利用ISSR標(biāo)記構(gòu)建紅花檵木品種(品系)指紋圖譜.pdf

1、本研究以41個紅花檵木品種(品系)為實驗材料，利用改良CTAB法提取基因組DNA，建立了ISSR-PCR擴增的最佳反應(yīng)體系；利用ISSR標(biāo)記技術(shù)，構(gòu)建了不同品種(品系)的指紋圖譜。主要研究結(jié)果如下：
　　 在單因素設(shè)計的基礎(chǔ)上，得出了紅花檵木ISSR最佳反應(yīng)體系，即20μL的反應(yīng)體系：DNA模板50ng，引物0.5μmol/L，Taq酶1U，dNTP0.24mmol/L，1×PCRbuffer，Mgcl21.5mmol/L；IS

2、SR-PCR程序為：預(yù)變性94℃3min，變性94℃45s，退火51℃-57℃1min，72℃1.5min共35個循環(huán)，72℃總延伸5min后終止反應(yīng)，于4℃保存。
　　 從60個引物中，篩選出14個引物用于品種(品系)的遺傳多樣性檢測和指紋圖譜構(gòu)建。14個引物共擴增出203條帶，其中多態(tài)性帶為148，多態(tài)性帶的比例為72.9％。41份材料之間的遺傳相似范圍在0.626-0.926之間，平均值為0.75。用NTSYS-pc(2.

3、10e版)軟件進行UPGMA聚類分析，獲得聚類樹形圖。以0.72為閾值可以將41份品種(品系)劃分為2個類群；以0.74為閾值可劃分為5個類群。聚類結(jié)果與侯伯鑫先生的形態(tài)分類系統(tǒng)中的3大類分類相吻合，同時也反映出紅花檵木品種(品系)類型的演變與發(fā)展，傳統(tǒng)品種(品系)與新育成的品種(品系)有分別聚類的趨勢，其中出現(xiàn)了大類之間的過渡類型。隨著GS值增大，聚類的趨勢與紅花檵木表型分類不完全一致。
　　 引物ISSR62對41個紅花檵木