高、達(dá)81.41％; CPV抗體，0.5頭份組于D14開始上升，比1.5頭份組早2周，其后一直保持高水平，峰值時(shí)間比1.5頭份組早1周;CAV抗體，0.5頭份組于D35上升幅度大并達(dá)到峰值，增幅33.86％，與2頭份組、1.5頭份組接近，至D42仍維持在較高水平。以上結(jié)果表明，0.5頭份為首免最佳劑量。
　　 試驗(yàn)四、不同來源疫苗首

9、免對幼犬血清抗體效價(jià)的影響為尋找幼犬首免的最佳疫苗，選擇45日齡幼犬16頭分為4組，每組4頭，分別用五星五聯(lián)苗（Ⅰ組）、英特威四聯(lián)苗（Ⅱ組）、輝瑞四聯(lián)苗（Ⅲ組）、英特威二聯(lián)苗(C組)首免，首免后第14、28天均用英特威四聯(lián)苗、輝瑞四聯(lián)苗二免和三免，分別于免疫前(D0)和首免后第7天(D7)、14天(D14)、21天(D21)、28天(D28)、35天(D35)、42天(D42)采血，測定血清CDV抗體、CPV抗體和CAV抗體的變化。結(jié)果

10、顯示，CDV抗體，Ⅱ組峰值的增幅最高，為77.85％，其次是C組;CPV抗體，C組峰值最高，增幅56.23％，上升平穩(wěn)，至D42時(shí)仍在高位，其次是Ⅱ組;CAV抗體，Ⅲ組表現(xiàn)最好，峰值及其較D0時(shí)的增幅最高(48.67％)，其次是Ⅱ組。綜合比較，首免以英特威四聯(lián)苗為佳。
　　 試驗(yàn)五、中藥佐劑對免疫幼犬血清抗體效價(jià)的影響為探討中藥佐劑的免疫增強(qiáng)作用，選擇45日齡仔犬24頭，隨機(jī)分為6組，每組4頭，分別為方劑Ⅰ低劑量(Ⅰ L)組、方

11、劑Ⅰ高劑量(Ⅰ H)組、方劑Ⅱ低劑量(ⅡL)組、方劑Ⅱ高劑量(ⅡH)組、左旋咪唑組（adjuvant control，AC）及疫苗對照(non-adjuvant，NA)組，均用英特威二聯(lián)苗首免，首免后14天用英特威四聯(lián)苗二免，首免后28天輝瑞四聯(lián)苗三免;在每次免疫的同時(shí)，4中藥方劑組分別頸另側(cè)肌肉注射相應(yīng)藥物1 mL，左旋咪唑組口服左旋咪唑片（2.5 mg/kg），疫苗對照組不給藥。分別于免疫前(D0)及免疫后第7(D7)、14(D14

12、)、21(D21)、28(D28)、35(D35)、42(D42)天，前肢靜脈采血，檢測血清CDV抗體、CPV抗體、CAV抗體的變化。結(jié)果顯示，對CDV抗體，方Ⅰ高劑量的增強(qiáng)作用最好，于D7即大幅上升，持續(xù)至D42仍處最高，峰值的增幅為82.68％，遠(yuǎn)高于其余各組，其次是方Ⅱ高劑量組;對CPV抗體，方Ⅰ低劑量的增強(qiáng)作用最好，其次是方Ⅰ高劑量，這兩組分別于D14和D28達(dá)到峰值，增幅均為36.84％，在D14～D42處于高位;對CAV抗體

13、，方Ⅰ高劑量的增強(qiáng)作用最好，在D28上升幅度大，至D42達(dá)峰值，增幅最高(41.40％)，其次是方Ⅱ低劑量。以上結(jié)果表明，中藥佐劑的免疫增強(qiáng)作用明顯，方Ⅰ的效果最好。
　　 試驗(yàn)六、中藥佐劑對免疫幼犬細(xì)胞因子含量的影響為探討中藥佐劑增強(qiáng)免疫的作用機(jī)理，選擇45日齡仔犬24頭，分組和處理同試驗(yàn)五。分別于免疫前(D0)及免疫后第14(D14)、28(D28)和42(D42)天前肢靜脈采血，檢測血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL

14、-10含量的變化。結(jié)果顯示，IL-2含量，方Ⅰ高、低劑量在D14，4個(gè)中藥組在D28和D42均顯著高于疫苗對照組（P＜0.05），方Ⅱ高劑量組在D28最高，其次為方Ⅰ高劑量組，分別為其D0的380.29％和294.03％;IFN-γ含量，方劑Ⅰ低劑量組在D14、4個(gè)中藥組在D28、方劑Ⅰ低、高劑量組與方劑Ⅱ低劑量組在D42顯著高于疫苗對照組（P＜0.05），方Ⅱ高劑量組在D28最高，其次方劑Ⅱ低劑量組在D42，分別為其D0的276.30

15、％和236.35％; IL-4含量，方Ⅰ高劑量在D42最高，顯著高于疫苗對照組（P＜0.05），為其D0的214.55％，其次為方Ⅱ低組在D14，為其D0的197.5％; IL-10含量，4個(gè)中藥組在D14、方劑Ⅰ高劑量組與方劑Ⅱ高劑量組在D28和D42顯著高于疫苗對照組（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，中藥佐劑能顯著促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌，2個(gè)方劑均有較好的效果。
　　 基于以上研究，確定了本場防控仔犬3種傳染病的免疫程序?yàn)?45日