基于秀麗隱桿線蟲的抗脂肪堆積益生菌篩選及四株新物種鑒定.pdf

1、肥胖問(wèn)題日益加劇，威脅著人類的健康。益生菌的作用逐漸被人們重視，而篩選抗脂肪堆積的益生菌有望應(yīng)用于減緩肥胖問(wèn)題。目前使用的益生菌主要是乳酸菌，而更多的益生菌有待于進(jìn)一步發(fā)掘。海洋中微生物多樣性非常豐富，可以作為益生菌的來(lái)源。本文用從海洋生物牡蠣的內(nèi)臟中分離到的海洋菌以及從泡菜中分離到的乳酸菌喂養(yǎng)秀麗隱桿線蟲，對(duì)抗脂肪堆積益生菌進(jìn)行篩選。另外，海洋中存在很多潛在新菌，本文對(duì)四株海洋新菌進(jìn)行了多相分類，豐富了微生物資源。本論文取得如下成果:

2、
　　篩選到一株能使線蟲脂肪堆積減少的海洋菌ML182（Olleya marilimosa）。以秀麗隱桿線蟲為篩選模型，選取從采集于威海國(guó)際海水浴場(chǎng)(37°31′51.09″N，122°2′43.76″E)的牡蠣內(nèi)臟中分離到的32株海洋細(xì)菌、從泡菜樣品中分離到的18株細(xì)菌（其中有6株乳酸菌）、海洋微生物資源庫(kù)中的8株細(xì)菌和本文鑒定的4株菌為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，經(jīng)喂食研究發(fā)現(xiàn)，篩選自牡蠣內(nèi)臟中的海洋菌ML182（Olleyamarilimos

3、a）能夠使線蟲體內(nèi)脂肪堆積減少，滅活的海洋菌ML182也能起到同樣的效果。因此選取該菌為候選益生菌。
　　對(duì)秀麗隱桿線蟲喂食海洋菌ML182（Olleya marilimosa）后體內(nèi)生理生化反應(yīng)和脂肪合成與分解相關(guān)基因進(jìn)行了分析。檢測(cè)分析表明，海洋菌ML182對(duì)秀麗隱桿線蟲各項(xiàng)生命體征無(wú)影響，無(wú)毒性，僅使得秀麗隱桿線蟲體內(nèi)脂肪堆積減少。RT-qPCR結(jié)果顯示，秀麗隱桿線蟲體內(nèi)與脂肪合成有關(guān)的酶基因fasn-1、pod-2、fat

4、-5、fat-6和fat-7下調(diào)，與脂肪酸β-氧化有關(guān)的酶acs-2上調(diào)，代表喂食海洋菌ML182的線蟲脂肪合成減少。
　　完成了四株海洋新菌的多相分類，確定了四株菌的分類地位。
　　YH6T是從中國(guó)威海沿海沉積物中分離得到的一株新的兼性厭氧菌，為革蘭氏陰性。唯一呼吸醌醌型為Q-8，主要脂肪酸(＞10％)為C16:0和summed feature3(C16:1ω7c/iso-C15:02-OH)。極性脂成分為磷脂酰甘油、磷脂

5、酰乙醇胺、心磷脂和其他一些未知的脂質(zhì)（磷脂、脂和磷氨基脂）。基因組的G+C含量為46.5 mol％。系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上和YH6T最相近的物種為Vibrio variabilis（16S rRNA序列有92.99％相似性），其次為Paramoritella alkaliphila(92.55％)、Pseudoalteromonas aurantia(92.20％)和Pseudoalteromonas citrea(92.20％)。系統(tǒng)發(fā)生學(xué)分析

6、以及生理生化特征表明，YH6T代表γ變形菌綱，交替單胞菌目的一個(gè)新屬。建議命名為象牙白運(yùn)動(dòng)單胞菌（Motilimonas eburnea gen.nov.，sp.nov.），模式菌株為YH6r(=KCTC42594 T=MCCC lH00122T)。
　　017T是以中國(guó)海南省陵水縣海岸的芋根江蘺為材料，分離得到的一株新的兼性厭氧菌，呈桿狀，革蘭氏陰性。對(duì)017T16S rDNA進(jìn)行分析顯示，017T與Teredinibacter

7、 turnerae T7902T相似性最高，為94.4％。017T主要極性脂為磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、氨磷脂及一些其它未知脂類。主要脂肪酸(＞10％)為C16:0、C18:1ω7c、 summed feature3(C16:1ω7c/iso-C15:02-OH），含有唯一呼吸醌Q-8。017T的G+C含量為40.2 mol％。16S rDNA序列分析及生理生化特征表明017T是纖維弧菌目，纖維孤菌科的新屬。命名為居紅藻裂解瓊膠菌(Ag

8、arilytica rhodophyticolagen.nov.，sp.nov.)，模式菌株為017T(=KCTC42584T=MCCC lH00123T)。
　　菌株WDS2A16aT是從文登鹽場(chǎng)分離得到的一株革蘭氏陰性菌。WDS2A16aT的極性脂組分包括2種未知的磷脂(phospholipid，PL)、2種未知的氨基脂（Aminolipid，AL）和5種未知的脂質(zhì)(lipid，L)。WDS2A16aT的DNA G+C含量為4

9、7.8 mol％。對(duì)16 SrRNA基因序列(1457 nt)進(jìn)行比對(duì)分析表明與WDS2A16aT最為相近的菌株為Methylobacter marinus(90.61％)。WDS2A16aT代表γ變形菌綱的一個(gè)新屬將其命名為鹽場(chǎng)喜鹽菌(Salinibius halmophila gen.nov.，sp.nov.)。模式菌株為WDS2A16aT(=KCTC52225T=MCCC lH00139T)。
　　菌株E85T是從文登鹽場(chǎng)沉

10、積物中分離到的一株革蘭氏陰性菌。對(duì)16SrRNA基因序列(1461nt)進(jìn)行比對(duì)分析表明與E85T最為相近的菌株為Spiribactersalinus(97.26％)。E85T的16S rDNA與鄰近菌株的相似度都低于98％，而且發(fā)育樹顯示E85T形成了一個(gè)獨(dú)立的分枝。綜合表型、分子進(jìn)化分析、生理生化分析結(jié)果，認(rèn)為E85T代表一個(gè)新的物種，并建議將其命名為喜鹽螺旋桿菌（Spiribacter halobium sp.nov.），模式菌株