蘋果MdBAK1s基因表達載體構建、愈傷轉化與蘋果輪紋病抗性鑒定.pdf

1、BAK1是植物中重要的一類激酶受體。擬南芥中的研究表明：BAK1介導植物油菜素內酯信號轉導、先天性免疫反應以及病原菌致毒蛋白對植物的毒性。蘋果中的MdBAK1s與擬南芥中的BAK1具有很高的相似性，而目前國內外有關BAK1在蘋果抵抗重要病害中的作用及其在生長發(fā)育中的作用研究很少，為此，本研究中，我們克隆了蘋果中BAK1的2個同源基因，分別命名為：MdBAK1-1、MdBAK1-2，并對其進行氨基酸序列分析。分別對愈傷組織超表達后生長量的

2、變化，對BR處理的影響，抗病性及抑制表達后對MAPK的信號響應等問題展開了相關研究，這將為進一步研究MdBAK1s在蘋果生長發(fā)育以及抗病中的作用奠定基礎。主要研究結果如下：
　　1.以嘎啦組培苗為材料克隆獲得蘋果中 BAK1的兩個同源基因，分別命名為：MdBAK1-1、MdBAK1-2，氨基酸序列分析表明：MdBAK1-1、MdBAK1-2與擬南芥BAK1的序列高度保守，相似度分別為83％、84%，其中胞內激酶區(qū)域的保守性更高，均

3、為90%。并且都具有信號肽區(qū)域、亮氨酸拉鏈區(qū)域、5個亮氨酸富含區(qū)域、脯氨酸富含區(qū)、跨膜區(qū)以及胞內激酶區(qū)。
　　2.獲得了穩(wěn)定超表達 MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織與轉基因蘋果株系，并初步觀察其表型特征，發(fā)現(xiàn)轉基因蘋果植株長勢較弱，部分葉片會隨著生長發(fā)黃。
　　3.應用RNA干擾的方法抑制蘋果中MdBAK1s基因的表達，并獲得MdBAK1s表達受抑制的轉基因愈傷組織，初步觀察其表型特征，發(fā)現(xiàn)表達受抑制的轉基因愈傷組織顏色與

4、對照相比較淺。
　　4.研究了超表達 MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織與對照愈傷組織在不同時期生長量的差異，結果表明生長15 d后超表達MdBAK1-1的轉基因蘋果愈傷組織的生長量明顯高于對照，是對照生長量的2.3倍。
　　5.研究了在不同濃度BR處理下超表達MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織與對照愈傷組織生長量的差異，結果表明當BR濃度為1.0 nmol/L時可促進蘋果愈傷的生長，隨著BR濃度的不斷增加會抑制蘋果愈傷的生

5、長，但當 BR濃度為1000 nmol/L時，超表達MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織的生長量比普通愈傷明顯減少。
　　6.研究了超表達 MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織與對照愈傷組織對輪紋病菌的抗性，結果表明超表達MdBAK1s的轉基因蘋果愈傷組織更易感病。
　　7.研究了MdBAK1s表達受抑制的轉基因蘋果愈傷組織與對照愈傷組織在flg22處理下響應flg22信號的指示性蛋白MAPK6的表達差異，結果表明MdBAK1s