以秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)RT130品系為模式生物的環(huán)境雌激素活體篩選方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、環(huán)境雌激素是指能夠干擾生物體內(nèi)激素代謝平衡，從而影響生物體生長、發(fā)育、繁殖等生理功能的外源性化學物質(zhì)。1996年以來，環(huán)境中的雌激素類物質(zhì)造成動物生殖畸變、生殖異常以及人精子數(shù)減少等現(xiàn)象，已經(jīng)引起了世界各國的廣泛重視。秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)是一種國際公認的模式生物，易于培養(yǎng)，抵抗環(huán)境壓力的能力極強，已廣泛地應(yīng)用于環(huán)境毒理學研究。RT130品系線蟲是由卵黃原蛋白基因vit-2調(diào)控報告基因綠色熒光蛋白g

2、fp的基因重組秀麗隱桿線蟲。該品系線蟲受到紫外光或藍光激發(fā)后腸道處能夠發(fā)射強烈綠色熒光，可直接通過熒光顯微鏡觀察，熒光信號的強弱可以表征外界雌激素的水平。本文利用RT130品系線蟲建立了雌二醇(E2)濃度與熒光強度之間的劑量-效應(yīng)標準曲線回歸方程，初步構(gòu)建了環(huán)境雌激素的活體篩選方法。該篩選方法可應(yīng)用于實驗室內(nèi)單一目標污染物雌激素當量的測定以及環(huán)境中不同水體的綜合雌激素效應(yīng)的實時監(jiān)測。
　　(1)在不同濃度的E2溶液中暴露后，報告基

3、因gfp在轉(zhuǎn)基因線蟲的腸道處表達，從而發(fā)出熒光信號，且gfp表達、熒光信號的強弱與雌激素含量呈正相關(guān)，熒光信號的強弱具有雌激素依賴性。根據(jù)E2的暴露濃度與熒光信號強度之間的關(guān)系建立的標準曲線回歸方程：y=4.8165e0.22(In(1E12x)/2.3026)(R2=0.9871)該活體篩選方法敏感性高，可篩選出10-10g/L水平的雌激素類物質(zhì)。
　　(2)利用上述方程可以對單一目標污染物的雌激素效應(yīng)進行評價。久效磷、雙酚A、

4、多氯聯(lián)苯和氯化汞表現(xiàn)出了顯著雌激素效應(yīng)，而林丹、氨基脲和三丁基錫沒有表現(xiàn)出雌激素效應(yīng)。這一結(jié)果與國內(nèi)外研究一致，驗證了該環(huán)境雌激素篩選方法的準確性。根據(jù)E2標準曲線回歸方程，得到四種污染物的雌激素當量因子，其雌激素效應(yīng)為：氯化汞＞雙酚A＞多氯聯(lián)苯＞久效磷。
　　(3)環(huán)境中不同水體的激素類物質(zhì)組成復(fù)雜，不同的污染物之間可能存在協(xié)同、加合和拮抗等多種效應(yīng)。
　　利用轉(zhuǎn)基因秀麗隱桿線蟲RT130品系建立的環(huán)境雌激素活體篩選方法可

5、以應(yīng)用于環(huán)境不同水體中雌激素水平的監(jiān)測，線蟲的熒光強度可以表征環(huán)境中多種復(fù)合污染物的綜合雌激素效應(yīng)：海泊河污水處理廠進水、沉砂池出水、初沉池出水、MSBR(Membrane Sequencing Batch Reactor)處理出水、生物轉(zhuǎn)盤出水和終排水的雌激素當量分別為3.48×10-7g/L、9.36×10-7g/L、3.30×10-7g/L、1.30×10-6g/L、3.67×10-7g/L和3.60×10-6g/L。麥島污水處理

6、廠進水、沉砂池出水、沉淀池出水和終排水的雌激素當量分別為3.29×10-7g/L、2.73×10-6g/L、2.28×10-5g/L和9.35×10-7g/L。
　　小澗西垃圾填埋場滲濾液(0.5％)、MBR(Membrane Biological Processor)處理后樣品(0.5%)和終排水的雌激素當量分別為3.89×10-10g/L、1.95×10-8g/L和3.66×10-8g/L。青島市第二海水浴場的雌激素當量為5.

7、98×10-12g/L；海泊河入?？诤Ｋ拇萍に禺斄繛?.16×10-6g/L；墨水河入?？诤Ｋ拇萍に禺斄繛?.83×10-6g/L；婁山河入?？诤Ｋ拇萍に禺斄繛?.03×10-9g/L。
　　綜上所述，本文利用轉(zhuǎn)基因秀麗隱桿線蟲RT130品系初步構(gòu)建了一個環(huán)境雌激素的活體篩選方法，利用該體系可以對單一目標污染物的雌激素水平進行評價，也可以監(jiān)測環(huán)境中多種復(fù)合污染物的綜合雌激素效應(yīng)。
　　度可以表征環(huán)境中多種復(fù)合污染物的綜

8、合雌激素效應(yīng):
　　海泊河污水處理廠進水、沉砂池出水、初沉池出水、MSBR(Membrane Sequencing Batch Reactor)處理出水、生物轉(zhuǎn)盤出水和終排水的雌激素當量分別為3.48×10-7g/L、9.36×10-7g/L、3.30×10-7g/L、1.30×10-6g/L、3.67×10-7g/L和3.60×10-6g/L。
　　麥島污水處理廠進水、沉砂池出水、沉淀池出水和終排水的雌激素當量分別為3.2

9、9×10-7g/L、2.73×10-6g/L、2.28×10-5g/L和9.35×10-7g/L。
　　小澗西垃圾填埋場滲濾液(0.5%)、MBR(Membrane Biological Processor)處理后樣品(0.5%)和終排水的雌激素當量分別為3.89×10-10g/L、1.95×10-8g/L和3.66×10-8g/L。
　　青島市第二海水浴場的雌激素當量為5.98×10-12g/L;海泊河入?？诤Ｋ拇萍に禺?/p>