犬α-干擾素的表達(dá)及其治療犬病毒性腸炎臨床療效觀察.pdf

1、犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus， CPV)為單鏈DNA病毒，基因組全長(zhǎng)5323 nt，只含有3個(gè)讀碼框，分別編碼為VP1(70～90ku)、VP2(62～76ku)和VP3(39～69ku)，其中VP2是構(gòu)成衣殼蛋白的主要部分。它是一種自主性復(fù)制病毒，主要引起犬心肌炎、出血性腸炎和肺病變，并導(dǎo)致犬的大量死亡，給養(yǎng)犬業(yè)和寵物業(yè)帶來(lái)巨大損失，因此早期預(yù)防和及時(shí)治療十分重要。
　　 采用犬干擾素治療犬病毒性疾病是一種有

2、效的手段，干擾素通過(guò)阻斷病毒的繁殖及復(fù)制，以及刺激動(dòng)物產(chǎn)生足夠的內(nèi)源性干擾素達(dá)到消除病毒的作用，治療犬病毒性腸炎具有良好的臨床療效。但由于犬干擾素價(jià)格昂貴，并且獸醫(yī)們對(duì)它的認(rèn)識(shí)仍然不夠，目前，犬干擾素用于各種類(lèi)型病毒感染犬治療效果的大樣本研究報(bào)道較少。因此本課題研究了犬的α干擾素，成功構(gòu)建了pET32a—CaIFN—α重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL—21中，經(jīng)IPT6誘導(dǎo)后，表達(dá)出了重組犬α干擾素，表達(dá)產(chǎn)物為—N—端含His的37ku左右

3、的融合蛋白。經(jīng)薄層掃描分析目的蛋白表達(dá)量占菌體總蛋白的30％。Western blotting印跡證實(shí)了表達(dá)產(chǎn)物具有抗原抗體結(jié)合能力。并通過(guò)提取包涵體法和鎳瓊脂糖凝膠法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行變性、純化和復(fù)性，獲得了純度較高的重組犬α干擾素。
　　 另一方面，對(duì)犬α干擾素在臨床上的應(yīng)用進(jìn)行了研究，研究犬均來(lái)自北京市昌平區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心寵物門(mén)診。對(duì)就診于寵物門(mén)診且患病毒性腸炎的犬542例，隨機(jī)分成兩組，對(duì)照組256例，予口服慶大霉素、