西瓜黃瓜乙烯合成及傳導(dǎo)途徑中基因克隆與分析.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文西瓜黃瓜乙烯合成及傳導(dǎo)途徑中基因克隆與分析姓名：曹迪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙越20090620VI實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1根據(jù)ACS基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，分別從西瓜新紅寶突變體和新紅寶基因組DNA中克隆獲得一條具有完整閱讀框的ACS基因序列，二者核苷酸序列100%相同，命名為CLACS。CLACS全長(zhǎng)3385bp，該序列編碼區(qū)長(zhǎng)度為1485bp，編碼494個(gè)氨基酸，與報(bào)道的甜瓜、黃瓜AC

2、S氨基酸序列同源性都在90%以上。CLACS蛋白質(zhì)有7個(gè)保守的區(qū)域，其中第5個(gè)保守區(qū)為ACS酶的活性中心。推測(cè)CLACS的分子量為5.57KD，等電點(diǎn)為6.61，其三維結(jié)構(gòu)與番茄ACS（MMDB:15810；PDB:1IAX）的三維晶體結(jié)構(gòu)十分類似。2根據(jù)ACO基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，以西瓜新紅寶突變體新紅寶基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致、長(zhǎng)度為1522bp的西瓜基因片段，命名為CLACO，包含4個(gè)外顯子，3個(gè)內(nèi)含子，編碼區(qū)序列

3、長(zhǎng)912bp，編碼303個(gè)氨基酸；以黃瓜歐洲8號(hào)秋棚基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致、長(zhǎng)度為1270bp的黃瓜基因片段，命名為CSACO，包含4個(gè)外顯子，3個(gè)內(nèi)含子，編碼區(qū)序列長(zhǎng)909bp，編碼302個(gè)氨基酸。CLACO和CSACO的編碼序列92.3%同源，氨基酸序列93.4%同源。推測(cè)CLACO、CSACO蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)與矮牽牛中的ACO蛋白質(zhì)（MMDB:35451；PDB:1W9Y）的三維晶體結(jié)構(gòu)類似。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，CL

4、ACO和CSACO片段與葫蘆科作物中的同類基因親緣關(guān)系最近。3根據(jù)ETR1基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，以西瓜新紅寶突變體新紅寶基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致、長(zhǎng)度為1633bp的基因片段，命名為CLETR1；以黃瓜歐洲8號(hào)秋棚基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致、長(zhǎng)度為1491bp的黃瓜基因片段，命名為CSETR1。去除內(nèi)含子后，CLETR1和CSETR1編碼序列均為795bp，編碼264個(gè)氨基酸，二者編碼序列96%同源，氨基酸序

5、列98%同源。CLETR1和CSETR1的編碼序列存在明顯的單核苷酸變異，共23個(gè)核苷酸位點(diǎn)存在SNPs，其中5個(gè)SNPs導(dǎo)致4個(gè)編碼氨基酸的改變。4根據(jù)ETR2基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，以西瓜新紅寶突變體新紅寶基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致基因片段，命名為CLETR2；以黃瓜歐洲8號(hào)秋棚基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致的黃瓜基因片段，命名為CSETR2。CLETR2和CSETR2序列長(zhǎng)度均為417bp，屬于編碼區(qū)序列，推測(cè)

6、編碼138個(gè)氨基酸，二者編碼區(qū)序列同源達(dá)95.68%，氨基酸序列98.5%同源。獲得的基因克隆片段編碼的蛋白質(zhì)具有REC信號(hào)保守結(jié)構(gòu)域特征，結(jié)構(gòu)域三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與擬南芥乙烯受體（PDB:1DCF_A）的三維晶體結(jié)構(gòu)相似性極高。5根據(jù)ERS基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，以西瓜新紅寶突變體新紅寶基因組DNA為模板獲得兩個(gè)序列完全相同、長(zhǎng)度為837bp西瓜基因片段，命名為CLERS；以黃瓜歐洲8號(hào)秋棚基因組DNA為模板獲得2個(gè)序列完全一致、長(zhǎng)度為75

7、7bp黃瓜基因片段，命名為CSERS。CLERS和CSERS都由2個(gè)外顯子片段、1個(gè)內(nèi)含子和3UTR區(qū)組成，編碼序列長(zhǎng)度均為291bp，編碼96個(gè)氨基酸，二者編碼區(qū)序列94.85%同源，氨基酸序列93.76%同源，獲得的基因克隆片段編碼的蛋白質(zhì)具有HATPasec保守結(jié)構(gòu)域特征。6根據(jù)西瓜果實(shí)發(fā)育EST文庫中相關(guān)EIN3序列設(shè)計(jì)引物，以西瓜新紅寶突變體新紅寶基因組DNA為模板獲得兩個(gè)序列完全相同、長(zhǎng)度為603bp的西瓜基因片段，命名為C