阿維菌素對(duì)幾種淡水生物毒性及在異育銀鯽體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué).pdf

1、阿維菌素類藥物（Avermectins，AVMs）是由阿維鏈霉菌素通過自然發(fā)酵產(chǎn)生的一類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，包括阿維菌素（Avermectin/Abamectin，AVM/ABM）和伊維菌素（Ivermectin，IVM）等，由于其具有化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎、作用機(jī)制獨(dú)特、優(yōu)異的驅(qū)蟲活性和較高的安全性，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)中。一方面，阿維菌素作為農(nóng)藥，噴灑的農(nóng)藥隨著大氣或是地表徑流等進(jìn)入水環(huán)境；另一方面，阿維菌素作為獸藥，通過多種給藥方式，大部

2、分以原型從糞便中排除，也會(huì)對(duì)水環(huán)境產(chǎn)生影響。近年來，在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面，由于環(huán)境惡化及養(yǎng)殖密度增大，水生生物病害日益嚴(yán)重，國(guó)內(nèi)外水產(chǎn)養(yǎng)殖中已較為廣泛地使用阿維菌素類藥物控制魚虱等寄生蟲疾病的蔓延。目前，國(guó)內(nèi)阿維菌素對(duì)水生生物毒性及其在水生生物體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)報(bào)道較少，因此，本論文建立了水中和異育銀鯽組織中阿維菌素的測(cè)定方法，并對(duì)幾種淡水生物毒性及其在異育銀鯽體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。 論文中首先建立了水中和異育銀鯽肌肉、內(nèi)臟

3、（肝臟、脾臟、腎臟和腸道）、血液組織中阿維菌素的反相-高效液相色譜紫外檢測(cè)法。水中樣品首先利用不溶于水的二氯甲烷提取，經(jīng)無水硫酸鈉脫水干燥，氮?dú)獯蹈?，有機(jī)相溶解、濾膜過濾后進(jìn)行分析。異育銀鯽組織樣品首先用乙腈提取，正己烷去脂肪，經(jīng)無水硫酸鈉脫水干燥，氮?dú)獯蹈?，有機(jī)相溶解、濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜柱采用HypersilC18反相色譜柱，流動(dòng)相：甲醇，水（86：14，V/V），流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)245nm，進(jìn)樣量10μL

4、。本方法水中阿維菌素的檢測(cè)限為0.1mg/L，在2、10、20μg/mL添加濃度水平，阿維菌素的平均回收率為88.10％～94.78％。異育銀鯽肌肉、內(nèi)臟、血液組織中阿維菌素的檢測(cè)限分別為4ng/g、4ng/g、2ng/g，平均回收率均在78.21～94.68％之間。 其次，采用每24h換液試驗(yàn)法，研究了阿維菌素對(duì)幾種淡水生物的急性毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿維菌素對(duì)蚤狀蚤毒性最大，其48h半致死濃度LC50和安全濃度SC分別為0.3

5、7μg/L和0.075μg/L，對(duì)異育銀鯽魚苗和魚種、食蚊魚、鰱魚苗、青蝦、幼蟹、圓田螺96hLC50分別為18.09μg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、19.92μg/L、0.52mg/L、0.25mg/L、0.57mg/L，安全濃度分別為5.998μg/L、0.019mg/L、0.034mgL、4.531mg/L、0.135mg/L、0.129mg/L、0.837mg/L。阿維菌素對(duì)幾種淡水生物的安全濃度范圍較窄，確定給藥

6、劑量時(shí)必須嚴(yán)格加以控制。因此本論文以異育銀鯽魚種的安全濃度0.019mg/L為標(biāo)準(zhǔn)，確定異育銀鯽組織損傷實(shí)驗(yàn)及藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。 再次，采用急性毒性實(shí)驗(yàn)方法，設(shè)定0.01mg/L、0.04mg/L和對(duì)照組研究了阿維菌素對(duì)異育銀鯽的組織損傷。結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.04mg/L濃度組：1）鰓弓軟骨組織邊緣細(xì)胞脫落，軟骨細(xì)胞變性、溶解、形成空泡，部分軟骨細(xì)胞成梭形；鰓小片增粗、彎曲、尖端膨脹，有充血現(xiàn)象，鰓基部上皮細(xì)胞脫落，部分鰓小片發(fā)

7、生融合；2）腎臟中腎實(shí)質(zhì)出血，腎小球及腎小管透明變性，部分腎小管上皮細(xì)胞核溶解消失，中腎管內(nèi)腔有脫落的血細(xì)胞聚集；3）在肝臟中觀察到部分肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，細(xì)胞核膜破裂、核仁溶解消失等現(xiàn)象，在部分魚體中還發(fā)現(xiàn)單細(xì)胞壞死；4）脾臟中，網(wǎng)狀組織增生，組織內(nèi)含有大量的鐵血黃素沉淀，甚至產(chǎn)生纖維樣病變；5）腦組織中，神經(jīng)細(xì)胞空泡變性，神經(jīng)細(xì)胞核溶解，部分細(xì)胞核發(fā)生移位有的核移位到邊緣，死亡魚的腦組織中發(fā)現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞退化。0.01mg/L濃度組的鰓

8、、腎、肝、脾和腦的組織損傷輕微，對(duì)照組鏡檢未發(fā)現(xiàn)任何組織病變。 最后，采用藥浴方式研究了阿維菌素在異育銀鯽體肌肉、內(nèi)臟（肝臟、脾臟、腎臟、腸道）和血液中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。藥浴濃度為0.01mg/L，每24h換液1次，持續(xù)28天，第29天開始換空白水，持續(xù)14天。通過對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析可知，阿維菌素均能在異育銀鯽的肌肉、內(nèi)臟和血液組織中富集，但不同組織對(duì)AVM的富集能力不同，AVM在內(nèi)臟中的蓄積能力比較強(qiáng)，而在肌肉中的蓄積能力比